PROTOCOLO ORAC-FL

MIEL

1. Preparacin de extractos de miel:

- Pesar 1g de muestra de miel y agregar 3g de agua destilada.
- Poner en el ultra sonido el tiempo que sea necesario para homogeneizar la mezcla.
- Preparar una coleccin de 5 eppendorf, para cada extracto, agregando los siguientes
volmenes de miel y de buffer.

V miel [uL] V buffer [uL]
Eppendorf 0 0 1000
Eppendorf 1 40 960
Eppendorf 2 80 920
Eppendorf 3 120 880
Eppendorf 4 160 840
Eppendorf 5 200 800


2. Preparacin de Fluorescena:

- tomar una masa de Fluorescena entre 1 mg y 5 mg, agregar 1mL de buffer, homogeneizar en
vortex.
- de la solucin preparada en el paso anterior tomar 2[uL] y poner en un segundo eppendorf,
agregar 998 [uL] de buffer y homogeneizar en vortex
-Finalmente agregar un volumen de solucin de Fluorescena del segundo eppendorf a un
matraz aforado de 10 [mL].













masa [mg] C1 [M] C2 [M] V. Alcuota [uL]

3. Preparacin de AAPH (3mL):

- tomar aproximadamente 117.06 mg del compuesto.
- agregar un volumen de buffer determinado por la siguiente ecuacin:

= [] 0,02563[

]




4. Preparar la celda:

- Agregar 200 [uL] de agua a las celdas de las orillas.
- Agregar los 150 [uL] de solucin de Fluorescena.
- Agregar los 25 [uL] de extracto de miel.
- Calentar en BioTek durante 7 minutos hasta 40C.
- Agregar 25 uL de solucin de AAPH recin preparada a cada una de las celdas.


5. Registro de celdas:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua
B Agua Agua
C Agua Agua
D Agua Agua
E Agua Agua
F Agua Agua
G Agua Agua
H Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua

6. Observaciones: .............................................................................................................................

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Fecha:

Horas de Trabajo:


Camilo Maliqueo Gabriela Maturana
masa [mg] V. Buffer [mL]