DETERMINACIN DE PROTENAS POR EL MTODO DE BRADFORD

(no sacar esta hoja)

Blanco: Este tubo no contiene protena, se reemplaza la muestra por agua y se le agrega el
correspondiente volumen de reactivo. Se realiza para determinar la absorbancia del reactivo, este valor
se descuenta de la absorbancia del resto de los tubos.
Curva de caliraci!n: Para su realizacin se utilizar la solucin testigo de concentracin conocida.
!on la medida de absorbancia de cada tubo y conociendo la cantidad de protenas "ue contiene cada
uno de los tubos, es posible realizar una curva de calibracin (gr#ico $%&% vs g de protena). Es
necesario realizarla cada vez "ue se procesen las muestras. 'a concentracin del TESTI"O es #$$
%&'l(
Mue)*ra inc!%ni*a: se procesa en simultneo y en las mismas condiciones "ue la curva de
calibracin. El tubo contiene la muestra y la misma cantidad de reactivos "ue los anteriores. Para
conocer la cantidad de protenas de la muestra (g), se determina la absorbancia de la misma y se
interpola en la curva de calibracin. Cada %ru+o +roce)a una )ola Mue)*ra inc!%ni*a ,A o B-(
Pro*ocolo:
Tuo ./O
,l-
Te)*i%o
,l-
Mue)*ra
A o B
,l-
Reac*ivo de
Brad0ord
,'l-
Pro*e1na
,%-
A)orancia
a 232 n'
Blanco 4$$ 55555555 5555555555 /
# 62$ #2$ 5555555555 /
/ 7$$ 7$$ 5555555555 /
7 5555555
5
4$$ 5555555555 /
Mue)*ra
A o B
5555555
5
5555555 4$$ /
Procedi'ien*o:
Pi+e*ear en el orden de la *ala:
( Primero el A"8A con la pipeta de ) ml (rotulada ./O).
( El TESTI"O con otra pipeta de ) ml (rotulada T) respetando el orden de los tubos* ),+ y ,.
( 'uego con otra pipeta de ) ml (rotulada A o B seg-n corresponda) la M8ESTRA INC"NITA en su
tubo correspondiente.
(Por -ltimo, el reac*ivo de Brad0ord con la pipeta de % ml (rotulada R).
5 Me9clar el contenido de los tubos.
( .ncubar 2 'inu*o) a *e'+era*ura a'ien*e(
/bservar el color de la curva de calibracin y comparar con el color de la muestra incgnita con la
curva. 0e esta manera estimar los valores de protenas de la muestra incgnita. 'uego leer en el
#otocolormetro tanto la curva y como la muestra incgnita. !ompletar la tabla con los valores de
absorbancia y realizar el %r:0ico A232 v) % de +ro*e1na.
.nterpolar en el gr#ico el valor de absorbancia de las muestras incgnita en dicha curva y determinar
% de +ro*e1na de las muestras y en luego determinar su concentracin %&'l. $nalizar si e1iste
concordancia con el valor estimado visualmente.
Al 0inali9ar el *raa;o +r:c*ico e) IMPORTANTE <ue *odo el 'a*erial <uede li'+io = en )u lu%ar(
Se enjuagarn las pipetas con agua. Para limpiar los tubos de 2rad#ord los alumnos contarn con una
pizeta con etanol. Primero se descartar el contenido de los tubos en las piletas. 'uego se enjuagarn
los tubos con un poco de etanol y por -ltimo con abundante agua.