Universidad Andrs Bello

Facultad de Ciencias de la Salud

Departamento de Ciencias Biolgicas
Laboratorio de Biologa Celular BIO !"
#raba$o %r&ctico n' "
(Organi)acin Subcelular*
Introduccin
Se cree que la vida en la tierra hace mucho tiempo comenz debido a una integracin
espontanea de molculas, creando lo que actualmente conocemos como la unidad
bsica, estructural y funcional de todos los seres vivos llamada clula. Los precursores en
adoptar este concepto como tal fueron clulas simples y sencillas conocidas como
procariontes bacterias!, gracias a estos se dio paso a formas ms comple"as de vida
como es el caso de las clulas eucariontas, que a diferencia de las primeras poseen
n#cleo manteniendo as$ el material gentico aislado de otros compartimientos celulares.
%dems la clula eucarionta contiene una gran variedad de organelos para realizar
funciones espec$ficas por e"emplo mitocondrias produccin de energ$a!, cloroplastos
fotos$ntesis!, ret$culo endoplasmatico rugoso s$ntesis prote$nas! y liso s$ntesis de
l$pidos!, lisosomas digestin celular!, pero&isoma degradacin per&ido de hidrogeno!
entre otros.
% travs del tiempo, la microscopia subcelular dio abasto para la visualizacin de
estructuras en forma ms detallada y concisa, pero no para definir su funcionalidad.
'ebido a esta inquietud se adoptaron tcnicas que pudieran permitir el aislamiento de
estos componentes celulares, obteniendo as$ una funcin espec$fica para cada organelo y
comprendiendo como funciona esta gran maquinaria llamada clula.
(na de las tcnicas ms usadas es el fraccionamiento celular que consiste en dos etapas)
homogeneizacin y fraccionamiento propiamente tal. La homogeneizacin es la ruptura de
la clula en sus componentes ms peque*os y el fraccionamiento una serie de
centrifugaciones sucesivas obtenindose una sedimentacin de cuerpos celulares,
dependiendo de su densidad.+!
Hiptesis
,n el primer precipitado de la centrifugacin, no encontraremos solamente n#cleos
celulares.
%l ser rotas las clulas, no todos los organelos celulares conservarn intactas sus
propiedades bioqu$micas originales.-!
Objetivos
.b"etivo general)
/onocer y comprender correctamente el fraccionamiento subcelular a travs de las
tcnicas empleadas en este mtodo tales como la homogeneizacin y centrifugacin.
'escubrir las tcnicas de homogeneizado e&istentes.
,ntender los principios en los que se basa la tcnica de centrifugacin.
0econocer el concepto de molculas marcadoras y comprender su utilidad para la
evaluacin del fraccionamiento celular
Lograr manipular de manera correcta el ob"etivo de inmersin del microscopio y
adems comprara una muestra fresca de una fi"ada.
1ateriales y mtodos

0esultados
,&perimento n2 +
3+
3ellet 4 + ml de buffet
fraccin nuclear!

3-
S+

3-
,&perimento n2 -
Suspensin de n#cleos visto a microscopio a 567
Suspensin de n#cleos con azul de tripan visto en el microscopio a 567
Sobrenadante fraccin
microsomal!
3ellet 4 +ml buffet
fraccin mitocondrial!
Sobrenadante de p+, el cual
se vuelve a centrifugar.
8raccin enriquecida en mitocondrias 3- vista en el microscopio a 567
8raccin enriquecida en mitocondrias 3- ms azul de tripn vista en el microscopio a 567
,&perimento n2 9
:ubos colocados a un ba*o termoregulado a 9;2 /
,n el tubo blanco no se presentacin cambios.
,n el tubo 3+ se presento una decoloracin.
,n el tubo 3- cambio el color celeste a un celeste verde agua.
,n el tubo S+ cambio el tono del celeste a uno mas claro.
'iscusin
0otulado :ubo Succinato
6.+ 1
%zul de
metileno
%gua
microsomal
<aselina
= >lanco + ml - gotas + mL - mL
3+ 8raccin
nuclear
+ml - gotas + mL - mL
3- 8raccin
mitocondrial
+ml - gotas + mL - mL
S+ 8raccin
microsomal
+ml - gotas + mL - mL
/onclusin
>ibliograf$a
+! guia