LA INOCULACIN Y FERMENTACIN

Medios esterilizados (pH 6,5) en tres matraces batch fueron inoculados con 3 ml
de inculo, bajo un flujo de aire laminar y se mantienen en la incubadora de
agitacin orbital (REMI Instruments) a 220 rpm durante 164 horas.
LAS MEDICIONES ANALTICAS
Las muestras de todos los 3 matraces batch fueron examinados a los 41
st
, 82
nd
,
123
rd
y 164th minutos para encontrar el nivel de actividad de la produccin de
penicilina G, mediante RP-HPLC (Shimadzu Corporation). La columna utilizada en el
anlisis fue C18-Hypersil Octadodecyl silano (longitud 25 cm, dimetro 0,46 cm). La
fase mvil polar contena ortofosfato dihidrgeno de potasio y 45% de acetonitrilo
(80:20) a pH 4,6 y la velocidad de flujo fue utilizado a 1,4 ml / min. En el caso de
procedimientos de fermentacin estndar se utiliz metanol como fase mvil
secundaria en lugar de acetonitrilo (60:40). El detector utilizado fue detector de UV.
El detector era de tipo fijo y La fuente luminosa era una D2 (deuterio) de la
lmpara.



RESULTADOS Y DISCUSIN

En la fermentacin de la penicilina, los medios se esterilizan a 121 C
durante 30 min; pero en nuestro estudio, el medio se esteriliz a 121
C durante diversos intervalos de tiempo entre 25 y 55 minutos y el
anlisis se realiz a varios intervalos de tiempo de fermentacin, 41
st
,
82
nd
, 123
rd
y 164
th
minutos, respectivamente. El anlisis incluy la
deteccin de la produccin de penicilina G y utilizacin de precursor
de cido fenoxiactico (POAA) en los medios. Los medios esterilizados
a 121 C durante 45 minutos han mostrado la mxima produccin de
penicilina G y la utilizacin de POAA en todo momento (41, 82, 123 y
164 minutos) de anlisis. El anlisis se llev a cabo en HPLC y el pico
de elucin para POAA se obtiene alrededor de terceros minutos y el
pico de elucin para la Penicilina G alrededor decimoquinta minutos.

Anlisis del minuto 41
st


Las 5 serie de fermentacin sometidos a matraz que contienen diferentes
tiempos de medios esterilizados fueron tomados del agitador en el minuto 41 y
se analizo el nivel de actividad de penicilina G y la cantidad de POAA inutilizado
presente. Los medios esterilizados por 45 minutos se muestran en la Tabla 1. La
actividad de 9,63% ms, de la actividad a los 30 min (tiempo de esterilizacin
habitual). Despus de los 45 min de esterilizacin prolongada hasta los 55 min
conduce al descenso en la actividad. La actividad mostrada por 55 min de medios
esterilizados era slo 32,39% en comparacin con la actividad 45 min
esterilizados en medios fermentativos. El contenido de precursor residual POAA
en medios esterilizados fue ms en 25 minutos, que disminuyeron de forma
constante aun en 45 minutos de medios esterilizados. Los frascos esterilizados
por encima de 45 minutos mostraron un aumento en la acumulacin de POAA.
Los medios esterilizados por 45 minutos mostraron 98,3% POAA menos
acumulado en comparacin con el POAA residual presente en la fermentacin a
55 minutos en medios esterilizados. Figura 1.

S. No Media sterilisation time
(minutes)
Penicillin activity
(1/mL)
Residual POAA (mg/mL)
1 25 1021 8.01
2 30 1329 4.52
3 35 1406 2.191
4 40 1438 2.005
5 45 1457 0.331
6 50 911 10.04
7 55 472 16.76
Table 1: Penicillin activity and residual POAA content in
various sterilization time intervals of 41 minute fermentation
media.