GENETICA BACTERIANA

Griffiths A., Wessler S., Lewontin R., Gelbart W., Suzuki D., Miller J. (2005) Introduction to
Genetic Analysis (8
th
ed). W.H. Freeman and Company, New York. QH430/I59/2005
Las bacterias poseen todos
los componentes requeridos
para reproducirse, cosechar
y utilizar la energa del
ambiente.
Se reproducen rpidamente,
una clula da origen a dos
idnticas en cada ciclo de
divisin, produciendo un
colonia de individuos
idnticos.
Suspensin
celular
bacteriana
Suspensin plaqueada en
caja con agar
Incubacin
1 2 das
Caja Petri
con agar
Clulas
individuales
invisibles a
simple vista
Colonias visibles procedentes
de una clula individual
(mismo genotipo y fenotipo)

Prototrficas : Son bacterias silvestres que pueden crecer en medios
mnimos (sales inorgnicas, fuente de carbono
glucosa y agua). A partir de estas sustancias mnimas
las bacterias pueden construir todas las macromolculas
necesarias para vivir.
Auxotrficas : Las bacterias son generalmente mutantes y no pueden
crecer a menos que se adicionen al medio nutrientes
especficos (Adenina, biotina, metionina, etc.)
Resistencia o susceptibilidad a antibiticos
Mutantes bacterianas
Marcadores Genticos
Requiere biotina como suplemento

Requiere arginina como suplemento
Requiere metionina como suplemento

No puede utilizar lactosa como fuente de carbono
No puede utilizar galactosa como fuente de carbono
Resistente al antibitico estreptomicina
Susceptible al antibitico estreptomicina
Medio mnimo: medio sintetico bsico para el crecimiento bacteriano
sin nutrientes adicionales
Transferencia
gentica horizontal
Transferencia
gentica vertical
Mecanismos de Transferencia Gentica Horizontal
La bacteria donadora es la que contribuye con una
fraccin de material gentico a la bacteria receptora
El fragmento de DNA donado es llamado exogenota
y el genoma receptor el endogenota
Una bacteria que contiene ambos DNAs, el
exogenota y el endogenota es merocigoto
a
+
b
+
a b
Exogenota
Endogenota
Material Gentico Transferido
DNA bacteriano
DNA plasmdico
DNA viral
E. coli
Pili
F
+
F
+
(Factor de fertilidad)
F
-
Plsmido F
*Plsmido F codifica alrededor de 100 genes
William Hayes, 1953
Conjugacin bacteriana
GENOTIPO
FENOTIPO
Es el plsmido F el responsable de fenotipo
WT despus de la Conjugacin?
La frecuencia de transferencia de F es mayor a la
frecuencia de recombinantes para los marcadores genticos
que se estudiaron!
F +
F
Estos marcadores genticos residen en el DNA
del cromosoma bacteriano
Para la transferencia de
DNA del cromosoma
bacteriano mediante
conjugacin, se necesita la
INSERCIN del plsmido
F al cromosoma generando
una clula Hfr
High Frequency of
Recombination
El bajo nivel de transferencia de marcadores genticos se debe
a la presencia de unas pocas celulas Hfr en la poblacin F+
Integracin de F al
cromosoma bacteriano
La insercin de plsmido F en el cromosoma bacteriano puede ocurrir en
diferentes lugares mediante recombinacin (sitios IS y Tn1000 )
Integracin del plsmido F al cromosoma
O
O
Orientacin
del origen O
Dependiendo de la orientacin del Origen de replicacin de F
durante la integracin, comenzarn a transferirse los
marcadores genticos
Experimentos de conjugacin interrumpida
Wollman y Jacob, 1957
F
-
str
r
Hfr str
s
Str +
azi
s
ton
s
lac

gal

azi
r
ton
r
lac
+
gal
+
Despus de 2 h
algunos exconjugantes
se convierten en Hfr
F d c b a O
Orden de Transferencia de Marcadores Genticos
Dos eventos de recombinacin
Generalmente la Conjugacin se interrumpe antes de que se
transfiera todo el Hfr; el exogenota es lineal y el endogenota es
circular. Ocurren dos eventos de recombinacin.
a
+
a

a
+
+
a

No viable
Viable
No viable
Merocigoto
Recombinacin entre exogenote y endogenote
Doble entrecruzamiento !
Recombinantes
recprocos
Conclusiones:

1. El cromosoma de E. coli es circular.
2. El plasmido F es circular.
3. La orientacin en la que se intergra F al
cromosoma determina la polaridad del cromosma
Hfr.
4. Un extremo de F integrado es el Origen donde
comienza la transferencia y el otro extremo es el
trmino que NO se transfiere a menos que antes
se haya transferido TODO el cromosoma Hfr.
Resumen de la Conjugacin bacteriana
1. Eco RI
2. Sa/I
3. tetracycline resistance
4. origin of replication
5. Pstl
6. amplicillin resistance
7. Pst I
8. EcoRI
9. SalI
PLSMIDOS
Elementos de ADN extracromosomal, de doble cadena
circular, covalentemente cerrado. Contienen: origen propio
de replicacin, sitios de reconocimiento para enzimas de
restriccin, marcadores de seleccin (resistencia a
antibiticos). Presentes en elevado nmero de copias en la
clula.
CLASIFICACIN DE PLSMIDOS
Por su capacidad de transferencia:
-Conjugativos (a travs de un pili a otra membrana)
-No conjugativos

Por sus efectos fenotpicos:
-Fertilidad (factores F)
-Plsmidos bacteriocinognicos (codifican una protena
txica para otras bacterias que no portan ese tipo de
plsmido)
-Plsmidos de resistencia (factores R)

Por el nmero de copias:
-Relajados (>1000 copias/clula)
-Restringidos (<100 copias/clula)
Episoma (F) : Plasmido F con genes bacterianos
Exconjugante
Donadora
Mapeo por frecuencia de recombinantes
Si seleccionamos leu como marcador:

Podemos medir la distancia entre los
genes porque todos tienen la misma
oportunidad de incorporarse al
cromosoma receptor

La frecuencia de recombinacin indicar la distancia entre los genes
Las posibilidades de recombinacin que existen:
muy poco frecuente
4%
9%
87%
0%
leu
+
arg
-
met
-
4%
leu
+
arg
+
met - 9%
leu
+
arg
+
met
+
87%
leu -- arg 4 u.m. y arg met 9 u.m.
En E. coli, cuatro cepas Hfr donaron los siguientes marcadores
genticos en el orden:

Cepa 1: Q W D M T
Cepa 2: A X P T M
Cepa 3: B N C A X
Cepa 4: B Q W D M

Todas las cepas Hfr strains derivan de la misma cepa F+.

Cul es el orden de los marcadores en el cromosoma original?

(1)
Q
W
D
M
T
P
X
A
C
B
N
(2)
(3)
(4)
Tarea:

1) Se realiz la conjugacin entre una cepa Hfr que es met+ thi+ pur+ con
una cepa F que es met thi pur de manera interrumpida.

Se encontr que met es el marcador que se transfiere ltimo, as que los
exconjugantes se seleccionaron en un medio sin metionina.

Para probar la presencia de los alelos thi+ y pur+ se hizo seleccin en
medios sin estos compuestos, encontrando los siguientes datos:

met+ thi+ pur+ 280
met+ thi+ pur- 0
met+ thi pur+ 6
met+ thi- pur- 52


Determina el orden de estos marcadores en el cromosoma

Calcula la distancia entre los marcadores en unidades de mapa
2) Se aisl una bacteria mutante con fenotipo StrR pero incapaz de usar acetato
como fuente de carbono (ace-). Para determinar dnde mapea el gen responsable
de la mutacin se utiliz la conjugacin con cuatro cepas diferentes donadoras
StrS ace+ Hfr que se muestran. Las flechas indican la posicin y orientacin de F
en cada Hfr.
a) En qu medio seleccionamos los exconjugantes en este experimenmto?
b) Cmo vamos a excluir las clulas donadoras en este experimento?
c) Si se tienen los siguientes resultados, ubica el gen ace en el mapa
(tomando en cuenta el tiempo en minutos).