UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DECANATO
PROYECTO DE TESIS
TTULO : Efecto inhibitorio in Vitro a diferentes concentraciones
del extracto metanlico de Caesalpinia spinosa (Taya)
sobre Leishmania braziliensis peruviana
UTO! (es) : !m"lo ycachi #n$a
%"an %os& "$"sto 'oyano '"(o)
*T!O+#,-O! : 'bl$a. '. Teresa /il0a 1arc2a
*!O3-O *O! :
*!E/#-E,TE -EL %U!-O '#E'3!O /E+!ET!#O
'#E'3!O VO+L %E4E +E,T!O #,VE/T#1+#5,
%E4E -E*!T'E,TO -E+,O
Lambaye6"e7 88 de abri l de 899:.
U,#VE!/#-- ,+#O,L *E-!O !U#; 1LLO
4+ULT- -E +#E,+#/ 3#OL51#/
-E+,TO
1
#. 1E,E!L#--E/:
1. TTULO: Efecto inhibitorio in Vitro a diferentes concentraciones del extracto
metanlico de Caesalpinia spinosa (Taya) sobre Leishmania braziliensis
peruviana
8. *E!/O,L #,VE/T#1-O!:
2.1. "tores: Est. !m"lo ycachi #n$a
Est. %"an %os& . 'oyano '"(o)
2.2. *atrocinador: 'bl$a. '. Teresa /il0a 1arc2a
<. +!!E! *!O4E/#O,L=E/*E+#L#--:
+arrera *rofesional de 3iolo$2a
Es>ecialidad de 'icrobiolo$2a y *arasitolo$2a
?. T#*O -E #,VE/T#1+#5,:
?.@. -e ac"erdo al fin 6"e >ersi$"e : >licada
?.8. -e ac"erdo a la t&cnica de contrastacin: Ex>licati0a
A. !B1#'E, -E #,VE/T#1+#5,: Libre
6. LU1! -E E%E+U+#5,: Laboratorio de 'icrobiolo$2a y *arasitolo$2a
U.,.*.!.1. C Lambaye6"e.
D. -U!+#5, E/T#'-: D meses
:. 4E+E/ -E #,#+#O F TE!'#,+#5,:
8.1. #nicio : 88 de enero de 899:.
8.2. Terminacin : <9 de setiembre de 899:.
G. +!O,O1!' -E T!3%O:
+T#V#--E/
899:
E 4 ' 'y % %l /
4/E -E *L,E'#E,TO
2
!e0isin 3iblio$rHfica I I
Elaboracin del >royecto I I
>robacin del >royecto I
#m>lementacin del >royecto I I
4/E -E E%E+U+#O,
!ecoleccin de m"estras I I
*rocesamiento de m"estras I I
!e$istro de datos I I
nHlisis estad2stico de datos I I
4/E -E +O'U,#++#5,
nHlisis e inter>retacin I I
Elaboracin del informe final I I
*resentacin del informe final I
@9. !E+U!/O/ -#/*O,#3LE/:
@9.@.*ersonal:
*ersonal docente y administrati0o de la 4ac"ltad de +iencias
3iol$icas U.,.*.!.1. C Lambaye6"e.
*ersonal de ser0icio t&cnico del Laboratorio de 'icrobiolo$2a y
*arasitolo$2a U.,.*.!.1. C Lambaye6"e.
@9.8.E6"i>os e #nstr"mentos:
EQUIPOS MARCA
"tocla0e Vertical 'od. ?@A 4,E'
Est"fa TEELLO *!E+#/#O,
Eorno TEELLO *!E+#/#O,
!efri$eradora 4E-
3alan)a -i$ital EI+ELL
+entr2f"$a ',,
Eornilla El&ctrica /U!1E
'icrosco>io binoc"lar ;E#// *!#'O /T!
*i>eta "tomHtica @9 J @99 KL 3!,-
+om>"tadora de Escritorio TO/E#3
+Hmara -i$ital +,O,
MATERI ALES MARCA
*lacas de *etri *#!EI
T"bos de ensayo ta>a rosca *#!EI
'atra) Erlenmeyer *#!EI
3alones *#!EI
*i>etas de @ mL y @9 mL *#!EI
Emb"do *#!EI
Viales *#!EI
LHminas LEELL 3!,-
Laminillas LEELL 3!,-
@9.<.'ateriales y !eacti0os:
3
MATERI AL MARCA
'edio ,o0y 'c,eal ,icolle 'E!+M
/ol"cin /alina 4isiol$ica LU/
*enicilina L3. 'E-!O+M
/tre>tomicina L3. 'E-!O+M
Lidoca2na /EE!4!'
'etanol comercial (+E
<
OE+l) 'E!+M
lcohol de D9N L3. + y ! MF
+olorante de 1iemsa 'E!+M
ceite de +edro 'E!+M
$"a Oxi$enada L3. LMO4!'
$"Oas hi>od&rmicas descartables ,N 8@
y 8A.
TE!U'O
%erin$as descartables de @7 A y @9 mL TE!U'O
+Hmara de ,e"ba"er '!#E,4EL-
Lanceta TE!U'O
l$odn +M4 #,-U/T!#L
*in)as
*a>el Latman ,N <
1otero
/o>orte de Tincin
@9.?.Local:
Laboratorio de 'icrobiolo$2a de la 4ac"ltad de +iencias 3iol$icas.
11. *!E/U*UE/TO:
3ienes PPPPPPPPPPPPPPP PPPPP. S/. 950. 00
'aterial de escritorio PPPPPP PPPPP. /=. @99. 99
- @ millar de >a>el 3ond
- 8A "nid. de flderes 'anila
- ? la>iceros7 8 >l"mones indelebles7 8
correctores7 8 resaltadores7 8
borradores
'aterial de laboratorio PPPPP.. PPPPP. /=. Q99. 99
- A9 "nid. T"bos de ensayo ta>a rosca
- < matraces7 < fiolas
- @ caOa de lHminas >orta y c"bre
obOetos
- @ lb. de a$ar a$ar
- A lb. -e medio ,,,
- *enicilina
- /tre>tomicina
- Lidoca2na
4
'aterial >ara >rocesamiento de datos PPPPP. /=. 8A9. 99
- @ memoria U/3 Min$ston$ @ 13
- 9@ caOa de +- !oom *rinco
- 98 cart"chos tinta >ara im>resora
+anon i*@:99
/er0icios PPPPPPPPPPPPP... PPPPP. S/. 1500. 00
*asaOes y /"b0enciones PPPPPPP. PPPPP. /=. A99. 99
- @ 0iaOe a Tr"Oillo7 9Q d2as
- ViaOes internos: Lambaye6"e C
+hiclayo C -istritos (#nRah"asi7 /alas)
*"blicaciones PPPPPPPPPPP... PPPPP. /=. 899. 99
- *"blicacin de informacin final7 9:
eOem>lares
*r"ebas 'olec"lares PPPPPPPPP. PPPPP. /=. Q99. 99
- #dentificacin de s>. >or *+!
Otros PPPPPPPPPPPPPPP.. PPPPP. /=. 899. 99
- *rocesado de foto$raf2as y
-ia>ositi0as
- #m>re0istos
TOTAL . S/. 2450. 00
@8. 4#,,+#+#5,:
/erH financiado >or los res>onsables del trabaOo de in0esti$acin.
##. *L, -E #,VE/T#1+#5,:
@. !EL#-- *!O3LE'ST#+:
Leishmania braziliensis peruviana es "n >roto)oario dimrfico7
hemofla$elado7 >erteneciente a la familia Trypanosomatidae (orden
Mineto>lastida)7 6"e O"nto con otras 89 es>ecies en el m"ndo7 son
5
ca"santes de la enfermedad conocida como Leishmaniosis (3orda et. al.7
899AT r&0alo et. al 2005). Bsta es "na enfermedad crnica7 de baOa
>ato$enicidad7 alta morbilidad7 metax&nica y )oontica 6"e se caracteri)a
>or com>rometer >iel7 m"cosas y 02sceras de>endiendo de la es>ecie de
Leishmania ca"sante y de la res>"esta inm"ne del h"&s>ed. Esta
>roto)oosis es transmitida >or la >icad"ra de "n insecto flebotomino hembra
del $&nero Phlebotomus7 en E"ro>a7 sia y Sfrica7 y Lutzomyia en m&rica.
La afinidad de este >roto)oario >or los teOidos hace 6"e se manifieste "na
reaccin inflamatoria caracter2stica (/Hnche) et. al. 2004).
La leishmaniosis c"tHnea y m"coc"tHnea es "na enfermedad de alta
>re0alencia en m"chas Hreas tro>icales y s"btro>icales del m"ndo. -escrita
en 8? >a2ses de m&rica7 extendi&ndose del s"r de los Estados Unidos
(Texas) hasta el norte de r$entina. Esta enfermedad constit"ye "n $ra0e
>roblema de sal"d >Ublica >or los altos costos 6"e re>resenta a ni0el
>sicol$ico7 socioJc"lt"ral y econmico y es considerada7 conO"ntamente
con la malaria7 es6"istosomiosis7 filariosis7 tri>anosomiosis y hanseniosis7
como "na de las seis enfermedades tro>icales de mayor im>ortancia en el
m"ndo (m>"ero7 8999T O*/7 @GGQ).
En el *erU la leishmaniosis constit"ye la se$"nda endemia de ti>o
tro>ical y es la tercera ca"sa de morbilidad >or enfermedades transmisibles
l"e$o de la 'alaria y T"berc"losis7 teniendo como )ona end&mica
a>roximadamente el D?V del Hrea total del >a2s7 extendi&ndose a tra0&s de
los ndes y los 0alles interandinos >ara la leishmaniosis c"tHnea y a las
)onas de sel0a alta y sel0a baOa en la leishmaniosis m"coc"tHnea ('#,/7
899QT m>"ero7 8999).
demHs de los >roblemas en si de la enfermedad7 estHn tambi&n los
>roblemas del tratamiento act"al7 >or los efectos sec"ndarios ca"sados >or
los medicamentos "tili)ados en el tratamiento. Los !"#$%!#&'(
)'!"*&'!"'( "sados en el tratamiento de la leishmaniosis c"tHnea
andina (Uta) y como >rimer tratamiento de la leishmaniosis m"coc"tHnea
(Es>"ndia) a dosis ele0adas y=o >rolon$adas >"ede ca"sar nH"seas7
0mitos7 >r"rito7 fiebre7 cefalea7 mareos7 insomnio7 ner0iosismo7 shocR
>iro$&nico7 edema y her>es )ster. Es tambi&n m"y conocida s" alta
cardiotoxicidad y7 a 0eces7 acom>a(ada de nefrotoxicidad. La !+%"',#-#!
B. "sado en caso de falla consec"ti0a del tratamiento con antimoniales en
la leishmaniosis m"coc"tHnea y en los casos de com>romiso m"coso
se0ero7 es m"y conocido >or s"s efectos colaterales7 siendo los mHs $ra0es
la a>aricin de shocR anafilHctico7 arritmias card2acas7 falla he>Htica7
mial$ias y con0"lsiones (!oOas7 et. al. 899A7 '#,/ 899Q). /e conoce
ademHs7 6"e m"chos >obladores "san >ara s" tratamiento7 ya sea >or s"
desconocimiento " otro moti0o7 todo ti>o de a$entes corrosi0os7 estando
entra los mHs extremos el "so de >ol0o de >ilas7 Hcido de bater2as7 >etrleo
y aceite 6"emado.
8. *!O3LE':
WTendrH efecto inhibitorio in Vitro a diferentes concentraciones el
extracto metanlico de Caesalpinia spinosa (Taya) sobre el crecimiento de
Leishmania braziliensis peruvianaX
6
<. E#*5TE/#/:
El extracto metanlico de Caesalpinia spinosa (Taya) tiene efecto
inhibitorio in Vitro sobre el crecimiento de Leishmania braziliensis
peruviana.
?. %U/T#4#++#5, E #'*O!T,+#:
La leishmaniosis c"tHnea y m"coc"tHnea es "na enfermedad de alta
>re0alencia en m"chas Hreas tro>icales y s"btro>icales del m"ndo y es la
se$"nda endemia de ti>o tro>ical en el *erU (D?V del territorio nacional)7
ra)ones 6"e la con0ierten en "na entidad de $ran inter&s nacional
(m>"ero7 8999). Es "na enfermedad en la c"al 6"edan aUn m"chas
interro$antes >or resol0er. ,o existe 0ac"na y >ara s" tratamiento se "san
aUn tera>ias de >rinci>ios de si$lo 6"e consisten en sat"rar al c"er>o con
inyecciones de antimonio. demHs7 >or las caracter2sticas $eo$rHficas de la
enfermedad (sel0as y 0alles interandinos) estH mas dif"ndida en $ente de
baOos rec"rsos econmicos7 en la 6"e ademHs de mermar s" sal"d y
econom2a7 tambi&n ca"sa indirectamente >roblemas >sicol$icos (baOa
a"toestima) >or las deformaciones 6"e $enera.
La medicina tradicional o alternati0a "sa desde hace m"cho tiem>o
di0ersos ti>os de >lantas >ara el tratamiento de "na $ran 0ariedad de
enfermedades. *ara el tratamiento de Leishmaniosis >or estos m&todos7 se
"san >or eOem>lo7 de ac"erdo a la )ona7 >lantas tan di0ersas como ma2)7
e"cali>to7 sHbila7 llant&n7 mal0a7 matico7 taya y m"chos otros (!oOas et. al.,
2005).
La Taya (Caesalpinia spinosa ('ol.) O. M"nt))7 tambi&n conocida
como Tara7 es "na le$"minosa m"y "tili)ada >ara estos fines7 sobre todo
en los de>artamentos de ma)onas7 +aOamarca y /an 'art2n (3as"rto7
899<T Llatas7 899A). Esta >lanta m"y "tili)ada en la act"alidad en la
ind"stria >or s"s altas concentraciones de tanino y Hcido $Hlico7 es conocida
ademHs >or s" alto >oder astrin$ente >or coa$"lar las albUminas de las
m"cosas y de los teOidos7 creando "na ca>a aislante y >rotectora 6"e
red"ce la irritacin y el dolorT >or tal moti0o son "sados externamente >ara
detener >e6"e(as hemorra$ias localesT en inflamaciones de la ca0idad
b"cal7 catarros7 bron6"itis7 6"emad"ras7 hemorroides7 e internamente
contra la diarrea7 enfriamiento intestinal7 afecciones 0esic"lares7 y como
contra0eneno en caso de intoxicacin >or alcaloides 0e$etales. (-e La
+r")7 899?T Y"is>e7 899Q). Otras s"stancias >resentes en esta >lanta son el
Hcido $alotHnico7 >irocatecol7 >iro$alol7 elH$icos e hidrocoloides7 tambi&n de
m"cha im>ortancia (L>e) et.al. @GG:).
demHs7 el "so de medicamentos de ori$en 6"2mico >ara el
tratamiento de enfermedades como la Leishmaniosis ha demostrado "n
efecto cada 0e) mHs comUn7 la sat"racin farmacol$ica7 sobre todo en
ni(os y >ersonas de a0an)ada edad7 6"e lle$an a ca"sar7 en la mayor >arte
de los casos7 efectos sec"ndarios $ra0es. 1ran cantidad de cient2ficos han
encontrado en el "so tera>&"tico de flores7 ra2ces7 hoOas y fr"tos de las
>lantas "n 0alioso aliado7 ya 6"e ay"dan7 de forma cont"ndente7 a combatir
todo ti>o de trastornos sin 6"e7 >or ello7 a>orten nin$Un ti>o de
contraindicacin o efecto noci0o >ara la sal"d7 ademHs de ser "n
7
tratamiento econmico y de fHcil acceso7 sobre todo >ara la >oblacin de
baOos rec"rsos. (#nnatia7 899D).
A. O3%ET#VO/:
- islar e identificar Leishmania braziliensis peruviana de m"estras
cl2nicas.
- -eterminar el efecto inhibitorio del extracto metanlico de C. espinosa
(taya) sobre L. braziliensis peruviana.
- -eterminar la concentracin m2nima inhibitoria del extracto metanlico
de C. espinosa (taya) sobre L. braziliensis peruviana.
Q. ,TE+E-E,TE/:
La leishmaniosis c"tHnea y m"coc"tHnea es "na enfermedad de alta
>re0alencia en m"chas Hreas tro>icales y s"btro>icales del m"ndo. En el *erU
constit"ye la se$"nda endemia de ti>o tro>ical y la tercera ca"sa de morbilidad
>or enfermedades transmisibles7 l"e$o de la malaria y al t"berc"losis7 teniendo
como )ona end&mica a>roximadamente el D?V del total del Hrea del >a2s
(m>"ero7 8999T O*/7 @GGQT Torres y 3arroeta7 @GGQ).
/e "san diferentes es6"emas tera>&"ticos contra las di0ersas formas
cl2nicas de leishmaniosis. "n6"e m"chas in0esti$aciones coinciden en
considerar a los antimoniales >enta0alentes como las dro$as mHs efecti0as7 se
"san ademHs otros medicamentos como: anfotericina 37 licochalcone 7
micona)ol7 isonia)ida7 da>sona7 rifam>icina7 trimeto>rim7 s"lfametoxa)ol e
interfern $amma (*&re) et. al. 899A). Estos tratamientos >resenta tres
dific"ltades f"ndamentales: @. escases y alto costo de las dro$asT 8. ele0ada
toxicidad y <. $randes diferencias en la res>"esta indi0id"al7 de>endiendo de la
es>ecie de >arHsito in0ol"crado y sobre todo del estado inm"nol$ico del
hos>edador. (Torres y 3arroeda7 @GGQT '"(o) y *areOa7 899<7 'on)ote et. al.
899?).
'"(o) y *areOa. 899?7 re>ortaron 6"e en la act"alidad en el *erU7
>obladores de la sierra y trib"s sel0Hticas como los shaninRas "tili)an >lantas
con >ro>iedades c"rati0as contra la leishmaniasis7 siendo de $ran inter&s el
0alor de &stas como f"entes de a$entes medicinales debido a s"s
constit"yentes 6"2micos 7 es>ec2ficamente los metabolitos sec"ndarios. Entre
las >lantas re>ortadas estHn el tah"ar2 (Tabebuia serratiolia)7 >i(n (!atropa
"ur"as)7 oO& (#i"us insipida)7 barbasco (Lon"ho"arpus ni"ou)7 cedro (Cederla
issilis) y mito (Cari"a "andi"ans).
-eloren)i et. al. en 'on)ote et. al. (899?) re>ortaron el efecto de "n
extracto de Pes"heria australis frente a >romasti$otes de L. braziliensis en el
c"al obt"0ieron "n <9V de inhibicin del crecimiento al inc"bar los >arHsitos
con @99 K$=mL7 sin embar$o7 al >"rificar el alcaloide indlico coronaridina
obt"0ieron "n GDV de inhibicin del crecimiento de los >romasti$otes a "na
concentracin de @8.A K$=mL.
La maca7 Lepidium peruvianum7 es "na $rassi"a"eae de los andes
>er"anos en la c"al se ha determinado la >resencia de alcaloides imida)licos7
ben)il $locosinolatos7 taninos7 fla0onoides y sa>oninas7 com>"estos7 todos
ellos7 m"y acti0os frente a Leishmania y a trofo)oitos de %iardia intestinales. El
8
efecto leishmanicida >odr2a deberse a la >resencia de isotiocianatos
biol$icamente acti0os: ben)ilJisotiocianato y >Jmetoxiben)il isotiocianato (Li et.
al. 899@)T ademHs se ha demostrado 6"e las concentraciones de dichos
com>"estos contenidos el L. peruvianum difieren entre ecoti>os y ser2an las
ca"sas de las diferencias en el efecto leishmanicida (l)adora et. al 899D).
La tara7 Caesalpinia espinosa7 es "n Hrbol de hasta A m de alto c"yo
hHbitat abarca desde Vene)"ela hasta 3oli0ia. En el *erU7 desarrolla en forma
sil0estre o c"lti0ada7 en las lomas costeras y en los 0alles interandinos7 entre
@7999 y <7@99 msnm. -e esta Caesalpina"eae se obtiene el >ol0o de tara 6"e
contiene "n $ran >orcentaOe de taninos y ademHs Hcido tHnico7 Hcido $Hlico y
Hcido $alotHnico. Los taninos son s"stancias 6"e se >rod"cen en di0ersas
>artes de la >lanta7 como son: corte)a7 fr"tos7 hoOas7 ra2ces y semillas (Unten
en 3a)"rto7 899Q).
Los taninos tiene la >ro>iedad de formar com>leOos con macromol&c"las7
>artic"larmente con las >rote2nasT as2 forman enlaces colocHndose entre las
fibras de colH$eno de la >iel7 em>leHndolos en medicina en tratamientos de
escoriaciones y 6"emad"ras de la >iel donde las >rote2nas forman "na ca>a
>rotectora antis&>tica baOo la c"al se re$eneran los teOidos7 ademHs los
>re>arados a base de dro$as ricas en taninos7 como las decocciones7 se
em>lean >ara detener >e6"e(as hemorra$ias localesT en inflamaciones de la
ca0idad b"cal7 catarros7 bron6"itis7 hemorroides y otros (/iccha en 3a)"rto7
899Q).
D. 'TE!#LE/ F *!O+E-#'#E,TO:
D.@. 'aterial:
- Una ce>a de L. braziliensis peruviana identificada mediante *r"ebas
'olec"lares identificadas en el Laboratorio del #nstit"to de 3iolo$2a
'olec"lar de la 4. ++. 33. C U.,.*.!.1. C Lambaye6"e.
- Las 0ainas y hoOas de C. espinosa (Taya) serHn recolectadas en la
com"nidad de +hiribamba7 distrito de E"ambos (!e$in +aOamarca).
- En el laboratorio se >rocederH a seleccionar las meOores hoOas y fr"tos7
6"edando a>tos >ara s" >rocesamiento.
D.8. '&todos:
D.8.@.*oblacin y '"estra de Est"dio:
La >oblacin obOeto de est"dio estarH re>resentada >or ce>as
de L. braziliensis peruviana.
La m"estra estarH constit"ida >or "na ce>a de L. braziliensis
peruviana enfrentada a cinco concentraciones de extracto metanlico
de C. espinosa (Taya) (A97 @997 8997 ?99 y :99 m$=mL) y tres ti>os
de extracto (de hoOa7 semilla y hoOa Z semilla)T haciendo "n total de
@A.
D.8.8.T&cnica e #nstr"mentos de !ecoleccin de -atos:
#dentificacin del *arHsito (m>"ero7 8999):
9
- *ara identificar Leishmania braziliensis peruviana se
reali)arHn los si$"ientes >asos:
o Obser0acin -irecta >or 4rotis de la Lesin: en la c"al se
confirmarH la >resencia del >arHsito.

O/"'!-#0! 1' & $2'(",3
@. La0ar la lesin con a$"a y Oabn
8. -esinfectar con alcohol al D9V los bordes de la lesin.
<. *resionar con firme)a los bordes de la lesin hasta 6"e
em>alide)caT en el borde interno7 hacer "na >e6"e(a
incisin con hoOa de bist"r2 tratando de le0antar la >iel7 secar
la san$re con $asa y ras>ar el teOido.
?. +on el material obtenido en la hoOa de bist"r27 hacer el
frotis en "na lHmina7 >roc"rando 6"e este sea del$ado y
e0itando >asar dos 0eces >or el mismo sitio.
A. !ot"lar la lHmina y deOar secar al medio ambiente.
P,%-'($#'!"% 1' & $2'(",3
@. 4iOar la lHmina 6"e contiene el frotis con alcohol met2lico
d"rante < min"tos. -escartar el alcohol y deOar secar a
tem>erat"ra ambiente.
8. +"brir la lHmina con sol"cin de trabaOo 1iemsa ("na $ota
de sol"cin 1iemsa stocR >or cada mL de sol"cin b"ffer >E
D78 C D7?) >or <9 min"tos.
<. -escartar el colorante y la0ar li$eramente con a$"a
corriente.
?. /ecar al medio ambiente y hacer la lect"ra con lente de
inmersin.
o Obtencin de c"lti0os de L. braziliensis peruviana: la
>ositi0idad de la >r"eba anterior nos >ermitirH extraer con
se$"ridad "na m"estra >ara la >osterior obtencin de los
c"lti0os de L. braziliensis peruviana7 >ara esto se
reali)arH el si$"iente >rocedimiento:
@. La0ar la lesin con a$"a y Oabn.
8. -esinfectar la )ona ele$ida con alcohol al D9V y a$"a
oxi$enada.
<. +on "na Oerin$a de t"berc"lina7 la c"al7 ha sido car$ada
>re0iamente con 978 mL de sol"cin salina est&ril con
antibiticos7 se >"n)a y se inyecta el contenido s"a0emente
dentro del Hrea decolorada de la >H>"la o dentro del mar$en
no necroti)ado de la Ulcera.
?. Ense$"ida se as>ira. La a$"Oa y Oerin$a son retiradas
a>licando li$era >resin hacia atrHs7 al mismo tiem>o 6"e se
$ira s"a0emente hacia derecha e i)6"ierda. El >rocedimiento
es relati0amente indoloro7 sin embar$o7 >"ede "tili)arse "n
anest&sico local (Lidoca2na al 8V).
10
A. -os a tres $otas del material as>irado son inoc"lados en
t"bos con ta>a rosca 6"e contienen medio de c"lti0o ,o0y
'c,eal ,icolle (,,,)7 al c"al se le ha a(adido 97@ mL de
sol"cin salina 6"e contiene A99 #U de >enicilina y A99 m$
de stre>tomicina=mL >ara >re0enir la contaminacin.
Q. 'antener los t"bos de c"lti0o a 8?[+ y re0isarlos
diariamente. /i no se dis>"siera de est"fa7 los c"lti0os se
>"eden mantener a tem>erat"ra ambiente7 siem>re 6"e &sta
no exceda los 8Q[+.
D. /e reali)arHn rec"entos diarios a fin de determinar la fase
lo$ar2tmica del >arHsito.
o #dentificacin Es>ec2fica de Es>ecie >or T&cnicas
'olec"lares: L. braziliensis peruviana serH identificada
es>ec2ficamente mediante las t&cnicas de *+! y !4L*.
Obtencin del Extracto 'etanlico de Caesalpinia spinosa
(Taya) (l)adora et. al.7 899D):
o /e >re>ararHn extractos metanlicos de hoOa7 fr"to y hoOa
y fr"to (@:@) de Caesalpinia spinosa (Taya)7 >ara lo c"al
se se$"irH el si$"iente >rocedimiento:
/e recolectarHn las hoOas y fr"tos de Taya teniendo en
c"enta s" tama(o7 color y estado.
L"e$o7 se obtendrH "n Rilo$ramo de m"estra fresca7 la
c"al se >ondrH a secar al horno a "na tem>erat"ra de
?A N+=8? C <Q h. con la finalidad de eliminar de forma
eficiente la h"medad.
L"e$o7 se >rocederH a moler las m"estras secas
"tili)ando "n mortero7 hasta obtener "n >"l0eri)ado
homo$&neo.
L"e$o7 se >esarHn A9 $r de la m"estra molida y se
colocarH en "n baln con A99 mL de metanol comercial
(+E
<
OE +l)7 >ara >osteriormente lle0arlo a maceracin
>or @9 d2as.
L"e$o se filtrarH el macerado "tili)ando >a>el Latman
,N < en "n matra) est&ril >ara l"e$o colocarlo en "n
crisol y lle0arlo a est"fa de aire circ"lante a ?9 N+7
hasta obtener \ del 0ol"men inicial.
L"e$o se sec en est"fa a ?9 N+7 hasta la e0a>oracin
total del sol0ente.
El extracto seco y en >ol0o serH recibido en 0iales
est&riles.
Estandari)acin de la /ol"cin /tocR (!imarach2n y Vas6"&)7
899?):
o /e >esarH ? $ de extracto >"ro en "n reci>iente est&ril y
l"e$o se a$re$arH A mL de /ol"cin /alina 4isiol$ica
11
Est&ril (//4E)7 >ara obtener la /ol"cin /tocR c"ya
concentracin final serH :99 m$=mL.
o L"e$o de obtenida la /ol"cin /tocR se >rocederH a
>re>arar las concentraciones de A97 @997 8997 ?99 y :99
m$=mL.
*r"eba de Efecto #nhibitorio in Vitro (l)adora et. al.7 899D):
o *ara esta >r"eba se "tili)arHn c"lti0os de >romasti$otes
de Leishmania braziliensis peruviana en fase lo$.
o *asado A d2as de c"lti0o a la fase l26"ida se le a(adirH el
extracto metanlico de cada ti>o (hoOa7 fr"to y hoOa Z
fr"to).
o /e em>learHn concentraciones de A97 @997 8997 ?99 y
:99 m$=mL de Extracto 'etanlico.
o Los ensayos se reali)arHn >or tri>licado >ara cada ti>o de
extracto7 considerando como controles c"lti0os sin
Extracto 'etanlico.
o El rec"ento de >arHsitos se reali)arH diariamente desde
el >rimer hasta el 6"into d2a de inc"bacin con el
Extracto 'etanlico.
o *ara el rec"ento del >arHsito se em>learH cHmara de
,e"ba"er (?99x) lo 6"e ademHs >ermitirH e0al"ar la
morfolo$2a y la s">er0i0encia del >arHsito7 &sta Ultima7
relacionada con s" mo0imiento.
o El efecto inhibitorio in Vitro del Extracto 'etanlico de C.
espinosa (Taya) se demostrarH a tra0&s de la cti0idad
Leishmanicida (red"ccin en la cantidad de
>romasti$otes). Bsta se determinarH a>licando la
si$"iente frm"la:
cti0idad
Leishmanicida
] ^@99 C (L8=L@)_ x @99)
o -onde L@ serH el nUmero de c&l"las 0iables en el c"lti0o
control y L8 serH el nUmero de c&l"las 0iables des>"&s
del tratamiento con los extractos.
o El >orcentaOe de 0iabilidad se determinarH >or
com>aracin con el nUmero de >romasti$otes de los
controles.
D.8.<.-ise(o de contrastacin de Ei>tesis:
La in0esti$acin a reali)ar es ex>erimental y
corres>onde al dise(o de est2m"lo creciente (l)adora et. al.7
899D). *ara este dise(o se "tili)arH "na ce>a ex>erimental y
"na ce>a control. la ce>a ex>erimental se le inoc"larHn dosis
de A97 @997 8997 ?99 y :99 m$=mL del extracto metanlico. La
ce>a control 6"edarH sin inoc"lar. Este >rocedimiento se
12
reali)arH >ara los tres ti>os de extracto (hoOa7 fr"to y hoOa Z
fr"to). /e com>ararHn los res"ltados antes y des>"&s de
inoc"lar los extractos metanlicos a tra0&s de la determinacin
de la cti0idad Leishmanicida. /e reali)arHn < re>eticiones >or
cada ti>o de extracto.
D.8.?.nHlisis Estad2stico de los -atos:
/e "tili)arH "n dise(o con arre$lo factorial @ x A x <7
corres>ondiendo el >rimer factor al nUmero de ce>as7 el
se$"ndo factor a las concentraciones del extracto metanlico
(A97 @997 8997 ?99 y :99 m$=mL) y el tercer factor a los ti>os
de extractos (hoOa7 fr"to y hoOa Z fr"to). El ex>erimento se
reali)arH con < re>eticiones (1rHfico ,N @)7 lo 6"e harHn "n
total de ?A "nidades ex>erimentales.
El dise(o factorial se a>licarH >ara cada ti>o de extracto
(hoOa7 fr"to y hoOa Z fr"to).
*ara el anHlisis estad2stico de los datos se "tili)arH la
>r"eba de t de /t"dent y la >r"eba de /i$nificacin de
T"cRey a 979A de ni0el de si$nificacin.
*ara la meOor inter>retacin7 los res"ltados de los datos
serHn >resentados en tablas y $rHficos.
13
:. !E4E!E,+#/:
- l)adora7 L.T /olis E.T !oOas7 '. 899D. cti0idad leishmanicida de los
extractos metablicos de c"atro ecoti>os de Lepidium peruvianum7
+hacn (3rassicaceae) &ev. Peru. $iol. ,Umero es>ecial @<(<): 8@@J8@?.
- m>"ero7 %. 8999. Leishmaniasis. 'd"los T&cnicos. /erie de
-oc"mentos 'ono$rHficos ,N :. '#,/. 8999. :9 >>.
- 3a)"rto7 L. 899Q. Todo sobre la Tara: Caesalpinia spinosa o Caesalpinia
tin"toria. L,#+OL/ del *erU. Uni0ersidades Latinoamericanas.
- 'on)ote7 L. y cols. 899?. *ro>iedades anti>roto)oarias de aceites
esenciales extra2dos de >lantas c"banas. #nstit"to de 'edicina Tro>ical
*edro Mo"r2.
- '"(o)7 . y 3.7 *areOa. 899<. *lantas medicinales em>leadas en el
tratamiento de la leishmaniasis. 4olia -ermatol$ica *er"ana. +2rc"lo
-ermatol$ico del *erU. @? >>.
- Or$ani)acin *anamericana de la /al"d. @GGQ. E>idemiolo$2a y +ontrol
de la Leishmaniasis en las meritas >or *a2s o >or Territorio. +"aderno
T&cnico ,N ??. @ C <7 @: C @G >>.
- *&re)7 %.T %.7 *&re) y +astanys7 /. 899D. Estrate$ias tera>&"ticas y
bases molec"lares de la resistencia a fHrmacos frente a la leishmaniasis.
#nstit"to de *arasitolo$2a y 3iomedicina L>e)J,eyra (+/#+).
- !imarach2n7 %. y '. Vas6"&). 899?. /ensibilidad in vitro de Candida
albi"ans7 'thaphylo"o""us aureus y 'almonella Typha al extracto
etanlico de 3idens pilosa L. mor seco. 4ac"ltad de +iencias
3iol$icas. Uni0ersidad ,acional *edro !"i) 1allo. Lambaye6"e.
- Torres7 !7 y /.7 3arroeta. @GGQ. Tratamiento de la Leishmaniasis
+"tHnea Locali)ada con #nfiltraciones *erilesionales de 1l"cantime y
Lidoca2na. 4ac"ltad de 'edicina. Uni0ersidad del ;"lla.
14
GRAFICO N4 13 D#('5% '6)',#$'!"& ), 1'"',$#!,
TIPOS DE E7TRACTO
C
O
N
C
E
N
T
R
A
C
I
O
N
E
S
EIT!+TO 'ET,OL#+O
EO%
EIT!+TO 'ET,OL#+O
4!UTO
EIT!+TO 'ET,OL#+O
EO% Z 4!UTO
Leishmania braziliensis - peruviana '! +(' &%8
A9 m$=mL
!@
!8
!<
@99 m$=mL
!@
!8
!<
899 m$=mL
!@
!8
!<
?99 m$=mL
!@
!8
!<
:99 m$=mL
!@
!8
!<
15