PRUEBAS

BIOQUMICAS
Dra. Natalia Izurieta Cergneux
PRCTICA No. ! "ABORATORIO DE BACTERIO"O#A $
MICO"O#A
PRUEBAS BIOQUMICAS
La identificacin
definitiva de una
especie requiere de
pruebas
bioqumicas.
Permiten conocer
las actividades
metablicas y
enzimticas de los
microorganismos.
PRUEBAS BIOQUMICAS

Identificar los productos finales de los procesos metablicos

Se debe conocer:
.! "ambios que se producen
#.! $eacciones qumicas que ocurren
%.! &nzimas que intervienen
'.! Productos intermedios
(.! Secuencias de las reacciones bioqumicas
PRUEBAS BIOQUMICAS

Los microorganismos se cultivan en medios S)*

SS + SD PB

Las pruebas bioqumicas disponibles para la identificacin de

microorganismos de la familia &nterobacteriaceae son:
.! Pruebas IMVIC
#.! Prueba de TSI
%.! Prueba de Ureasa
'.! Movilidad
PRUEBAS IM%IC

Incluyen un grupo de cuatro pruebas usadas para diferenciar

a los microorganismos ent+ricos ,-amilia &nterobacteriaceae.

Las pruebas son:

I/*0L
$010 *& M&2IL0
V03&S 4 P$0S567&$
CI2$620.
PRUEBA DE INDO"

FUNDAMENTO:
TRIPTOFANASA
H2O + TRIPTOFANO INDOL + AC PIRUVICO + NH!

PROTOCOLO: Se inocula en caldo triptosa e incuba a %( !

%89" durante #' :oras.

Luego de este perodo; se a<aden ( gotas del reactivo de

5ovacs.

INTERPRETACI"N:
NE#ATIVO POSITIVO
POSITIVO NE#ATIVO
PRUEBA DE CITRATO
Na2CO3 CITRATO
PIRUVATO
CO2 + Na + H2O
Ph ALCALINO
AZUL DE
BROMOTIMOL
COLOR AZUL
PRUEBA +
Agar Citratado de Sio!"
PRUEBA DE CITRATO

PROTOCOLO
.! Se inocula el agar de superficie inclinada con
una sola estra en la superficie.
#.! Se incuba a %( ! %89" durante #' :oras y se
realiza la lectura de la prueba.
PRUEBA DE CITRATO

INTERPRETACI"N:
&s positiva cuando se
observa crecimiento a lo largo
de la estra; y este se
acompa<a o no de un vira=e
del indicador de verde a azul.
&l cambio de color del medio
a azul indica una reaccin
positiva.
POSITIVO
NE#ATIVO
PRUEBA DE RO&O DE METI"O
$ %O#ES PROS'AUER
#"UCOSA

ACIDO MI(TA

ACIDOS MI(TOS )

INDICADOR RO&O DE METI"O

CO"OR RO&O ! MR *

REACTI%O DE BARRET

CO"OR ROSADO ! %P *

ACETI")METI"CARBINO"

INDICADOR RO&O DE METI"O

CO"OR RO&O ! MR *

REACTI%O DE BARRET

CO"OR ROSADO ! %P *

BUTI"EN#"ICO"ICA

ACIDOS MI(TOS )

INDICADOR RO&O DE METI"O

CO"OR RO&O ! MR *

REACTI%O DE BARRET

CO"OR ROSADO ! %P *

ACETI")METI"CARBINO"

INDICADOR RO&O DE METI"O

CO"OR RO&O ! MR *

REACTI%O DE BARRET

CO"OR ROSADO ! %P *
PRUEBA DE RO&O DE METI"O

FUNDAMENTO:
#LUCOSA
$ERMENTACI%N &CIDO MI'TA
&CIDOS L&CTICO( AC)TICO * SUCC+NICO
+
CO2( H2 , ETANOL
-H &CIDO
. #OTAS RO/O DE METILO
COLOR RO/O
POSITIVO
NE#ATIVO
PRUEBA DE RO&O DE METI"O

PROTOCOLO: ,caldo >$?P.

.! Se Inocula el medio con
un cultivo puro =oven.
#.! Se incuba a %( 4 %89"
durante '@ :oras.
%.! Luego de terminado el
tiempo de incubacin se
a<aden ( gotas del reactivo
de $o=o de >etilo ,no agitar..

INTERPRETACI"N:
SIN INOCULAR NE#ATIVO POSITIVO
PRUEBA DE %O#ES PROS'AUER

FUNDAMENTO:
#LUCOSA
$ERMENTACI%N BUTILEN#LIC%LICA
ACETIL0METIL0CARBINOL
1ACETO+NA2
203 BUTANODIOL( ETANOL( H2 , CO2
REACTIVO DE BARRETT
3OH 456
NE#ATIVO POSITIVO
PRUEBA TSI +TRIP"E SU#AR IRON,

>edio S)*

Permite evidenciar:
. "apacidad de produccin de cido y gas a partir de
glucosa; sacarosa y lactosa en un Anico medio.
#. Permite la identificacin de la produccin de SB#.
PRUEBA TSI

&sta prueba tiene como ob=etivo diferenciar entre:

Bacterias fermentadoras de la GLUCOSA
Bacterias fermentadoras de la GLUCOSA Bacterias fermentadoras de la LACTOSA Bacterias fermentadoras de la SACAROSA Bacterias Bacterias productoras de SH2
PRUEBA TSI
FUNDAMENTO:

&l eCtracto de carne y peptona aportan los nutrientes para

el desarrollo bacteriano.

La lactosa; sacarosa y glucosa son los B" fermentables.

&l ro=o de fenol es el indicador de pB.

Por la fermentacin de los azAcares; se producen cidos

que se detectan por el indicador de pB.
PRUEBA TSI

PROTOCOLO:
.! Se inocula los tubos de 2SI
con punta.
#.! Se introduce la punta :asta
% a ( mm del fondo del tubo.
%.! Luego de retirar el asa del
fondo; se estra el pico con un
movimiento en zigzag; de un lado
al otro.
'.! Se incuba a %( ! %89"
durante #' :oras.
ESTRIACION EN ZI#ZA#
INOCULACION CON PUNTA
PRUEBA TSI
INTERPRETACI"N:
Se debe considerar los cambios
de color en el pico y el fondo del
tubo y la formacin de burbu=as.
"uando el medio es cido $A%
este se torna de color amarillo y
cuando es alcalino $AL&%
permanece de color ro=o.
PRUEBA TSI

&l medio contiene D.E de glucosa y E de lactosa y sacarosa respectivamente.

Si el microorganismo slo fermenta la glucosa; el cido producido en el fondo

acidifica el medio en esa zona y se torna de color amarillo.

"uando el microorganismo fermenta la lactosa y la sacarosa; el cido producido

es suficiente como para virar el color del medio a amarillo.

&l medio permanece ro=o cuando no se produce fermentacin de ninguno de los

azAcares.
PRUEBA TSI

Si :ay formacin de gas durante el

proceso de fermentacin; en el
fondo del medio se observan
burbu=as o la ruptura del agar.

Si las bacteria son productoras de

SB# este se evidencia como un
precipitado negro en el fondo del
tubo.
T78o C 9 2 3 4 4A .
$ere!ta:i;! de #<7:o"a
0 0 + + + + +
Prod7::i;! de ga"
0 0 0 + + + +
$ere!ta:i;! de La:to"a , Sa:aro"a
0 0 0 0 + + +
Prod7::i;! de SH2
0 0 0 0 0 0 +
PRUEBA DE "A UREASA

FUNDAMENTO:
UREA
UREASA
2 MOL)CULAS DE NH4
-H ALCALINO
RO/O DE $ENOL
COLOR $UCSIA
RESULTADOS
+
0
PRUEBA DE "A UREASA

PROTOCOLO:
.! Se siembra el microorganismo en estudio en caldo urea o agar Area de "ristensen.
#.! Se incuba a %( ! %89 " durante #' :oras.

INTERPRETACI"N:
POSITIVO NE#ATIVO
Agar =rea de Cri"te!"e!
NE#ATIVO
POSITIVO