Anlisis Instrumental Aplicado

Cromatografa


Gmez Hernndez Martn


Cid Lpez Juliette
Colula Alvarado Arnulfo Eduardo
Estrada Castro Jos Nathaniel
Gonzlez Nava Janette Berenice
Reyes Rodolfo
Rodrguez Eduardo


Mikhail Tswett botnico ruso que
desarroll en 1906 por primera vez la
cromatografa.
Separacin varios pigmentos de vegetales
como las clorofilas.
Cromatografa proviene del griego: chroma
significa "color" y graphos "escribir".
Es un mtodo fsico de separacin, en el que los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una estacionaria y otra mvil
en una direccin definida.
Fase mvil consiste en un fluido, gas o lquido que
arrastra a la muestra a travs de la columna.

-Disolvente puro
-Ser inertes
-No se evapore
-No usar en exceso
-Polaridad (serie eluotrpica)

Fase estacionaria es un slido o un lquido fijado
en un slido.

-Inerte
-Porosidad
-Tamao de la partcula
-Higroscopicidad
-Carga elctrica


Materiales comerciales
Carbn activado
Slica gel
Silicato de magnesio (Florosil)

A) Naturaleza fsica de las fases







B) Caractersticas fsico-qumicas
Adsorcin
Particin
Afinidad
Intercambio inico
Exclusin
F.E. F.M.
Slido Lquido
Lquido Lquido
Slido Gas
Lquido Gas
C) Tcnica aplicada
Columna
Anlisis
tamao
Anlisis por
afinidad
Placa
Descendente
Ascendente
Radial
Bidimensional
Anlisis cualitativo y cuantitativo de diversas
muestras.

Purificacin del agua.
Anlisis de pesticidas, herbicidas, antibiticos,
etc.
Conocer la pureza del aire.

La F.E. es un slido por el que se adsorbe los componentes de la
muestra. La F.M. puede ser un lquido o un gas; los componentes
se distribuyen entre las dos fases por una combinacin de
procesos de sorcin y desorcin.
Cromatografa de capa fina (TLC, thin-
layer-chromatography)
La F.E. es un lquido soportado en un slido y la
F.M. puede ser un lquido o un gas.

De fase normal (F.E. polar y F.M. no polar).
De fase inversa.
HPLC
Est basada en la atraccin entre los
iones del soluto y los centros
cargados unidos a la fase
estacionaria.

Poliestireno entrecruzadas




Basadas en carbohidratos




Basados en slice

Anionicas Cationicas

Sulfanato Amino cuaternario

Carboxilato Amino terciario

Aminodiacetato Amino secundario

Fosfonato Amino primario

Q
w
= n
eq
/ w
s
(meq/g)

Q
v
= n
eq
/ V
t


K
w
= [M]
WR
/ [M]
s
La separacin se lleva a cabo
por diferencias en tamao
molecular y la habilidad de
diferentes molculas para
penetrar los poros de la fase
estacionaria a diferentes
tamaos o magnitudes.
Utiliza interacciones altamente especficas entre un tipo de molculas de soluto y
una segunda molcula unida covalentemente (inmovilizada) a la fase estacionaria.

Las interacciones entre las molculas del ligando y blanco pueden ser el resultado
de
interacciones hidrofbicas o interacciones electrostticas, fuerzas de van der
Waals y/o puentes de hidrgeno.

Es la parte del registro que corresponde a la fase
mvil pura.
Lnea base
Es el tiempo transcurrido entre el instante en que se
introduce la muestra y el instante en que se detecta la seal
propia del componente en su mxima intensidad.
Tiempo de
retencin
Es el tiempo que tarda la fase mvil en recorrer la
columna y llegar al detector.
Es el volumen de fase mvil necesaria para eluir el
soluto a travs de la columna.
Volumen de
retencin
Es la diferencia que existe entre el tiempo de retencin
menos el tiempo muerto.
tR tM = tR
Se define como el cociente entre la concentracin de
componente presente en la fase estacionaria y la
concentracin de componente presente en la fase
mvil.

Es la relacin entre los tiempos de
retencin de dos componentes:
Dependiendo del valor de se
tiene una idea aproximada de
como ser la separacin
cromatogrfica:
> 2 se obtiene una mala
separacin ya que son necesarios
periodos muy largos para
realizarla.
1< <2 se obtiene una buena
separacin cromatogrfica.


Es la distancia entre la
cima del pico y la lnea de
base. En el caso de que el
vrtice sea redondeado se
trazan rectas tangentes a
los dos puntos de
inflexin de las laderas; el
punto de corte de las dos
rectas determina la altura
del pico.

Es la longitud del tramo de la prolongacin de la lnea de
base, comprendida entre las intersecciones con la misma de
las laderas del pico.
Es la comprendida entre el pico y la prolongacin de
la lnea de base.

rea del pico
Es el parmetro que
expresa el grado de
separacin que se puede
obtener en un sistema
cromatogrfico para dos
componentes dados la
resolucin est dada por:

Rs = (tR,2-tR,1)/(0.5(W2+W1))
Si el valor de la resolucin est prximo a
0,7 se obtendr una mala resolucin
quedando los picos solapados, de forma
que se distinguen las crestas, pero no la
base.
El valor de la resolucin est prximo a
1,5 se obtendrn unos picos bien
delimitados por lo que se obtendr una
buena resolucin.

Una pobre resolucin es debida
principalmente a:

Hay demasiada muestra en la columna.
La columna o placa es corta.
La fase mvil no discrimina entre los
componentes.
La columna es demasiado gruesa.

Es la seccin terico-transversal en la cual se realiza
el equilibrio de particin durante el flujo de fase
mvil. Cuanto mayor se el nmero de platos terico
(N) mayor ser la eficiencia de la columna.

El nmero de platos tericos mide la capacidad de la
columna para separar los componentes.

Es la tcnica a elegir para la separacin de compuestos
orgnicos e inorgnicos trmicamente estables y
voltiles.

Otra aplicacin es el mtodo para determinar
cuantitativa y cualitativamente los componentes de la
muestra. Para el anlisis cualitativo se suele emplear el
tiempo de retencin, que es nico para cada compuesto
dadas unas determinadas condiciones (mismo gas
portador, rampa de temperatura y flujo), o el volumen
de retencin.
1- Proporcionar un gasto o flujo constante del
gas transportador ( fase mvil).
2.- Permitir la introduccin de vapores de la
muestra en la corriente de gas que fluye.
3.- contener la longitud aproximada de fase
estacionaria.
4.- Mantener la columna a la temperatura adecuada.

5.- Detectar los componentes de la muestra conforme eluye la
columna.

6.- Promover una seal legible proporcional en magnitud a la
cantidad de cada componente.



- Cromatografa gas-lquido (GLC, de gas-liquid
chromatography).

- Cromatografa gas-slido (GSC, de gas-solid
chromatography)

Modo estndar, adecuado para
aproximadamente 95% de las aplicaciones de las
columnas empacadas (o empacatedas) es la
inyeccin directa.
Un muestreador automtico reproduce las
inyecciones y medidas manuales.
Muestreo de la cabeza gaseosa.

Purga y trampa.

Pirolisis.

Empacadas: se construyen con tubo de acero
inoxidable, nquel o vidrio, los dimetros interiores van
de 1.6 a 9.5 mm.
El dimetro interno de la columna debe ser al menos
ocho veces al dimetro de las partculas del soporte.
Las columnas tienen un dimetro interno de 1mm o menor,
usualmente se construyen con slice fundida ( un vidrio de muy
alta pureza) que tiene un grado de entrecruzamiento en la matriz
de silicn-oxigeno mucho mayor que el vidrio ordinario.
Localizado en la salida de la columna de separacin, reaccionan
ante la presencia de los componentes individuales conforme
abandonan la columna. El volumen del detector debe ser
pequeo para prevenir el mezclado de los componentes
separados en la columna.
Utiliza un filamento caliente colocado en el flujo de gas
emergente. La cantidad de calor por conduccin que pierde el
filamento hacia las paredes del detector depende de la
conductividad trmica de la fase gaseosa.
Aade hidrogeno al eluyente de la columna,
subsecuentemente la mezcla pasa a travs del conducto
de un mechero, donde se mezcla con aire externo y
luego arde o se quema.
Utiliza un plasma de hidrogeno pobre en combustible,
una llama de baja temperatura que suprime la respuesta
normal de ionizacin en la flama con compuestos que
no contienen nitrgeno o fosforo.
El eluyente de la columna pasa entre dos electrodos. Uno de los
electrodos tiene en su superficie un radioistopo que emite
electrones de alta energa (partculas beta) conforme decae.
El detector fotomtrico de llama (FPD). Es esencialmente un
tipo especial de fotmetro de filtro de emisin de llama,
utilizando principalmente para la determinacin de compuestos
voltiles de azufre o de fosforo.
Detector de fotoionizacin (PID).

Utiliza luz ultravioleta de lmparas con energa que va
desde 9.5 hasta 11.7 eV para producir la ionizacin de
las molculas del soluto.

Detector de conductividad electroltica.

Opera sobre los principios de conductividad
electroltica. Los compuestos orgnicos que eluyen de
la columna de CG se queman en un horno en
miniatura para formar especies moleculares simples
que fcilmente se ionizan y contribuyen a la
conductividad del agua desionizada.

Material absorbente sobre una placa de:

Vidrio
Aluminio
Otros
Los productos se
disolvern en un
disolvente orgnico
que tenga un punto
de ebullicin lo
suficientemente
bajo para que se
evapore despus de
la aplicacin, lo ms
comn es usar
acetona.
Frecuentemente se
emplean disoluciones al
1%, de manera que al
aplicar 2 l resulta en la
carga 20 g de producto
slido.
Muchos reactivos de
revelado llegan a
detectar 0.1 g de
material; por esto con
esta carga puede
llegarse a observar un
5% de impurezas.



Depende del componente que se va a separar y del
material en que la separacin se lleva a cabo.

Un mtodo que se emplea para la seleccin del
eluyente es una cromatografa en capa fina con
distintos disolventes y unas muestras patrn.







ter de petrleo.
ter dietlico.
Ciclohexano.
Acetato de etilo.
Tetracloruro de
carbono.*
Piridina.


Benceno.*
Etanol.
Cloroformo.*
Metanol.
Diclorometano.
Agua.
cido actico.

Precio.
Pureza.
No utilizar mezclas (reproducibilidad).
No utilizar compuestos muy voltiles.
Evitar que contengan trazas de metales
(catalizadores).
La eleccin se realiza de forma emprica.
Hay que estudiar la polaridad del componente y
probar con eluyentes cada vez menos polares.


Mtodos qumicos
Reaccin qumica entre un reactivo revelador y los
componentes separados, para ello se pulveriza la
placa con los reactivos reveladores.
Yodo, forma complejos coloreados con los componentes
orgnicos (con tonos amarillo-marrn)
las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente
sealar las manchas aparecidas.
cido sulfrico, reacciona con los componentes orgnicos
produciendo manchas negras.
Permanganato potsico, manchas de color amarillo. El
tamao de las manchas no est relacionado con la
cantidad de componente separado.
Adems de estos reveladores generales,
existen otros especficos:
2, 4 - dinitrofenilhidracina (para aldehdos y
cetonas).
Verde de bromocresol (para cidos carboxlicos).
Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas).
Ninhidrina (para aminocidos).

Mtodos fsicos.
Aadir al adsorbente un indicador fluorescente.
Al colocar la placa bajo una lmpara ultravioleta, y
dependiendo del indicador y de la longitud de onda,
aparecen manchas fluorescentes en las zonas en las que hay
componentes, o en otros casos aparece toda la placa
fluorescente excepto donde hay componentes.

Algunos compuestos poseen cierta
fluorescencia con lo que pueden ser
detectados directamente en una lmpara de
ultravioleta.

La constante RF (Ratio of Front) expresa la
posicin de un compuesto sobre una placa
como una fraccin decimal.
mide la retencin de un componente.
Se define como: RF= Distancia de la muestra
desde el origen/Distancia del eluyente desde
el origen

La distancia recorrida por el compuesto se
mide desde el centro de la mancha, los
clculos se simplifican si el denominador es
10.
Para que los RF sean reproducibles deben ser
fijadas una serie de condiciones
espesor de la placa
fase mvil
fase estacionaria
cantidad de muestra


El mximo valor de
RF que se puede
alcanzar es de 1
Lo ideal es un RF
entre 0.55 y 0.7.

Rf =




Cuando el disolvente avanza sobre las manchas de las
sustancias, comienzan a actuar dos tipos de fuerzas
opuestas: unas que arrastran y otras que retardan.
Las fuerzas propulsoras actan apartando las sustancias
de su punto de origen y desplazndolas en direccin del
flujo de origen.
Las fuerzas retardantes tratan de impedir el movimiento
de las sustancias, llevndolas fuera del disolvente que
fluye y hacia atrs en el papel.
La distancia recorrida por cada sustancia a partir del
origen, en un tiempo dado, es la resultante de estas
dos clases de fuerzas.

Fuerzas propulsoras:
el flujo de disolvente
la solubilidad de cada
sustancia en el disolvente.
Fuerzas retardantes:
la adsorcin
el reparto

La celulosa de la que esta hecho el papel de
filtro, posee propiedades adsorbentes.
Las sustancias depositadas en el papel
pueden ser adsorbidas en el papel.
unas sustancias son adsorbidas ms que
otras y, por consiguiente, la liberacin de las
sustancias de las manchas variar de una
sustancia a otra.
Esto contribuye de nuevo a la separacin.

Mientras que se va
realizando el
cromatograma, las
sustancias ms
fuertemente
adsorbidas se van
quedando atrs,
mientras que las
adsorbidas con
menos fuerza
avanzan hacia el
frente.

Se basa en la presencia de dos
fases liquidas individualizadas.
la corriente del disolvente
circulando por el papel de
filtro.
la fase acuosa contenida en el
mismo papel de filtro.
Una hoja de papel de filtro
aparentemente seca contiene
entre un 6 y 12% de agua
firmemente adherida a la
celulosa.



Cuando una sustancia que es
soluble en dos disolventes no
mezclados es expuesta al
mismo tiempo a ambos, se
repartir entre ellos.
La cantidad que se encuentre en
cada disolvente depender de la
relativa solubilidad del soluto en
cada uno.
El grado de reparto, una vez
conseguido el equilibrio, se
llama coeficiente de reparto
o razn de distribucin.

http://www.google.com.mx/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=8&ved=0CEAQFj
AH&url=http%3A%2F%2Fwww.ibt.unam.mx%2Fcomputo%2Fpdfs%2Fmet%2FCromatografi
a.pdf&ei=zXdfUICUBbGgyAHR9YDoCQ&usg=AFQjCNFOOXCDLZM7WmG9puaauKqlsc
NoWw&sig2=7Fl7Zu02bOuhzcYy0stWcg
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CDcQFjAD&url=http%3A%2F%2Fwww.itescam.edu.mx%2Fprincipal%2Fsylabus%2Ffpdb%2
Frecursos%2Fr49958.PDF&ei=O39fUNPfFeTYyAHhh4DICw&usg=AFQjCNHsWKUScuAk
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35_Manual.pdf&ei=VYBfUKvKHcmEygHghYGgDA&usg=AFQjCNHcz9XGQpaAxcZm_Pdf
EktxHMeyzw&sig2=uxRHUjoCoy0LmUhKhwy6dw