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Manual Practicas Micagral
Manual Practicas Micagral
1 INGENIEROS AGRNOMOS
CURSO 2005-2006
MICROBIOLOGIA GENERAL (PRCTICAS) Profesor: Cristina Solano Goi (Profesora Asociada) e-mail: cristina.solano@unavarra.es Tfno. Contacto: 948-168024 Direccin: Instituto de Agrobiotecnologa y Recursos Naturales. UPNA/CSIC
Objetivo
Se pretende conseguir que los alumnos conozcan: .- las buenas prcticas de trabajo en el laboratorio de Microbiologa .- aprender las tcnicas de preparacin de diferentes medios de cultivo - familiarizarse con las tcnicas empleadas en Microbiologa para el cultivo y la manipulacin de microorganismos en condiciones de esterilidad .- familiarizarse con el manejo del microscopio ptico para la visualizacin de microorganismos as como las tinciones ms habituales en el laboratorio de Microbiologa .- aprender otras tcnicas como las de transformacin bacteriana, infeccin de bacterias con bacterifagos, as como aprender a realizar un antibiograma .- tcnicas sencillas para estudiar el papel de los microorganismos en la produccin de alimentos.
Metodologa
Lecciones prcticas en el laboratorio de Microbiologa (en grupos reducidos). Cada grupo realizar las prcticas de forma intensiva a lo largo de una semana (3h/da). La realizacin de las prcticas es obligatoria para aprobar la asignatura. Prctica 1: Preparacin de medios de cultivo y siembra de bacterias en medios de cultivo. Esterilizacin. Con esta prctica se pretende aprender las tcnicas de preparacin de diferentes medios de cultivo, su esterilizacin y su almacenaje, as como la importancia de los diferentes medios de cultivo y su uso. Adems tambin se pretende que el alumno se familiarice con las tcnicas empleadas en Microbiologa para el cultivo y la manipulacin de microorganismos en condiciones de esterilidad.
Prctica 2: Obtencin de cultivos puros. Con esta prctica se pretende estudiar las diferentes tcnicas de aislamiento de un microorganismo a partir de una poblacin mixta para obtener un cultivo puro. Prctica 3: Recuento del nmero de bacterias por mililitro de un cultivo lquido. El objetivo de esta prctica es dar a conocer al alumno otra de las tcnicas de obtencin de cultivo puros as como el aprendizaje para hacer diluciones y recuentos bacterianos.
Prctica 4: Cultivo de bacterias anaerobias. El objetivo de esta prctica es conocer el fundamento y la tcnica ms comnmente empleada en el aislamiento de bacterias anaerobias. Prctica 5: Observacin de bacterias teidas. Tincin Simple y Tincin de Gram. Con esta prctica se pretende familiarizar al alumno con el manejo del microscopio ptico para la visualizacin de microorganismos. Se observarn preparaciones bacterianas bajo diferentes tcnicas de tincin que permitan establecer diferencias morfolgicas y estructurales entre y dentro de los microorganismos.
Prctica 6: Transformacin bacteriana por resistencia a ampicilina. En esta prctica se hablar de los fenmenos de transformacin, conjugacin y transduccin y se realizar un ensayo de transformacin bacteriana por adquisicin de plsmidos resistentes al antibitico ampicilina. Prctica 7: Antibiograma. El objetivo de esta prctica es estudiar qu son los antibiticos y cmo se realiza la valoracin de la actividad antimicrobiana de un compuesto qumico (antibitico) mediante la tcnica de Kirby-Bauer.
Prctica 8: Efecto de las altas temperaturas sobre el crecimiento microbiano El objetivo de esta prctica consiste en estudiar el efecto y la resistencia de un cultivo bacteriano a altas temperaturas. 3
Prctica 9: Aislamiento y caracteristicas de un bacterifago (virus de bacterias). El objetivo de esta prctica consiste en visualizar la presencia de bacterifagos a traves de las consecuencias de su ciclo infeccioso sobre bacterias de Staphylococcus aureus. Prctica 10: Observacin de levaduras. El objetivo de esta prctica es el cultivo de diferentes levaduras y la posterior identificacin de las mismas de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas a travs de su observacin al microscopio.
Prctica 11: Tincin de esporas. En esta prctica se estudiar el gnero Bacillus por su capacidad para la formacin de endosporas y se proceder a la realizacin de la correspondiente tincin diferencial para poder visualizar al microscopio dichas estructuras. Prctica 12: Tincin de cpsula. En esta prctica se estudiarn las cpsulas bacterianas y se proceder a una tincin diferencial para la visualizacin de la misma al microscopio.
Prctica 13: Utilizacin de los microorganismos en la industria alimentaria. Descripcin de dos tcnicas sencillas para estudiar el papel de los microorganismos en la produccin de alimentos. 13-A 13-B Preparacin de yogur Preparacin de cerveza
Prctica 14: Anlisis microbiolgico de la contaminacin ambiental y de manipuladores de alimentos Determinar el grado de contaminacin ambiental y del propio manipulador para estudiar la influencia en el nmero y tipo de microorganismos que luego pueden desarrollarse en un alimento. 14-A 14-B 14-C Anlisis del aire Anlisis de superficies Anlisis de manipuladores
NORMAS GENERALES DE TRABAJO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Un laboratorio de Microbiologa es un lugar convenientemente habilitado donde se pueden manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una buena tcnica asptica, y por tanto se requiere un ambiente limpio y ordenado y trabajar siempre en condiciones de esterilidad (en campanas de esterilidad biolgica o en la proximidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas). Aunque los microorganismos que se manipulen no sean considerados patgenos, todos los cultivos de todos los microorganismos deben ser manejados con precaucin por su potencial patogenicidad. Es necesario cumplir dos REQUISITOS BSICOS: 1. Restringir la presencia de los microorganismos en estudio a sus recipientes y medios de cultivo para evitar el riesgo de contaminarse uno mismo o a un compaero. 2. Evitar que los microorganismos ambientales (presentes en piel, pelo, aire, ropa, etc.) contaminen nuestras muestras. Para mantener estas condiciones, es necesario respetar una serie de NORMAS DE SEGURIDAD: 1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio. 2. Al iniciar y finalizar las prcticas, el estudiante se lavar las manos con agua y jabn. 3. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar cada prctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los desinfectantes ms habituales para esto son la leja y el alcohol (etanol 96). 3. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que pueden crear corrientes que originen contaminaciones o producir accidentes. 5. Durante las prcticas est prohibido comer, beber y fumar. Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc.
6. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la realizacin de la prctica deben estar apartados del lugar de trabajo. 7. Para deshacerse del material contaminado se utilizarn los recipientes adecuados, que sern esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por la fregadera o a la basura comn. 8. Bajo ningn concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del laboratorio. 9. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales. 10. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de microorganismos, etc.) se comunicar inmediatamente al instructor.
CALENDARIO DE PRCTICAS 1a SEMANA 1er DIA- prctica 1, 13B, 14 A, B y C Qu es un medio de cultivo en microbiologa?. Preparacin de medios de cultivo generales, de enriquecimiento, selectivos y diferenciales slido en placa slido en tubo (slant) lquido (caldo)