UNIVERSIDAD DE CRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIAS DEPARTAMENTO DE QUMICA LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA N IDENTIFICACIN DE CUERPOS CETNICOS EN ORINA

OBJETIVOS 1. Determinar la presencia de cuerpos cetnicos en orina, mediante pruebas cualitativas para cada uno de ellos. 2. Familiarizarse con algunos protocolos empleados en laboratorios clnicos para el reconocimiento de cuerpos cetnicos TEORA RELACIONADA. Los cuerpos cetnicos son los cidos acetoactico, la acetona y el cido - hidrxibutirico. En la cetsis, hallamos un aumento de estas sustancias en la sangre y en la orina. Bajo buenas condiciones de salud, los cuerpos cetnicos se forman en el hgado y son completamente metabolizados, de tal manera que solo cantidades insignificantes aparecen en la orina. Por el contrario, en casos de diabetes, inanicin, vmitos con deshidratacin y despus de la exposicin al fro y/o ejercicio vigoroso, los cuerpos cetnicos pueden encontrarse en cantidades apreciables en la orina, lo cual permite su determinacin cualitativa. La determinacin de acetona (Mtodo de Imbert), se fundamenta en la formacin de un ferropentacianuro con el derivado isonitrado de la acetona, la determinacin de acido acetoactico (Mtodo de Gerhrdt), se basa en la aparicin de una coloracin rojo-vinosa con el cloruro frrico y en el Mtodo de Hart, el acido - hidrxibutirico es transformado en acetona, la cual se identifica mediante el reactivo de Imbert. MATERIALES Y REACTIVOS 2 tubos de ensayo 1 pinza para crisol 1 gradilla 2 pipetas 1 pinza para tubos de ensayo Amoniaco Cloruro frrico al 10% Agua destilada Perxido de hidrogeno al 10% Nitroprusiato de sodio al 5% en CH3COOH al 50%

1 beacker de 250ml 1 capsula de porcelana

Orina de diabtico (traer) Acido actico glacial.

PROCEDIMIENTO DETERMINACIN DE ACETONA: A 5 ml de orina, agregue 0.5ml de nitroprusiato de sodio disuelto al 5% en acido actico al 50%, adicione 0.5ml de amoniaco por las paredes del tubo, la aparicin de un anillo rojo violceo en l contacto de los lquidos, es indicativo de la presencia de acetona. DETERMINACION DE ACIDO ACETOACTICO. A 5 ml de orina de adicionan unas gotas de cloruro frrico, en presencia de acido acetoactico se produce una coloracin rojo-vinosa. DETERMINACION DE ACIDO -HIDROXIBUTIRICO En una capsula de porcelana se mezclan 10ml de agua y 10 ml de orina, se acidifica con unas 5 gotas de acido actico y se calienta en una estufa hasta reducir el volumen a la mitad. Con este calentamiento se eliminan la acetona y el acido acetoactico, al contenido de la capsula se le agregan 10ml de agua y se transfiere en partes iguales a dos tubos de ensayo, uno de estos tubos servir como control, al otro se le adiciona 1ml de perxido de hidrogeno al 10% y se calienta en bao de Mara por 5 min, se deja enfriar y finalmente se practica la prueba de Imbert a ambos tubos.

PREGUNTAS DE ACTIVIDAD COMPLEMENTARIA 1. Qu otro tipo de sustancias pueden determinarse en la orina por un metabolismo anormal de lpidos. 2. Qu es la cetsis y la Cetonuria.

BIBLIOGRAFIA: PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mexico. MaGrawLatinoamericana, S.A. CONN, E y Stumpf, P.K. Bioqumica F. Hill

LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de Universidad Nacional de Colombia sede Bogot.

ciencias.