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Comparacin entre:

Extraccin de plsmidos por lisis alcanina manual VS HIGH PURITY


DANAPLASMIDO SPIN MIDI/MAXIPREP KIT

Lisis alcalina: Este mtodo explota
las diferencias en las propiedades de
desnaturalizacin y renaturalizacin
entre el DNA plasmdico (pequeos
crculos de DNA cerrados
covalentemente) y el DNA
cromosmico (fragmentado). La
alcalinizacin con NaOH en presencia
de un detergente fuertemente aninico
(SDS), provoca la lisis celular, la
desnaturalizacin del DNA
cromosmico y de las protenas, y la
liberacin de los plsmidos. Los
plsmidos se ven menos afectados
por su pequeo tamao y estructura
superenrollada. La neutralizacin del
medio en presencia de una
concentracin alta de sal (acetato
potsico), provoca la precipitacin de
las protenas (por el tratamiento con el
detergente y la insolubilidad de la sal
potsica del dodecil sulfato) y la del DNA cromosmico (por reasociaciones
aleatorias intracatenarias). Los agregados insolubles de protenas y DNA
cromosmico se separan por centrifugacin del DNA plasmdico que queda en el
sobrenadante y conserva mayoritariamente su estructura nativa.



HIGH PURITYDANAPLASMIDO
Midi/Maxiprep Kit ofrece un mtodo
simple para la extraccin de ADN
plasmdico a partir de cultivos de
E.coli recombinantes de 25-100 ml.
Este kit combina un modificado
mtodo de lisis alcalina con el uso de
columnas de intercambio aninico
para la extraccin de ADN plasmdico
grado transfeccin a partir de lisados
de bacterias.
Durante el paso de lisis celular, tanto
el ADN cromosmico y ADN
plasmdico son
desnaturalizados. Se aade Acetato de Potasio para formar un precipitado
neutralizado que contiene el ADN cromosmico y los componentes celulares. El
ADN plasmdico es retenido en solucin, y luego es aadido a la columna de
intercambio aninico equilibrada. El ADN plasmdico se une a la resina de
intercambio aninico y luego es eluido de la columna con varios pasos de lavado.
El ADN eluido es precipitado con isopropanol y fcilmente resupendido con TE o
agua libre de nucleasas.

CARACTERISTICAS:
Se basa en columnas de intercambio aninico.
El ADN plasmdico que se obtiene es de grado para trasnfeccin.
Columnas MIDI (25ml high-copy plsmidos / 100ml low-copy plsmidos) y
MAXI (100ml high-copy plsmidos / 500ml low-copy plsmidos) .
Cada kit incluye todos los reactivos y columnas para la purificacin de ADN
plasmdico ultrapuro.
Incluye filtros especiales para la eliminacin opcional de los desechos
celulares.



Bibliografas:
http://www.bioted.es/bioted%20protocolos/ADN%20PLASMIDICO%20MIDIS%20M
AXIPREPS.pdf

http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/37%20PURIFICACI%C3%93N%20ACS%20NUCLEICOS.pdf