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Qumica y Biologa de la Visin Abstracto La percepcin visual en el ser humano se produce a travs de la absorcin de la radiacin electromagntica de 400 a 780

nm de fotorreceptores en la retina. Un fotn de la luz visible lleva una cantidad suficiente de energa para provocar, cuando se absorbe, un cis, trans isomerizacin-geomtrica del cromforo 11-cisretinal, un derivado de la vitamina A unida a la rodopsina y el cono opsinas de fotorreceptores de la retina. La bioqumica nica de estos complejos nos permite recoger de forma fiable y reproducible informacin visual continua de nuestro medio ambiente. Por otra parte, otras opsinas retina no convencionales, tales como el ritmo circadiano regulador melanopsina tambin inician la sealizacin activada por la luz basado en la fotoqumica similar. Introduccin Nuestro sistema visual opera sobre un muy amplio rango dinmico , la deteccin de variaciones en la intensidad de la luz de ms de 8 rdenes de magnitud , de fotones individuales a ms de uno hasta cien millones fotones / s ( 1 ) . Este rango dinmico se atribuye a los procesos de adaptacin en los conos y bastones , y el resto procedentes de las contracciones de alumnos , los procesos dentro de las neuronas entre la retina y la tasa de produccin de cromforo visual. La clula de varilla se satura a varios miles de fotones / s , mientras que los conos continan funcionando en varias intensidades de luz milln de veces ms altas ( 2 ) . La base central de nuestra visin es la isomerizacin fotoqumica de la vitamina A derivados cromforo visual ( 11 - cis -retinal ) de su cis a trans - configuracin. Un solo fotn de luz isomeriza un nico 11 - cis -retinal unida a la barra o cono opsinas . Un fotn transporta ~ 2,5 eV de energa ( a 500 nm ) , pero slo una fraccin ( 1,5 eV / molcula de opsina ) se utiliza para provocar cambios en la conformacin de retina y , posteriormente, los cambios conformacionales de protenas , mientras que la energa restante es disipada . El gran exceso de

energa asegura que fotoisomerizacin se produce con alta fidelidad ( 3 ) . Para renovar un receptor funcional despus de la fotoactivacin , el cromforo debe ser regenerado metablicamente a travs de una serie de procesos enzimticos que incluyen isomerizacin y oxidacin de ster de todo-trans - retinilo a 11 - cis-retinal . Enzimtica de re - isomerizacin de todo-trans - retinoico a 11 - cis - retinoides requiere slo 3-4 kcal / mol de energa ( o 0.13-0.17 eV / molcula ) ( 4 ) . Completar ratn transcriptoma en los ojos y la Retina El ojo es un rgano complejo compuesto por tejidos especficos que llevan a cabo diferentes funciones para mantener la capacidad de respuesta visual continua. Los actores principales son la crnea y la lente en la parte delantera del ojo y la retina y el epitelio pigmentario de la retina ( RPE ) 2 en la parte posterior . Los eventos de absorcin de luz primarios tienen lugar dentro de la retina , un tejido de espesor 0,24 mm ( ratn ) compuesta de mltiples capas de clulas (Fig. 1 ) . Desarrollo de la retina y el mantenimiento , as como las funciones visuales sensibles a la luz , estn altamente regulados . Diseccin fsica de los diferentes tejidos oculares seguido por anlisis global de la expresin gnica mediante secuenciacin de ARN masivamente paralelo ( ARN - ss ) permiti la asignacin de un transcriptoma integral completa para el tejido ocular ( 5 ) . La integridad de este anlisis es un requisito previo importante para comprender la estructura y la fisiologa de la retina mediante la identificacin de todos los actores involucrados . Uso de ARN - ss de los tejidos oculares ratn WT maduras ( la retina y el ojo entero ) , se determin recientemente la composicin completa de estos transcriptomes ( 5 ) . Tejido de la retina producido 13.406 transcripciones nico , y como se esperaba , muchas transcripciones de tejidos retinales WT tenido funciones anotados que podran estar vinculados a los procesos metablicos especficos o funciones estructurales y reguladoras (Fig. 2 , parte superior ) ( 5 ) . Adems, el anlisis de los tejidos enteros WT ojo revel un gran nmero de genes con funciones desconocidas que esperan a anlisis ms detenido ( fig. 2 , inferior) . Estos estudios complemento y en gran medida se expanden anteriores anlisis de expresin basados en chip de

genes en tanto la precisin y cuantificacin ( 6 , 7 ) . Esta nueva profundidad de los conocimientos de la retina transcriptoma facilitar anlisis a gran escala de las consecuencias funcionales de la manipulacin de la expresin gnica de fotorreceptores ( es decir, el uso de la transferencia de genes mediante electroporacin retina ) ( 8 ) . Adems de los ARNm codificantes de protenas , un gran nmero de microRNAs (miRNAs ) y otros ARN no codificantes se expresan en el ojo ( 9 , 10 ) . Junto con muchos metabolitos y los componentes de la dieta , estos ARN regulan el control del desarrollo y circadiano sobre la traduccin de protenas en cada tipo celular . Al menos 78 miRNAs se expres preferentemente en la retina del ratn de 689 miRNAs identificados ( miRBase Secuencia Database Release 13.0 , 10 de marzo de 2009) ( 11 ) , lo que sugiere la importancia de miRNAs en la modulacin de los perfiles de expresin de genes en clulas de la retina . Por otra parte , la inactivacin de Dicer ( un elemento esencial RNasa III endonucleasa requerido para la maduracin de los genes miARN ) conduce a la degeneracin funcional y estructural progresiva de la retina del ratn ( 12 ) . Regulacin de los niveles de miARN podra ser un instrumento importante para el tratamiento de enfermedades de la retina humana , como se demuestra en un modelo de ratn de la degeneracin de la retina inducida por la luz ( 13 ) .

Fig.1 Estructuras de varilla y el cono OS y membranas internas ROS . Una , la organizacin neuronal de una retina tpica de mamfero . Una representacin en seccin transversal de fotorreceptores de los bastones y conos se presenta , ilustrando sus conexiones a la RPE distalmente y para clulas de reinstalacin ( bipolares, horizontales , amacrinas y clulas ganglionares ) proximalmente . La estructura de varilla tiene un sistema operativo ms largo con los discos de membrana - cerrados hermticamente envasados sin conexiones a la membrana plasmtica . Cono discos estn conectados continuamente con la membrana plasmtica . Esta cifra fue reimpreso de Ref . 101 con el permiso . B, tomografa de electrones vitrificado ROS . La tomografa de electrones est representado en tres rebanadas ortogonales a travs del volumen de ROS . Una rebanada xy ( derecha) y una rebanada yz ( izquierda) muestran el alto orden y disposicin regular de discos apilados. El rojo representa las altas concentraciones de la

rodopsina que se encuentran en las membranas de disco ; estructuras espaciadores ( pilares ) son de color verde . Barra de escala = 200 nm . C, plano de ROS . Se muestra un esquema de una membrana plasmtica y dos discos con las distancias medidas entre componentes de la membrana . Cilindros verdes representan monomrica rodopsina , que forma un grupo ms amplio en ROS nativa . B y C fueron reproducidos de la referencia . 19 con permiso.

Fig. 2. El anlisis de transcriptoma del ojo de tipo salvaje mouse. Secuenciacin de ARN WT ojo del ratn revela el paisaje transcripcional de este tejido y la cuantificacin precisa de las transcripciones presentes. Un desglose de las transcripciones asignadas se presenta junto con el nmero de transcripciones en cada categora. La tabla destaca Gene Ontologa fundamental (GO) categoras y subcategoras que se relacionan con diferentes aspectos del procesamiento visual plazo. Notable son 2.570 transcripciones de funcin desconocida de un total de 13.406 transcripciones detectados en el ojo WT, las perspectivas de nuevas vas de investigacin sobre la visin. Los datos mostrados se reproducen de la referencia. 5 con permiso. Estructura fotorreceptor Las protenas implicadas en la fototransduccin visual se encuentran

predominantemente en los segmentos externos de los fotorreceptores ( OS) de conos y bastones . Fotorreceptor OS de estas neuronas altamente diferenciados son en realidad cilios especializada (Fig. 1A ) . Los estudios estructurales de estos cilios se llevaron a cabo primero con el conejillo de Indias y rana segmentos externos de los bastoncillos (ROS ) ( 14 , 15 ) . Ms recientemente , tejido de ratn ha sido favorecido debido a la facilidad de manipulacin gentica ( 5 , 16 ) .

El promedio del ratn longitud y el dimetro de ROS se estimaron en 23,8 1,0 micras y 1,22 a 1,32 0,12 micras , respectivamente ( 17 ) . Un ratn ROS contiene ~ 800 discos membranosas apiladas una encima de la otra (Fig. 1A ) . Estas membranas de disco internas aumentan el rea total de superficie de la membrana por ~ 1500 veces en comparacin con la superficie de la membrana de plasma solo ( 18 ) , la promocin de una alta densidad de la varilla de pigmento visual rodopsina . Cryo - tomografa de electrones de vitrificado retina del ratn proporcionado fiable informacin morfolgica de tres dimensiones sobre esta estructura (Fig. 1B ) ( 19 ) . . figura 1C presenta un diagrama de esta estructura de

ROS con distancias entre diferentes componentes de la membrana obtenidos a partir de tomografas crio -electrn . Sobre la base de estos y los datos de microscopa electrnica antes mencionadas , el volumen interior de ROS , incluyendo tanto el espacio intradiscal y citoplasmtico , es de 32 10-12 ml , y el citoplasma ocupa 10 10-12 ml en el ROS ( 19 ) . Por lo tanto , es sorprendente que el espacio citoplasmtico utilizado para fototransduccin representa slo ~ 30 % de la superficie interior de un ROS , lo que subraya la importancia de las estructuras de la membrana interna de la fototransduccin . Esta cascada de la fototransduccin se produce como procesos catalticos en la interfaz de las membranas de disco y el citoplasma ( catlisis interfacial ) . Tomografas Cryo electrn tambin muestran espaciadores que mantienen los discos separados uno del otro y mantener las distancias adecuadas entre los discos adyacentes y la membrana de plasma ( 19 ) . Espaciadores consisten en complejos de protenas con masas moleculares estimados de ~ 500 kDa distribuidas a una densidad media de ~ 500 molecules/m2 a travs de los discos ( 19 ) . Intuitivamente , la presencia de protenas responsables del mantenimiento de esta estructura podra ser predicho porque los componentes estructurales son esenciales para el mantenimiento de la compleja arquitectura de estas membranas internas de fluido . Los espaciadores intermedios estn probablemente ocupados exclusivamente o en parte por protenas ricas en cido glutmico y una protena tetraspanina retina unido a la membrana denominado periferina / RDS ( 20 ) .

La rodopsina ocupa ~ 50 % del volumen de la membrana dentro de los discos de ROS ( 21 ) . Esta alta densidad de fotorreceptores opsina podra ser necesaria para aumentar la probabilidad de absorcin de fotones . Adems , parece que la rodopsina podra desempear un papel estructural importante en el

establecimiento de ROS morfologa, como opsina ratones knock -out slo forman pequeos apndices ROS temprano en la vida , antes de que degeneran las clulas ( 22 ) . El tamao de la ROS es dictado por el nivel de expresin de la

rodopsina ( 17 ) , como los ratones knock-out heterocigticos para el gen de la opsina poseen ~ 50 % ms pequeo de ROS ( 23 ) , y la sobreexpresin de esta protena conduce a la degeneracin de las clulas varilla ( 24 ) . La rodopsina no se distribuye uniformemente a lo largo de los discos ( 25 ) . Por ejemplo, las imgenes de crio-microscopa electrnica de vitrificado unstained nativa ratn ROS revelan regiones de alta densidad en la superficie del disco. Esta diferencia en la densidad slo podra surgir a partir de una distribucin desigual de la rodopsina , que es la protena principal en estos discos , que representa > 90 % de todas las protenas de disco . Por otra parte , los parches de membrana de disco que contienen filas de dmeros rodopsina han sido observadas por microscopa de fuerza atmica , un hallazgo apoyado por otros mtodos bioqumicos resumi anteriormente ( 3 ) . Parches paracristalinas dentro de los discos frescas cuidadosamente aislados de los fotorreceptores de la retina del ratn , en el que los bloques de construccin consisten en dmeros de la rodopsina ( 26 ) , implican importancia funcional en la biosntesis de la rodopsina o funcin ( 27 ) y siguen siendo un tema de considerable inters ( revisado en Ref. 28 . ) . Curiosamente , Corless et al . ( 29 ) encontraron que la estructura cristalina se forma a partir de pigmentos visuales en las clulas del cono cuando retinas rana estn expuestos a la luz.

Debido a que tanto el nivel de rodopsina de ratn ( ~ 520 pmol / ojo ) ( 16 , 17 ) y el nmero total de clulas ( 6,4 106 barras ) ( 30 ) pueden medirse con precisin , la rodopsina se calcula que tiene una concentracin de 4,62 mm en las membranas de disco y 8,23 mm con respecto al citoplasma de ROS . La densidad de la rodopsina en la membrana de disco se estima en 2,4 104 molecules/m2 en promedio o hasta ~ 3,4 104 molecules/m2 en parches de alta densidad . Mediciones de microscopa de fuerza atmica arroj una densidad de 30,00055,000 rodopsina molecules/m2 y ~ 108 molculas de rodopsina / varilla , parcialmente organizada en arrays paracristalinas ( 16 , 26 ) . Como todo el

transcriptoma retina ha sido analizada y la mayora de los ROS proteoma se ha identificado por espectrometra de masas , la atencin se centra ahora en las interacciones de estas protenas , sus efectos sobre la funcin , y su regulacin . Se requieren ms estudios estructurales para responder a estas preguntas. Estructuras de Fototransduccin y Componentes ciclo visual Profundizar en la comprensin molecular de fototransduccin centra

inevitablemente en las estructuras de los componentes del ciclo fototransduccin y retinoides y sus complejos , porque la organizacin espacial de las protenas fotorreceptoras subyace en su capacidad funcional para recoger la luz y generar una seal neuronal. Gran progreso ya se ha hecho mediante la definicin de las estructuras de un nmero de protenas o fragmentos de longitud completa, ya sea solos o en complejo con las protenas efectoras ( vase la Ref. . 31 ) . Unos pocos ejemplos interesantes se enumeran a continuacin , pero es ms probable que se conocern en un futuro prximo sobre las estructuras de los diferentes elementos que intervienen en este proceso mediada por la protena T de aproximadamente la mayora de los otros sistemas de transduccin de seales en la naturaleza .

Estructuras de mltiples formas del receptor acoplado a protena G ( GPCR ) rodopsina ( fig. 3 ) ( 32-37 ) , as como diversas formas de las protenas G ( 38-40 ) , la protena del receptor con solapamiento arrestina ( 41 ) , o probables compaeros de la protena G que participan en la translocacin intracelular entre los compartimentos fotorreceptoras ( 42 ) , se han determinado ( 43 ) . La rodopsina se ha estudiado ampliamente como un GPCR prototipo ( 3 ) , y los conocimientos derivados de los estudios bioqumicos y biofsicos integrales de rodopsina y su protena G afn , transducina , han mejorado significativamente nuestra comprensin de la sealizacin de GPCR en general ( 44 ) .

Visualizacin de fotoactivacin y la posterior activacin de la protena G . A, representacin estructural del proceso de fotoactivacin . Tras la adsorcin de un fotn de luz, el agonista inverso unido cromforo 11 - cis -retinal isomeriza al alltrans - estatal. A travs de una serie de cambios a pequea escala en las cadenas laterales de protenas y sus interacciones con las molculas de agua unidas , esta seal inicial se transmite a la superficie citoplasmtica 40 distancia, donde se desencadena el intercambio de nucletidos de la protena G heterotrimeric transducina . Tras el intercambio de nucletidos , se disocia transducina y activa los eventos de sealizacin corriente abajo . B , documentacin fotogrfica de los cambios espectrales en la rodopsina despus de la activacin . Una vez que la rodopsina en su estado 11 - cis-retinal unida a oscuro ( a) se expone a la luz , que pasa inmediatamente a travs de una serie de estados photointermediate , incluyendo metarodopsina I ( meta I , b ) , y, finalmente, avanzar a la Rho * ( metarodopsina estado activado II ( Meta II ) ) ( c ) . Todas las imgenes mostradas fueron tomadas despus de la exposicin con iluminacin de la habitacin estndar ( 10 y 40 s ) . Tras el tratamiento con hidroxilamina , el cromforo se hidroliza , lo que resulta en una solucin en gran medida incoloro ( d ) . C, modelo del complejo rodopsina protena G basada en la reconstruccin de una partcula de la entidad nativa tincin negativa . Un modelo basado en resolver las estructuras de rayos X fue construido en limitaciones impuestas por el mapa proporcionado a partir del anlisis de una sola partcula ( 62 ) . Esta orientacin de

una protena G y su extremos N y C se recapitula slo en el mismo grado por la estructura del receptor -G - nanocuerpos 2 - adrenrgico ( 100 ) . Una mejor comprensin de la dinmica de la activacin de la rodopsina y la interaccin con el ligando y la protena G se ha obtenido ms recientemente por tcnicas de RMN que muestran flexibilidad conformacional de este receptor y la protena G a la activacin ( 45-48 ) . Varios mtodos demostraron que las protenas de membrana ( 49 ) , incluyendo la rodopsina ( 50 ) , integrales contienen molculas de agua ordenadas que desempean papeles importantes en la estructura y funcin . Estas molculas de agua podra ser la clave para el plegado inicial de estas protenas , ya que se insertan en las membranas , lo que facilita su montaje en entidades funcionales , as como jugar papeles en el proceso de activacin . Utilizando tcnicas de footprinting radiolticos , se encontr que las molculas de agua estn asociados con residuos importantes altamente conservados y funcionalmente ( 50 ) . En todos los sub - 3 resolucin de estructuras cristalinas GPCR determinados hasta la fecha , la observacin de las aguas " conservadas " en lugares similares apoya la nocin de que estas aguas son propensos a ser tan importante para la funcin del receptor como los residuos de aminocidos conservados ( 32 , 37 , 51 ) .

Miristoiladas Ca2 + - protenas de unin clave que intervienen en la fototransduccin , a saber guanilato ciclasa protenas activadoras de ( 52 ) , se han visualizado a alta resolucin mediante RMN y mtodos cristalogrficos para revelar su arquitectura interna , pero slo en sus formas enlazados a Ca2 + - ( 5355 ) . Los estudios ms avanzados se han realizado en otra protena llamada fotorreceptor myristoylated recoverina . En recoverina , Ca2 + induce la extrusin N-terminal de un grupo miristoilo que interacta con una bicapa de la membrana lipdica ( 56 , 57 ) . Esta transicin , denomina un interruptor de calcio - miristoil , podra permitir una protena a translocan desde el citoplasma a las membranas en

una forma dependiente de calcio ( 56 ) . En contraste , GCAP1 tiene su grupo myristoylated ligadas dentro de una cavidad formada por la cadena polipeptdica , pero esto no excluye la posibilidad de que este grupo acilo se moviliza en complejos con guanilato ciclasas especficas .

Otras estructuras importantes de protenas fototransduccin incluyen rodopsina quinasa ( GRK1 ) ( 58 ) y RGS - 9 ( regulador de la protena G de sealizacin 9 ) , este ltimo solo o en complejo con el activado - subunidad de la protena G transducina fotorreceptor y / o un subunidad inhibidora de la fosfodiesterasa 6 ( 59 , 60 ) . Estos estudios proporcionan informacin especfica sobre la terminacin de la transduccin de seales en fotoactivado rodopsina y transducina protena G activada .

Adems

de

las

estructuras

cristalinas

de

alta

resolucin

mtodos

complementarios han demostrado ser informativo acerca de las protenas complejas que no son sin embargo susceptibles de enfoques cristalogrficos . Entre estos mtodos se crio-microscopa electrnica y el anlisis de una sola partcula. Por ejemplo , el anlisis de una sola partcula y el modelado proporcionan los primeros puntos de vista de la fosfodiesterasa de organizacin ( 60 , 61 ) y del complejo dimrico de rodopsina y transducina heterotrimrica ( fig. 3 ) ( 62 ) . Sin embargo , muchas protenas adicionales cuyo nivel atmico detalles estructurales son fundamentales para la comprensin de la regulacin y el mecanismo preciso de fototransduccin seguir escapar interrogatorio estructural.

Adems de estos receptores funcionales , enzimas y protenas estructurales , la transformacin qumica de los metabolitos retinoides , es decir, el ciclo de retinoide , es crtico para la funcin visual adecuada . La estructura de los retinoides

isomerasa RPE65 , la enzima clave de la va metablica , se ha determinado ( 63 ) . Esta estructura cristalina revela un motivo - hlice de siete palas con extensiones de un solo captulo en las lminas VI y VII y una extensin de dos hebras en la lmina III (Fig. 4 ) . Esta estructura cristalina proporciona una base para entender RPE65 membrana de unin a retinoide y la isomerizacin catalizada por la enzima . La estructura de una protena de 11 - cis-retinal de unin importante llamada protena de unin a retinaldehdo celular tiene un ncleo hidrofbico definido que es responsable de secuestrante 11 - cis-retinal ( 64 ) . Adems , la estructura del mutante R234W de retinaldehdo celular protena de unin , que est asociada con la distrofia Botnia y compromisos regeneracin pigmento visual , identific la base estructural de que la enfermedad ( 4 ) . A pesar de estos avances , sigue habiendo muchas preguntas con respecto a la qumica del ciclo retinoide .

Fig. 4. Ciclo retinoide regenera cromforo pigmento visual 11 - cis -retinal . En ROS , 11 - cis -retinal est obligado a opsina , que forma la rodopsina ( estructura de toma de ref. 32 ) . La absorcin de un fotn de la luz por la rodopsina causa fotoisomerizacin de 11 - cis -retinal a la sealizacin all- trans - retinal y

productiva , llevando eventualmente a la liberacin de todo-trans -retinal del bolsillo cromforo vinculante de esta opsina . Todo-trans -retinal se reduce a todotrans - retinol en una reaccin catalizada por deshidrogenasas todo-trans - retinol NADPH - dependientes . Entonces , todo-trans - retinol debe difundirse en la capa de clulas RPE adyacente. Este proceso est activado por esterificacin del retinol con cidos grasos en una reaccin catalizada por la lecitina : retinol aciltransferasa . En el RPE , estos steres de todo-trans - retinilo tienden a formar estructuras intracelulares denominadas retinosomes . Estos steres sirven como sustratos para la isomerasa RPE65 retinoide , que los convierte en 11 - cis - retinol ( estructura de toma de Ref. . 63 ) , que se oxida ms atrs de 11 - cis-retinal por deshidrogenasas de retinol . 11 - cis -retinal formado en el EPR difunde de nuevo en el ROS porque esta reaccin es prcticamente irreversible . Este ltimo paso tambin se completa el ciclo de recombinacin de 11 - cis -retinal con la opsina para formar rodopsina . El concepto plasmado en esta figura fue tomada de la referencia . 102 . Regeneracin transcurrido Cromforo : Ciclo Retinoid Para la retina a permanecer sensible a la luz y mantener la visin , 11 - cis-retinal , que se isomeriza a todo-trans -retinal , debe ser continua y eficiente regenerada ( 65 ) . La constante de tiempo para la regeneracin de la rodopsina es ~ 400 s , y que para el cono de pigmento de la regeneracin es de ~ 100 s ( 66 ) . El trabajo pionero de Khne y Wald ( 67-69 ) sent las bases de nuestra actual comprensin de la fotoqumica de la visin. Este proceso se lleva a cabo en dos sistemas celulares, los fotorreceptores de la retina y la RPE adyacente (Fig. 4 ) . Desde un punto de vista qumico , isomerizacin enzimtica del cromforo parece ser un problema formidable en regioselectividad . Lo que regula la especificidad de la conversin de un todo-trans - retinol a un 11 - cis - ismero especfico , cuando esta molcula tiene un nico grupo funcional ( - OH) y varias posibilidades para cis- isomerizaciones nicas o mltiples ? Esta reaccin tambin debe ocurrir continuamente en un ambiente membranosa / acuosa a la temperatura corporal .

Por otra parte , el cromforo tiene otras propiedades qumicas que deben ser utilizados inteligentemente . En primer lugar, que contiene cinco o seis dobles enlaces conjugados que permiten la absorcin de luz en el rango visible del espectro cuando se conjuga con la protena a travs de una base de Schiff . En segundo lugar, como se predijo por Pauling ( 70 ) , la repulsin entre los dos grupos metilo hace 11 - cis-retinal un ismero inestable, lo que anima a su isomerizacin a todo-trans -retinal . En tercer lugar , el retinol forma fcilmente uno de los carbocationes ms estables en biologa ( 71 ) , lo que permite reorganizacin de enlaces dobles . En cuarto lugar, la isomerizacin del retinol tiene una energa de activacin relativamente baja ( 72 ) . Se han identificado tres mecanismos qumicos para la isomerizacin de poliisoprenoides doble enlace conjugado en los sistemas biolgicos . ( a) Un producto carbocatin estado de transicin se forma a partir de steres de retinilo por escisin alquilo ; este carbocatin a continuacin, se ajusta a una conformacin 11 - cis - retinol - como para ajustarse al sitio activo de la enzima , y dobles enlaces se restablece cuando el agua es aadido (revisado en ref. 73 ) . ( b ) Un doble enlace especfico est saturado ; la transicin resultante estado intermedio gira , y el doble enlace se restablece por desaturacin ( 74 ) , como se observa en tomate y Arabidopsis isomerasa carotenoide , CrtISO ( 75 ) . ( c ) Una escisin oxidativa de los carotenoides genera dos molculas de la retina en cis-y trans - formas , como en el caso de NinaB ( 76 ) . La explicacin estructural de estas actividades dioxigenasa y isomerasa dispares es fundamental para la comprensin de los mecanismos moleculares empleados por esta clase de enzimas .

Progreso notable se ha incrementado nuestro conocimiento del ciclo retinoide , ampliando el trabajo tan brillantemente iniciado hace ms de un siglo (Fig. 4 ) . Varias revisiones extensivas han proporcionado una actualizacin actual de este curso ( 4 , 65, 66 , 73) . Aunque la fotoqumica nica del ciclo mantiene la visin, un alto flujo de fotones por exposicin a la luz puede llevar a los niveles elevados

de metabolitos de la retina que se acumula a lo largo de la vida e inducen degeneracin de los fotorreceptores ( 77 ) . El bloqueo de la acumulacin y la accin de estos compuestos intermedios txicos y la prevencin de tales degeneracin de los fotorreceptores puede aliviar las principales enfermedades visuales humanos tales como la enfermedad de Stargardt y la degeneracin macular relacionada con la edad .

Como se mencion antes, el amplio rango dinmico de nuestra visin tambin plantea la intrigante pregunta de cunto cromforo se consume durante su vida . Este clculo requiere varios supuestos ( vase, por ejemplo , Ref. . 78 ) , pero la alta sensibilidad del sistema visual , el gran nmero de Avogadro , y la masa molecular bajo del cromforo sugieren que una exposicin a la luz realista equivaldra al consumo de ~ 1 mmol o slo 284 mg de 11 - cis -retinal durante un perodo de vida !

Aunque no est claro por qu se emplean otros tipos de clulas de fotorreceptores cromforo para la regeneracin de por s , el EPR adyacente es vital para el mantenimiento de la arquitectura y funcin de los fotorreceptores . As, dos compartimentos celulares estn asociados principalmente con el ciclo retinoide , el fotorreceptor OS de conos y bastones y el RPE estrechamente asociada ( 65 ) . Las clulas de RPE son esenciales para la regeneracin cromforo en ambos conos y bastones ( 79 , 80 ) . Adems , los conos parecen estar suplementado con 11 - cis - retinol por las clulas de Mller ( 81 , 82 ) .

El flujo de salida de los retinoides de fotorreceptores a la RPE requiere lecitina de RPE -expres : retinol aciltransferasa , que esterifica el retinol con un cido graso para formar steres de retinilo ( fig. 4 ) ( 83 ) . Debido a que los steres de retinilo

tienen una propensin a la auto -agregado y forman estructuras similares a gota de aceite ( 84 ) llamados retinosomes en el EPR ( 85 , 86 ) , se esperara que un flujo de retinol de conos y bastones a la RPE basado en termodinmica consideraciones . El flujo de la espalda 11 - cis-retinal de la RPE de bastones y conos se rige por la difusin facilitada por un "sumidero " opsina , es decir, la reaccin prcticamente irreversible de opsinas , especialmente varilla opsina , con el cromforo que re - establece el Schiff protonada de base ( 21 ) . El cromforo se somete a la regeneracin cclica para cada fotn absorbido que causa la isomerizacin de los pigmentos visuales , pero ocasionalmente los retinoides se condensan con los lpidos o entre s para formar subproductos nocivos del ciclo retinoide ( 87 ) que requieren la regeneracin de las clulas fotorreceptoras . fotorreceptor Renovacin Los conos y bastones se exponen ampliamente a la luz en presencia de altos niveles de oxgeno durante la vida de un animal. Este entorno conducira inevitablemente a una rpida degeneracin de la retina , si este proceso daino no fue contrarrestada por mecanismos bioqumicos de proteccin y renovacin continua de estas clulas. Fotorreceptor OS son particularmente vulnerables a los daos , ya que contienen retinoides altamente reactivos y los altos niveles de fosfolpidos insaturados, tales como steres de cido docosahexaenoico ( 88 ) . Sin embargo, como terminales diferenciadas las clulas post- mitticas , varillas y los conos no se dividen . Por lo tanto , han desarrollado un mecanismo nico de la renovacin de contenido fotorreceptor OS por el derramamiento de OS puntas (Fig. 1A ) , que luego son fagocitados por el RPE . Los procesos apicales de las clulas de RPE rodean los extremos distales de 1.3 a 2.3 fotorreceptor sistema operativo ( 89 ) . En el caso de las barras de mamferos , ~ 10 % de los discos de ROS se elimina cada da , y las mismas cantidades de membrana y componentes de las protenas se producen en la base de ROS ( 89 ) . Este proceso requiere la sntesis de hasta 107 nuevos rodopsinas / ROS / da , o medio milln de rodopsinas / celulares / h . Adems , el soporte de la membrana debe tambin ser

sintetizada a una velocidad de ~ 77 cm2/da ( 18 ) . Este increble carga de GPCR y la membrana cepas de sntesis de la capacidad de este sistema de tal manera que una aberracin mnima podra llevar a una alteracin de los fotorreceptores renovacin disco del sistema operativo y la degeneracin relacionada con la varilla . Cuando fotorreceptor morfologa de disco del sistema operativo y la renovacin se ven afectados por mutaciones en los genes opsina , degeneracin se produce, como es el caso de la mutacin P23H en el gen de la opsina ( 90 ) y ms de 100 otros defectos documentados en la produccin y el transporte de la rodopsina causada por rodopsina gen mutaciones asociadas con retinitis pigmentosa ( 3 ) .

Curiosamente , fotorreceptor reciclaje disco del sistema operativo se produce de manera circadiana , con el pico de la varilla de vertimiento en la maana y el cono de desprendimiento despus de oscuro ( 91 ) . Los componentes implicados en este proceso de reciclaje se conocen slo parcialmente ( fig. 2 ) . Cuando se ingiere por el EPR , un sistema operativo fotorreceptor est rodeada por la membrana de plasma , produciendo una " fagosoma . " Esta estructura se somete a una serie de eventos de fusin con endosomas y lisosomas , donde varios elementos tales como lpidos insaturados y los retinoides se reciclan de nuevo a los fotorreceptores y incorporado en nuevos discos fotorreceptoras OS. Tal vez se mostrar una serie de genes con funcin desconocida que se encuentra en la retina / RPE total del transcriptoma que juegan un papel en este proceso y su regulacin ( 92 ) .

Por lo tanto , las clulas fotorreceptoras absolutamente requieren un RPE extremadamente activa metablicamente para su mantenimiento y supervivencia . Procesos degenerativos genticos y relacionados con la edad en las clulas RPE posteriormente conducen a la degeneracin de los fotorreceptores . Por ejemplo , en la regin ms metablicamente activa de la retina alrededor de la fvea , cada

clula RPE debe engullir 4 108 molculas de rodopsina / da . Es probable que los fotorreceptores alrededor de la fvea lugar la mayor demanda en el RPE , y, como consecuencia , esta regin es el primero a degenerar durante la degeneracin macular relacionada con la edad , evitando inicialmente la fvea . Melanopsin : Un Opsin invertebrados -como en la Retina Los pacientes con degeneracin retiniana hereditaria conservan regulacin patrn de sueo dependiente de la luz , aun cuando casi todos sus fotorreceptores han degenerado , pero este no es el caso cuando los ojos no estn presentes o en etapas avanzadas de glaucoma en el nervio ptico que conecta la retina al cerebro cortada ( 93 ) . Dos posibles explicaciones de este fenmeno son que se necesitan ( i ) slo un pequeo nmero de fotorreceptores supervivientes para regular el ciclo de sueo , y ( ii ) la retina contiene otros tipos de clulas sensibles a la luz . Utilizando tcnicas fisiolgicas y moleculares con la ayuda de la gentica del ratn , se estableci de manera inequvoca que la retina contiene un pequeo subconjunto de clulas ganglionares de la que son sensibles a la luz ( 94-96 ) . Estas clulas ganglionares (clulas ganglionares de la retina intrnsecamente fotosensibles ) expresan una molcula de rodopsina -como, melanopsina , con caractersticas de una opsina invertebrados . Las clulas ganglionares de la retina intrnsecamente fotosensibles consisten en distintas subpoblaciones que inervan el hipotlamo para controlar fotoarrastre circadiano , y el ncleo pretectal olivar y otros blancos cerebrales implicadas , por ejemplo, pupilar , producir otras funciones inducidos por la luz especficas ( 97 ) . El uso de melanopsina , que tiene un cromforo asociado de manera estable , en lugar de un miembro de la subfamilia de opsina que recicla el cromforo se enzimticamente probable dictada por la necesidad de evitar el ciclo de retinoide cannica . Las clulas ganglionares se encuentran demasiado lejos de la RPE a ser fcilmente suministrada con un nuevo cromforo . Por lo tanto , un pigmento biestable conservado evolutivamente desde anfioxo ( protochordate ) representara una solucin til .

Todava no disponemos de informacin estructural sobre la melanopsina , pero es similar a otros rodopsinas invertebrados. Una informacin valiosa sobre la funcin de invertebrados rodopsina se ha derivado de los estudios cristalogrficos . La estructura cristalina 2,5 resolucin de una rodopsina invertebrado ( calamar Todarodes pacificus ) muestra una estructura de paquete de siete helicoidal prototpico con el cromforo situado a unos dos tercios de la superficie citoplsmica ( 98 ) . En particular , la fototransduccin invertebrado utiliza una protena G de tipo Gq que est implicado en la regulacin de la produccin de inositol 1,4,5 -trifosfato . En contraste con la rodopsina bovina , sin embargo , hlices V y VI se extienden en el medio citoplasmtico y comprenden parte de la superficie de reconocimiento de protena G . Se ha sugerido que invertebrado rodopsina puede oscilar entre cis - y trans - conformaciones de la retina despus de la absorcin de fotones por una de estas formas ( 99 ) . En membranas nativas fisiolgicos , invertebrado rodopsina se organiza en las membranas microvillar hexagonal envasados de fotorreceptores , y en los cristales , que se asocia fuertemente en una forma dimrica ( 98 ) .

Progresos extraordinarios realizados durante las 2 ltimas dcadas ha permitido el desarrollo de mltiples enfoques dirigidos a la comprensin de las enfermedades que causan ceguera . Esta unin de la investigacin bsica y traslacional ejemplifica el ms alto nivel de progreso actual en la biologa.