Radicales Libres, Estrs Oxidativo y Defensa Antioxidante Celular

Marcia Avello1, Mario Suwalsky2

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Departamento de Farmacia, Facultad de Farmacia, 2Departamento de Polmeros, Facultad de Ciencias Qumicas, Universidad de Concepcin.

Una gran cantidad de estudios epidemiolgicos han demostrado que personas que consumen una dieta rica en frutas y verduras presentan un menor riesgo de desarrollar cncer, enfermedades cardiovasculares y condiciones crnicas tales como cataratas, asma y bronquitis. Esto ha conducido a intentos para identificar los componentes especficos responsables de los efectos positivos en la salud por el consumo de alimentos de origen vegetal. Una explicacin que ha encontrado una gran aceptacin es que ello se debera a la presencia de nutrientes antioxidantes tales como las vitamina C y E, carotenoides, flavonoides, selenio, etc., los que interferiran con el dao oxidativo al ADN, protenas y lpidos. En efecto, los procesos metablicos normales producen grandes cantidades de especies oxidantes (radicales libres) que pueden daar clulas tejidos a travs de numerosos mecanismos. Una contribucin a la comprensin de este fenmeno es el que se presenta en este artculo. Radicales libres. Son tomos o grupos de tomos que tienen un electrn desapareado por lo que son muy reactivos ya que tienden a robar un electrn de molculas estables con el fin de alcanzar su estabilidad electroqumica. Una vez que el radical libre ha conseguido sustraer el electrn que necesita para aparear su electrn libre, la molcula estable que se lo cede se convierte a su vez en un radical libre por quedar con un electrn desapareado, inicindose as una verdadera reaccin en cadena que destruye nuestras clulas. La vida media biolgica del radical libre es de microsegundos, pero tiene la capacidad de reaccionar con todo lo que est a su alrededor provocando un gran dao a molculas y a membranas celulares. Los radicales libres no son intrnsecamente deletreos. De hecho, nuestro propio cuerpo los fabrica en cantidades moderadas para luchar contra bacterias y virus. Los radicales libres producidos por el cuerpo para llevar a cabo determinadas funciones son neutralizados fcilmente por nuestro propio sistema. Con este fin, nuestro cuerpo produce unas enzimas (como la catalasa o la dismutasa) que son las encargadas de neutralizarlos. Estas enzimas tienen la capacidad de desarmar a los radicales libres sin desestabilizarse. Antioxidantes. Las reacciones qumicas de los radicales libres se dan constantemente en las clulas de nuestro cuerpo y son necesarias para la salud, pero el proceso debe ser controlado con una adecuada proteccin antioxidante. Un antioxidante es una sustancia capaz de neutralizar la accin oxidante de los radicales libres, liberando electrones en nuestra sangre que son captados por los radicales libres, manteniendo su estabilidad. Nuestro organismo est constantemente luchando contra los radicales libres. El problema para nuestra salud se produce cuando nuestro organismo tiene que soportar un exceso de radicales libres durante aos, producidos mayormente por contaminantes externos que penetran en nuestro organismo como consecuencia de la contaminacin atmosfrica, el humo de cigarrillos - que contiene hidrocarburos aromticos polinucleares - as como aldehdos que producen distintos tipos de radicales libres en nuestro organismo. El

consumo de aceites vegetales hidrogenados tales como la margarina y el consumo de cidos grasos trans como los de las grasas de la carne y de la leche tambin contribuyen al aumento de los radicales libres. Especies Reactivas del Oxgeno (EROs). Es el trmino que se aplica colectivamente a las molculas radicales y no radicales que son agentes oxidantes y/o son fcilmente convertidos a radicales. En la ltima dcada se han acumulado evidencias que permiten afirmar que los radicales libres y el conjunto de especies reactivas que se les asocian juegan un papel central en nuestro equilibrio homeosttico (normal funcionamiento de los mecanismos de regulacin que conservan el estado normal del medio fisiolgico). En mamferos son muchos los procesos fisiolgicos gatillados por estas especies, como por ejemplo los mecanismos patgenos asociados a virus, bacterias, parsitos y clulas anormales, constituyendo un mecanismo de defensa del organismo frente a estos agresores. Estrs oxidativo. Cuando el aumento del contenido intracelular de EROs sobrepasa las defensas antioxidantes de la clula se produce el estrs oxidativo, a travs del cual se induce dao a molculas biolgicas como lpidos, protenas, cidos nucleicos, etc. El estrs oxidativo se presenta en diversos estados patolgicos en los cuales se altera la funcionalidad celular, contribuyendo o retroalimentando el desarrollo de enfermedades degenerativas como la aterosclerosis, cardiomiopatas, enfermedades neurolgicas, cncer, etc. ESTRS OXIDATIVO

DEFENSAS ANTIOXIDANTES Radicales Libres

FUENTES DE RADICALES LIBRES En la mitocondria se estima que del 2-4% del oxgeno consumido durante el transporte de electrones no se reduce a agua por la citocromo C oxidasa, sino que se forma el anin semiquinona el que puede transferir uno o dos electrones al oxgeno molecular con la subsecuente formacin del anin superxido (O2-). Este, a su vez, puede generar otras especies reactivas de oxgeno; en exceso reaccionan con toda clase de macromolculas que causan anormalidades conductuales, citotoxicidad y dao mutagnico. El O2- es convertido a perxido de hidrgeno (H2O2) espontneamente o por va enzimtica. 2O2- + 2H+ H2O2 + O2

Mediante la reaccin de Fenton con complejos de bajo peso molecular de Fe(II) como el citrato-Fe(II) o la ATPasa-Fe(II) genera radicales hidroxilo (OH-). A su vez los iones de cobre pueden participar en reacciones de Fenton. La re-reduccin y reciclaje de los iones hierro y cobre son catalizadas en vivo por el O2- y el ion ascorbato. Fe3+ + O2Fe2+ + H2O2 Fe2+ + O2 Fe3+ + OH- + OH-

Otras fuentes de O2- y de H2O2 son las enzimas oxidativas, como la xantin oxidasa, las NADPH/NADH oxidasas, la acil CoA oxidasa, que son enzimas que se activan en procesos fisiolgicos que favorecen la produccin de metabolitos txicos del oxgeno, y los citocromos P-450 y pequeas molculas autooxidables como las catecolaminas y las quinonas. En el sistema inmunolgico de los organismos, en especial las clulas fagocticas, generan una importante cantidad de H2O2, mediante NADPH oxidasa unida a membranas. Aunque las clulas no fagocticas tambin generan H2O2 mediante NADPH oxidasa, sta es estructural y genticamente diferente, y su tasa de generacin es apenas el 1% del generado por las clulas fagocticas. Otra especie de oxgeno reactivo es el oxgeno singlete (102), que puede generarse cuando los electrones que han sido excitados por la luz pasan su energa de excitacin a uno de los electrones desapareados del O2, los que cambian su sentido de giro, y aparendose con el otro electrn. Tambin puede formarse durante la dismutacin del O2- en las reacciones de Haber-Weiss y por la descomposicin del H2O2; produce daos al ADN, a las membranas celulares y causa modificaciones en los aminocidos. O2- + H2O2 2O2- + 2H+ O21

02 + OH- + OH1 02 + H2O2 H2O2 OH-

SUSTRATOS ENDGENOS CELULARES

Protenas

Lpidos

Hidratos de Carbono

Molculas de ADN

Las fuentes exgenas generadoras de especies reactivas de oxgeno en los organismos son antibiticos, medicamentos contaminantes, quimioterapia, la exposicin a radiacin ultravioleta e ionizante. Fuentes de Radicales Libres 1. Metabolismo Celular del Oxgeno 2. Reacciones de xido-Reduccin Fagocitosis Autoxidacin de Catecolaminas

 3. Otras Fuentes

Sntesis de Prostaglandinas Oxidacin de Hipoxantina y Xantina

Peroxidacin lipdica. Todas las clulas estn rodeadas por una membrana celular que las separa del medio extracelular. La membrana celular contiene enzimas, canales, receptores y antgenos que juegan papeles vitales en la interaccin de la clula con otras clulas, hormonas y otros agentes reguladores del liquido extracelular. La estructura bsica de todas las membranas biolgicas es la bicapa lipdica, la que funciona como una barrera de permeabilidad selectiva. stas son ricas en cidos grasos poliinsaturados (PUFAs) y por lo tanto vulnerables al ataque de radicales libres. De particular importancia son las reacciones mediadas por radicales libres que traen como consecuencia la peroxidacin lipdica. Esta es generalmente inducida por un radical hidroxilo (HO-) que sustrae un hidrgeno a la cadena lateral de un cido graso formando un radical carbonado (R). Este ltimo reacciona con oxgeno para formar perxidos cclicos y radicales hidroperxidos (ROO) que propagan esta reaccin en cadena. Se forman igualmente radicales alcoxlicos lipoflicos (RO). La peroxidacin lipdica puede seguir propagndose en presencia de metales de transicin (Men+) existentes en el plasma, los que son catalizadores oxidativos. Los antioxidantes pueden formar complejos estables impidiendo su accin catablica. Adems, dependiendo de su coeficiente de particin y potencial redox, los antioxidantes pueden actuar libremente en la interfase celular comportndose como potentes protectores de clulas y lipoprotenas o estabilizando antioxidantes lipoflicos que previenen la peroxidacin lipdica. Peroxidacin Lipdica iniciada por el Radical (R) PUFA LH + R L + O2 LH + LOO LOOH + Men+ LOOH + Me
(n-1)+

L + RH LOO L + LOOH LO + Me(n-1)+ LOO + Me

(1) (2) (3)

(4)
n+

(1) Fase de iniciacin de la peroxidacin lipdica provocada por el radical (R), el que reacciona con un grupo metileno de un PUFA; (2) etapa de propagacin; el oxgeno molecular reacciona con el radical carbonilo y forma rpidamente el radical lipoperxido (LOO). ste puede sustraer un hidrgeno de otro cido graso poliinsaturado (PUFA), anlogo a (1); (3) reaccin que termina la propagacin formndose el producto estable de la peroxidacin, el hidroperxido lipdico (LOOH), pero implica la posible conversin de numerosos PUFAs en hidroperxidos; (4) en presencia de metales de transicin el hidroperxido lipdico (LOOH) puede generar radicales capaces de reiniciar la lipoperoxidacin lipdica por el ciclo redox de estos iones metlicos.

Los mecanismos homeostticos con que el organismo enfrenta el dao oxidativo que habitualmente causan estas especies son numerosos y diversos, reflejando la multiplicidad de formas de radicales libres y especies reactivas, como tambin los numerosos compartimientos donde actan en el organismo y la propiedades fsicas de estos. Sistemas de defensa antioxidante celular. Son tambin adecuados a la muy corta vida media de los radicales libres. Comprenden molculas pequeas, endgenas y exgenas, macromolculas con capacidad antioxidante, y tambin enzimas antioxidantes y enzimas asociadas. La capacidad antioxidante celular est dada por mecanismos enzimticos y no enzimticos a travs de los cuales la clula anula la reactividad y/o inhibe la generacin de radicales libres. Los mecanismos enzimticos comprenden la superxido dismutasa (SOD), que cataliza la dismutacin del O2- a H2O2, la glutatin-peroxidasa y la glutatintransferasa, que reducen hidroperxidos a alcoholes, y la catalasa, que reduce H2O2 a H2O. Los mecanismos no enzimticos comprenden molculas como el glutatin (GSH), el cido ascrbico (vitamina C), -caroteno o provitamina A, vitamina E (-tocoferol), y protenas transportadoras de metales como la cuprena y ferritina. La vitamina C constituye el antioxidante hidrosoluble ms abundante en sangre, mientras que la vitamina E es el antioxidante lipoflico mayoritario. Los antioxidantes exgenos provienen de la dieta. Dentro de este grupo tambin cuentan la vitamina E, la vitamina C y los carotenoides. El selenio, el ms txico de los minerales incluidos en nuestra dieta, acta junto con la vitamina E como antioxidante. Sus fuentes son la carne, pescado, cereales integrales y productos lcteos. Existe un grupo de compuestos naturales, los polifenoles, que son potentes antioxidantes presentes en verduras y frutas, en los que ejercen acciones secundarias como otorgar coloracin y participan en el proceso de polinizacin. En esta familia se encuentran los flavonoides, cidos fenlicos y taninos. Estas sustancias son capaces de captar especies reactivas de oxgeno, consumindose en este proceso. Entre las fuentes de polifenoles podemos citar legumbres verdes, ajo, t verde, aceite y frutos del olivo, semillas de caf, uvas, berries y frutos ctricos. Sistemas de Defensa Celulares contra la Produccin de Radicales Libres 1. Enzimticos Superoxido Dismutasa (SOD) Glutatin Peroxidasa (GP) Glutatin Tranferasa (GT) Catalasa

2. No Enzimticos -tocoferol (Vitamina E) Acido ascrbico (Vitamina C) -caroteno o Provitamina A Protenas Transportadoras de Metales de Transicin Captadores de Radicales Libres (Polifenoles) Agradecimientos: A Proyectos FONDECYT (1020476) y DIUC (204.074.037-1.0)

BIBLIOGRAFA Bruneton, J.(2000). Farmacognosia. Fitoqumica de Plantas Medicinales (2 ed), Acribia S.A., Espaa. 382-383, 673-676. Dalton, T., Shertzer, H.G., Puga, A. (1999). Regulaton of gene expression by reactive oxygen. Annu. Rev.Pharmacol. Toxicol. 39, 67-101. Finkel, T., Holbrook, N.J. (2000). Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing. Nature 408, 23-247. Gamaley, I.A., Kluybin, I.V. (1999). Roles of reactivo oxygen species: signaling and regulation of cellular functions. Int.Review Cytology 188, 203-255. Goodam, S.T. (1998). Cell Membranes. En: Medical Cell Biology (Goodman, S.T.,.ed) Lippincott-Raven Publishers, USA. 2: 27- 65 Greenwald, R. (1990). Current approaches to the development of oxygen radical scavengers. Drugs of Today 26, 299-307. Gutteridge, J., Halliwell, B. (1999). Antioxidant protection and oxygen radal signaling. En: Reactive Oxygen Species in Biological Systems. An Interdiscipliary Approach. (D.L. Gilbert and C.A. Colton, eds.) Kluwer Academic Press. Plenum Publishers New York. 189-218. Halliwell, B. (1990). How to characterize a biological antioxidant Free Radical Res. Commun. 9, 1-32. Hansberg, W. (1999). La biologa del dioxgeno en singlete. TIP Revista Especializada en Ciencias Qumico-Biolgicas 2, 47-55. Kinsella, J.E., Frankel, E., German, B., Kanner, J. (1993). Possible mechanism for the protective role of antioxidants in wine and plant foods. Food Technology 85-89. Palamanda, J., Kehrer, J. (1992). Inhibition of protein carbonyl formation and lipid peroxidation by glutathione in rat liver microsomes. Arch. Biochem. Biophys. 293, 103-109. Porter, N.A. (1984). Chemistry of lipid peroxidation- Methods Enzymol. 105, 273-82. Salas, C., Que son los radicals libres? http://quimicayciencias.cjb.net/ Stanner, S.A, Hughes, J., Kelly, C.N.M., Butriss, J. (2004). A review of the epidemiological evidence for the antioxidant hypothesis. Publ. Health Nutr. 7, 407422. Stadtman, E.R., Berlett, B.S. (1991). Fenton chemistry. Amino acid oxidation. J. Biol.Chem. 266, 17201-17211. Thornalley, P.J., Vasak, M. (1985). Possible role for metallothionein in protection against radiation-induced oxidative stress. Kinetics and mechanism of its reaction with superoxide and hydroxyl rradicals. Biochem. Biophys. Acta 827, 36-44.