U.T.I.

Biologa Celular

Enzimas

Departamento de Bioqumica Noviembre de 2005

Enzimas
A. Propiedades generales de las enzimas B. Principios fundamentales de su accin cataltica C. Introduccin a la cintica enzimtica D. Mecanismos de accin enzimticos E. Enzimas reguladores

A. Propiedades generales de las enzimas (I)

1. Son los catalizadores de las reacciones qumicas de los sistemas biolgicos 2. Tienen gran poder cataltico 3. Poseen un elevado grado de especificidad de sustrato 4. Funcionan en soluciones acuosas en condiciones suaves de pH y temperatura

A. Propiedades generales de las enzimas (II)

5. La mayora de las enzimas son protenas:
La funcin depende de la integridad de la conformacin proteica nativa Existen enzimas que son protenas simples y otras que requieren componentes qumicos adicionales: Cofactores: - iones inorgnicos - complejos orgnicos coenzimas grupos prostticos

Holoenzima / Apoenzima

A. Propiedades generales de las enzimas (III)

6. Las enzimas se clasifican segn la reaccin catalizada:
Nomenclatura: Nmero clasificatorio de 4 dgitos (E.C.) Nombre sistemtico Nombre trivial ADP + D-Glucosa-fosfato

ATP + D-Glucosa

Nmero clasificatorio: E.C. 2.7.1.1. 2. Clase: Transferasa 7. Subclase: Fosfotransferasa 1. Fosfotransferasas con OH como aceptor 1. D-glucosa como aceptor del fosfato Nombre sistemtico: ATP:glucosa fosfotransferasa Nombre trivial: hexoquinasa

Enzimas
A. Propiedades generales de las enzimas B. Principios fundamentales de su accin cataltica C. Introduccin a la cintica enzimtica D. Mecanismos de accin enzimticos E. Enzimas reguladores

B. Principios fundamentales de la accin cataltica de las enzimas

cmo funcionan las enzimas ?
En condiciones fisiolgicas las reacciones sin catalizar tienden a ser lentas (estabilidad de biomolculas) Muchas reacciones bioqumicas suponen situaciones poco probables Una enzima soluciona estos problemas proporcionando un ambiente tridimensional favorable a la reaccin (sitio activo)

Las enzimas alteran las velocidades de reaccin pero no los equilibrios (A) S (B) E + S ES EP P E+P

(A)

(B)

Las velocidades de reaccin y los equilibrios tienen definiciones termodinmicas precisas

Equilibrio de reaccin depende Go Velocidad de reaccin depende de G S P Keq = [P] [S] Go = - RT ln Keq

V = k [S]

k=

KT h

e - G / RT

K = constante de Boltzmann h = constante de Planck

Las interacciones dbiles entre enzima y sustrato son ptimas en el estado de transicin

En el estado de transicin las interacciones entre la enzima y el sustrato son ptimas

La energa de fijacin entre enzima y sustrato proporciona especificidad de reaccin y catlisis

Grupos catalticos especficos contribuyen a la catlisis

Enzimas
A. Propiedades generales de las enzimas B. Principios fundamentales de su accin cataltica C. Introduccin a la cintica enzimtica D. Mecanismos de accin enzimticos E. Enzimas reguladores

El modelo de Michaelis-Menten (1913)

Leonor Michaelis

Maud Menten

La concentracin de sustrato afecta la velocidad de reaccin catalizada por enzimas

Cintica del estado estacionario

Cintica del estado estacionario

La relacin entre concentracin de sustrato y velocidad de reaccin enzimtica puede expresarse de manera cuantitativa

Ecuacin de Michaelis - Menten

Ecuacin de Lineweaver -Burk

El significado de Km y Vmax es nico para cada enzima

El significado real de Km depende del mecanismo de reaccin Si k2 es la limitante de reaccin entonces Km = k-1/k1 = Ks (o KD de ES) La Vmax de enzimas michaelianas es equivalente a k2 [ET] Si k2 es la limitante de reaccin entonces k2 = kcat o No de recambio

El N de recambio se define para una unidad de tiempo definida, como el nmero de molculas de sustrato convertidas en producto por una molcula de enzima, cuando esta enzima est saturada

Muchas enzimas catalizan reacciones con dos o ms sustratos

Inhibicin competitiva

Inhibicin no-competitiva

Inhibicin acompetitiva

Efecto del pH sobre la actividad enzimtica

Enzimas
A. Propiedades generales de las enzimas B. Principios fundamentales de su accin cataltica C. Introduccin a la cintica enzimtica D. Mecanismos de accin enzimticos E. Enzimas reguladores

Mecanismo de accin de la quimotripsina

Cambio conformacional de la hexoquinasa

Enzimas
A. Propiedades generales de las enzimas B. Principios fundamentales de su accin cataltica C. Introduccin a la cintica enzimtica D. Mecanismos de accin enzimticos E. Enzimas reguladoras

Enzimas reguladoras
1. Enzimas alostricas Son reguladas por unin no-covalente de moduladores Constituyen excepciones a muchas reglas generales - efecto homotrpico (positivo o negativo) - efecto heterotrpico (positivo o negativo) Hay dos modelos que explican el comportamiento cintico de las enzimas alostricas - modelo simtrico (Monod) - Modelo secuencial (Koshland)

Enzimas reguladoras
2. Modulacin covalente reversible Fosforilacin Adenililacin Uridililacin ADP-ribosilacin Metilacin

Fosforilacin / defosforilacin

Activacin de zimgenos