Una purificacin de protenas es una serie de procesos que permiten aislar un slo tipo de protena de una mezcla compleja.

La purificacin de protenas es vital para la caracterizacin de la funcin, estructura en interacciones de la protena de inters, por ejemplo una enzima un receptor celular o un anticuerpo. El material inicial es generalmente un tejido biolgico o un cultivo microbiano. Hay varios pasos en el proceso de purificacin; puede liberar a la protena de la matriz que lo confina, separar las partes proteica y no proteica de la mezcla, y finalmente separar la protena deseada de todas las dems. Este ltimo paso puede ser el aspecto ms laborioso de la purificacin de protenas. TECNICAS DE PURIFICACION Un homogeneizador es un elemento del equipamiento de laboratorio utilizado para la homogeneizacin de distintos tipos de materiales, tales como tejidos, plantas, alimentos, suelo, y muchos otros. En Biologa y Bioqumica, los homogeneizadores tratan de disgregar los tejidos y romper las clulas, con el menor dao a la membrana plasmtica. La homogeneizacin es un paso muy comn en la preparacin de muestras biolgicas antes del anlisis de cidos nucleicos y protenas, o del estudio de clulas, metabolismo, agentes patgenos y otros muchos objetivos. TCNICAS DE HOMOGENEIZACIN El proceso de rotura celular se puede producir por tres mecanismos:1 Fuerzas de cizalladura producidas por lquidos. Fuerzas de cizalladura producidas por slidos. Fuerzas producidas por un mecanismo de cavitacin gaseosa. Mtodos qumicos y bioqumicos: Empleo de un medio hipotnico. Hidrlisis enzimtica. EL FRACCIONAMIENTO CELULAR o fraccionamiento subcelular es una tcnica de laboratorio, tras la disgregacin, en la que se intenta reagrupar las partculas, generalmente clulas u orgnulos celulares, en funcin de sus propiedades biofsicas. Mediante el fraccionamiento celular se consigue separar conjuntos homogneos, por lo general de orgnulos, a partir de una poblacin heterognea de clulas. ETAPAS Existen tres etapas principales en el fraccionamiento celular: 1. Disgregacin o rotura (homogeneizacin) de las clulas y liberacin de los orgnulos. 2. Macro filtracin. 3. Purificacin de componentes celulares o fraccionamiento celular propiamente dicho: Se aplican tcnicas de centrifugacin diferencial y en gradiente

Desnaturalizacin de una protena Desnaturalizacin irreversible de la protena de la clara de huevo y prdida de solubilidad, causadas por la alta temperatura (mientras se la fre).Las protenas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional (conformacin espacial) y as el caracterstico plegamiento de su estructura. Las protenas son filamentos largos de aminocidos unidos en una secuencia especfica. Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y ensamblan la combinacin requerida de aminocidos por la instruccin gentica, en un proceso conocido como transcripcin gentica. Las protenas recin creadas experimentan una modificacin pos modificacin en la que se agregan tomos o molculas adicionales, como el cobre, zinc e hierro. Una vez que finaliza este proceso, la protena comienza a plegarse sin alterar su secuencia (espontneamente, y a veces con asistencia de enzimas) de forma tal que los residuos hidrfobos de la protena quedan encerrados dentro de su estructura y los elementos hidrfilos quedan expuestos al exterior. La forma final de la protena determina cmo interaccionar con el entorno. Si la forma de la protena es alterada por algn factor externo (por ejemplo, aplicndole calor, cidos o lcalis), no es capaz de cumplir su funcin celular. ste es el proceso llamado desnaturalizacin. Raj Kumar SV. Plasma cell disorders. In: Goldman L, Schafer AI, eds. Cecil Medicine. 24th ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2011: chap 193. 14. Ultra centrifugacin La centrifugacin diferencial es un procedimiento comn en microbiologa y citologa, usado para separar ciertos orgnulos de su respectiva clula para un anlisis posterior de partes especficas de las clulas. En el proceso, primero se homogeniza una muestra de tejido para romper las membranas celulares y mezclar los contenidos de las clulas. Luego, esta mezcla homognea es sometida a repetidas centrifugaciones, cada vez removiendo el precipitado, e incrementando la fuerza centrfuga. Finalmente, la purificacin debe ser hecha por la sedimentacin de equilibrio, y la capa deseada es extrada para un futuro anlisis. La separacin est basada en el tamao y la densidad, donde las partculas ms grandes y densas son precipitadas en centrifugaciones de poca fuerza. Por ejemplo, las clulas completas no homogenizadas sern precipitadas en centrifugaciones con poca fuerza y en cortos intervalos como 1,000g por 5 minutos. Los fragmentos ms pequeos de las clulas y los orgnulos permanecen en el lquido sobrenadante y requieren ms fuerza centrfuga y ms tiempo para precipitarse. En general, uno puede enriquecer (separar o concentrar) los siguientes componentes de la clula, en orden de separacin, con la presente aplicacin: Clulas completas y ncleos; Mitocondria, lisosomas y peroxisomas; Micro somas (vesculas del retculo endoplasmtico); y Ribosomas y citosoles. 15. La cristalografa de rayos X es una tcnica experimental para el estudio y anlisis de materiales, basada en el fenmeno de difraccin de los rayos X por slidos en estado cristalino.

Los rayos X interactan con los electrones que rodean los tomos por ser su longitud de onda del mismo orden de magnitud que el radio atmico. El haz de rayos X emergente tras esta interaccin contiene informacin sobre la posicin y tipo de tomos encontrados en su camino. Los cristales, gracias a su estructura peridica, dispersan elsticamente los haces de rayos X en ciertas direcciones y los amplifican por interferencia constructiva, originando un patrn de difraccin. Existen varios tipos de detectores especiales para observar y medir la intensidad y posicin de los rayos X difractados, y su anlisis posterior por medios matemticos permite obtener una representacin a escala atmica de los tomos y molculas del material estudiado. LA ESPECTROSCOPA DE RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN) es una tcnica empleada principalmente en la elucidacin de estructuras moleculares, aunque tambin se puede emplear con fines cuantitativos y en estudios cinticos y termodinmicos. Algunos ncleos atmicos sometidos a un campo magntico externo absorben radiacin electromagntica en la regin de las frecuencias de radio o radiofrecuencias. Como la frecuencia exacta de esta absorcin depende del entorno de estos ncleos, se puede emplear para determinar la estructura de la molcula en donde se encuentran stos. Para que se pueda emplear la tcnica los ncleos deben tener un momento magntico distinto de cero. Esta condicin no la cumplen los ncleos con nmero msico y nmero atmico par (como el 12C, 16O, 32S). Los ncleos ms importantes en qumica orgnica son: 1H, 13C, 31P, 19F y 15N. Otros ncleos importantes: 7Li, 11B, 27Al, 29Si, 77Se, 117Sn, 195Pt, 199Hg, 203Tl, 205Tl, 207Pb RADIOISOTOPOS Son istopos radiactivos ya que tienen un ncleo atmico inestable (por el balance entre neutrones y protones) y emiten energa y partculas cuando cambia de esta forma a una ms estable. La energa liberada al cambiar de forma puede detectarse con un contador Geiger o con una pelcula fotogrfica. Cada radioistopo tiene un periodo de desintegracin o semivida caractersticas. La energa puede ser liberada, principalmente, en forma de rayos alfa (ncleos de helio), beta (electrones o positrones) o gamma (energa electromagntica).Varios istopos radiactivos inestables y artificiales tienen usos en medicina. Por ejemplo, un istopo del tecnecio (99mTc) puede usarse para identificar vasos sanguneos bloqueados. Varios istopos radiactivos naturales se usan para determinar cronologas, por ejemplo, arqueolgicas (14C) 1. Ross, M., Kaye, G., Pawlina, W. (2005). Histologa Texto y Atlas Color con Biologa Celular y Molecular. (4 ed.). Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana S.A. 2. Karp, G. Biologa Celular y Molecular. 4 ed. Mexico: Mc Graw-Hill (2006). 3. Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, P. Molecular Biology of the Cell. 4 Ed. New York: Garland Publishing (2002) 4. Seplveda, s., julio. Texto atlas de histologa biologa celular y tisular. Pag,(25-53)/390.

Microfotografa electrnica de una mitocondria al Microscopio electrnico de transmisin. Las zonas ms oscuras son denominadas electrn-densas y las zonas claras son denominadas electron-lcidas. Ntese el variado electro densidad, la cual depende del grado de afinidad de las estructuras por los metales empleados para el contraste. Aumento 60.000x.

Microfotografia que muestra acumulos de ribosomas (1) y polisomas (2).microscopia electronica de transmision.

Microfotografa que muestra clulas con ncleos de diferente forma, redondos (1) y ovalados (2).

Microfotografa que muestra el nuclolo y sus regiones, centro fibrilar (1), zona fibrilar densa (2),y zona granular (3),el nuclolo se encuentra rodeado de eucromatina (4). Microscopia electrnica de transmisin.

Microfotografa de la membrana plasmtica de una clula en la que se reconocen las caras P (1) y E (2).se observan adems las protenas transmembranales (3). Fractura y congelacin y microscopia electrnica de transmisin.

Microfotografa de una clula en la cual se observa el ncleo (1), nuclolo (2), retculo endoplasmatico rugoso (3), aparato de Golgi (4), mitocondrias (5),lisosomas (6),grnulos de glucgeno(7),y gotas de lpidos (8).microscopia electrnica de transmisin.