ANLISIS DE LAS PROTENAS

CONSIDERACIONES GENERALES

PROTENAS

SON COMPONENTES ABUNDANTES EN TODAS LAS CLULAS.

CASI TODAS (EXCEPTO LAS DE ALMACENAMIENTO) SON IMPORTANTES PARA LAS FUNCIONES BIOLGICAS Y/O LA ESTRUCTURA CELULAR.

LAS PROTENAS DE LOS ALIMENTOS SON MUY COMPLEJAS.

COMPOSICIN DE LAS PROTENAS

ESTN CONSTITUDAS POR: HIDRGENO, CARBONO, NITRGENO, OXGENO Y AZFRE.

LOS BLOQUES DE CONSTRUCCIN DE LAS PROTENAS SON 20 -AMINOCIDOS. LAS UNIONES ENTRE RESIDUOS DE AMINOCIDOS EN UNA PROTENA SON ENLACES PEPTDICOS.

COMPOSICIN DE LAS PROTENAS

EL NITRGENO ES EL ELEMENTO MS DISTINTIVO PRESENTE EN LAS PROTENAS.

GENERALMENTE LAS PROTENAS RICAS EN AMINOCIDOS BSICOS CONTIENEN MS NITRGENO. SIN EMBARGO, EL CONTENIDO DE NITRGENO EN VARIAS PROTENAS ALIMENTICIAS VARA DE 13.4 19.1% DEBIDO A LA VARIACIN EN LA COMPOSICIN DE AMINOCIDOS ESPECFICA DE LAS PROTENAS.

CLASIFICACIN DE LAS PROTENAS

COMPOSICIN
ESTRUCTURA FUNCIN BIOLGICA PROPIEDADES DE SOLUBILIDAD

COMPLICACIONES EN EL ANLISIS DE PROTENAS

CARACTERSTICAS FSICO QUMICAS DE LOS ALIMENTOS SIMILARES A LOS DE LAS PROTENAS

FUENTES DE NITRGENO NO PROTICO

AMINOCIDOS LIBRES PEQUEOS PPTIDOS CIDOS NUCLICOS FOSFOLPIDOS AZCARES AMINAS PORFIRINA ALGUNAS VITAMINAS

FUENTES DE NITRGENO NO PROTICO

ALCALOIDES CIDO RICO UREA IONES DE AMONIO

OTROS MACROCOMPONENTES DE LOS ALIMENTOS QUE PUEDEN INTERFERIR CON EL ANLISIS DE PROTENAS

LPIDOS CARBOHIDRATOS

MTODOS DESARROLLADOS PARA MEDIR EL CONTENIDO PROTICO

FUNDAMENTOS: DETERMINACIONES DE NITRGENO ENLACES PEPTDICOS CIDOS AROMTICOS ABSORTIVIDAD UV DE LAS PROTENAS GRUPOS AMINO LIBRES PROPIEDADES DE DISPERSIN DE LA LUZ CAPACIDAD DE ADHESIN DE COLORANTES

IMPORTANCIA DEL ANLISIS DE PROTENAS

DETERMINACIN DE ACTIVIDAD BIOLGICA. EJEMPLO: PECTINASAS DURANTE LA MADURACIN DE FRUTOS. INVESTIGACIN SOBRE PROPIEDADES FUNCIONALES. EJMPLO: GLIADINA Y GLUTENINAS PARA LA ELABORACIN DEL PAN. ETIQUETAMIENTO NUTRICIONAL

NECDESIDAD DEL ANLISIS DE PROTENAS

CONTENIDO PROTICO TOTAL COMPOSICIN DE AMINOCIDOS CONTENIDO DE ALGUNA PROTENA PARTICULAR EN UNA MEZCLA CONTENIDO PORTECO DURANTE EL AISLAMIENTO Y PURIFICACIN DE UNA PROTENA NITRGENO NO PROTICO VALOR NUTRITIVO DE UNA (DIGESTIBILIDAD, BALANCE PROTICO)

CONTENIDO PROTICO EN LOS ALIMENTOS

PRODUCTOS LCTEOS LECHE ENTERA 3.5% LECHE DESHIDRATADA DESGRASADA 35.9% QUESO CHEDDAR 25%

HUEVOS

12.9%

CONTENIDO PROTICO EN LOS ALIMENTOS

CARNES RES, BISTEAK, MAGRO CON GRASA 28.6% PUERCO, MAGRO CON GRASA, DESHUESADO 17.1% PECHUGA DE POLLO 27.3% PESCADO BACALAO COCINADO 28.5% ATN EN ACEITE ENLATADO 24.2%

CONTENIDO PROTICO EN LOS ALIMENTOS

CEREALES ARROZ, INTEGRAL, CRUDO ARROZ REFINADO, CRUDO HARINA DE TRIGO INTEGRAL HARINA DE MAZ SPAGHETTI, SECO ALMIDN DE MAZ

7.5% 6.7% 13.3% 7.8% 12.5% 0.3%

CONTENIDO PROTICO EN LOS ALIMENTOS

FRUTAS Y VEGETALES PAPA ENTERA, CRUDA 1.6% ESPRRAGOS VERDES 2.5% TAPIOCA 0.6% FRIJOLES, SECOS, TODAS LAS VARIEDADES 22.3% SOYA SECA 34.1%

CONTENIDO PROTICO EN LOS ALIMENTOS

FRUTAS Y SEMILLAS MANZANA ENTERA, CRUDA

0.2%
18.6%

ALMENDRAS ENTERAS

MTODOS DE DETERMINACIN DE PROTENAS

MTODO MTODO MTODO MTODO MTODO MTODO MTODO MTODO MTODO

DE KJELDAHL DE BIURET DE LOWRY DEL CIDO BICINCONNICO (BCA) DE ABSORCIN UV A 280nm DE ADHESIN DE COLORANTE DE BRADFORD DE LA NINHIDRINA TURBIDIMTRICO

MTODO DE KJELDAHL (JOHANN KJELDAHL, 1883)

DIGESTIN CON H2SO4 CON LA ADICIN DE PERMANGANATO DE POTASIO PARA COMPLETAR LA OXIDACIN Y CONVERSIN DEL NITRGENO A SULFATO DE AMONIO. NEUTRANLIZACIN DE LA DIGESTA DILUIDA, SEGUIDA DE UNA DESTILACIN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE CIDO ESTNDAR CON UN CONTENIDO DE IODURO DE POTASIO E YODATO.
TITULACIN DEL YODO LIBERADO CON TIOSULFATO DE SODIO ESTNDAR

MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MTODO DE KJELDAHL

SE HAN AADIDO CATALIZADORES COMO: Hg, Cu, Se, Ti AL H2SO4 PARA LOGRAR UNA DIGESTIN COMPLETA. EL DIXIDO DE SELENIO Y EL SULFATO DE COBRE EN PROPORCIN 3:1 SON MUY EFECTIVOS EN LA DIGESTIN.

MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MTODO DE KJELDAHL

EL SULFATO DE POTASIO SE UTILIZA PARA AUMENTAR EL PUNTO DE EBULLICIN DEL CIDO SULFRICO PARA ACELERAR LA DIGESTIN. EL SULFURO O TIOSULFATO DE SODIO SE AADEN A LA DIGESTA DILUIDA PARA AYUDAR A LIBERAR EL NITRGENO DEL Hg EL CUAL TIENDE A ADHERIR AMONIO.

MODIFICACIONES PARA EL MEJORAMIENTO DEL MTODO DE KJELDAHL

EL AMONIACO SE DESTILA DIRECTAMENTE EN UNA SOLUCIN DE CIDO BRICO Y ES SEGUIDO DE UNA TITULACIN CON UN CIDO ESTNDAR. SE UTILIZAN LA COLORIMETRA Y LA CROMATOGRAFA INICA PARA DETERMINAR EL CONTENIDO DE NITRGENO POSTERIOR A LA DIGESTIN.

PROCEDIMIENTO GENERAL Y REACCIONES

DIGESTIN
EL SULFATO DE AMONIO NO VOLTIL SE FORMA DE LA REACCIN DEL NITRGENO Y EL CIDO SULFRICO. DURANTE LA DIGESTIN SE LIBERA EL NITRGENO PROTICO PARA FORMAR IONES DE AMONIO.

EL CIDO SULFRICO OXIDA LA MATERIA ORGNICA Y SE COMBINA CON EL AMONIO FORMADO.

DIGESTIN

LOS ELEMENTOS CARBONO E HIDRGENO SE CONVIERTEN EN DIXIDO DE CARBONO Y AGUA

PROTENA cido Sulfrico Calor, catalizador (NH4)2 SO4

NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN

LA MUESTRA DIGERIDA SE DILUYE CON AGUA.

SE AADE EL LCALI QUE CONTIENE TIOSULFATO DE SODIO PARA NEUTRALIZAR AL CIDO SULFRICO. EL AMONACO FORMADO SE DESTILA EN UNA SOLUCIN DE CIDO BRICO QUE CONTIENE LOS INDICADORES AZL DE METILENO Y ROJO DE METILO.

REACCIONES DE LA NEUTRALIZACIN Y LA DESTILACIN

(NH)2SO4+ 2NaOH 2NH3+Na2SO4+2H2O

NH3+ H3BO3 (cido brico)

NH4 + H2BO3(in borato)

REACCIONES DE LA TITULACIN

EL ANIN BORATO (PROPORCIONAL A LA CANTIDAD DE NITRGENO) SE TITULA CON HCl ESTANDARIZADO:

H2BO3- + H+ H3BO3

CLCULOS

MOLES DE HCl = MOLES DE NH3 = MOLES DE NITRGENO EN LA MUESTRA

FUNCIN DEL BLANCO EN LA DETERMINACIN DE PROTENAS

SE DEBE UTILIZAR UN BLANCO CON REACTIVOS PARA SUSTRAER EL NITRGENO REACTIVO DEL NITRGENO DE LA MUESTRA.

N HCl = NORMALIDAD DEL HCl EN MOLES /1000 mL VOL. CIDO CORREGIDO = mL DE CIDO ESTNDAR PARA LA MUESTRA) (mL DE CIDO ESTNDAR PARA EL BLANCO) 14

= PESO ATMICO DEL NITRGENO

%N = N HCl X VOLUMEN DE CIDCORR. g. DE MUESTRA X 14g N2 X 100 MOL

FACTOR

SE UTILIZA UN FACTOR DE CONVERSIN DE % DE N2 A % DE PROTENA CRUDA. LA MAYORA DE LAS PROTENAS CONTIENEN 16% DE N2 EL FACTOR DE CONVERSIN ES: 6.25 (100/16 = 6.25)
%N2 X 6.25 = %PROTENA

%N2 = %PROTENA 0.16

FACTORES DE CONVERSIN PARA ALGUNOS ALIMENTOS

ALIMENTO HUEVO O CARNE, MAZ LECHE TRIGO SOYA AVENA %N2PROTENA 16
15.7 18 17.51 17.15

FACTOR 6.25
6.38 5.7 5.71 5.83

PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIN Y TITULACIN

NESSLERIZACIN NH4OH + 2HGI2+ 2KI + 3KOH NH4Hg2I + 7KI + 4H2O ( rojo-naranja, 440nm)

RPIDO Y FCIL PERO EL IODURO DIMERCRICO DE AMONIO ES COLOIDE Y EL COLOR ES INESTABLE

PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS DE DESTILACIN Y TITULACIN

MEDICIN DEL pH POSTERIOR A LA DESTILACIN EN UN VOLUMEN CONOCIDO DE CIDO BRICO

MEDICIN DIRECTA DEL AMONACO, MEDIANTE EL MTODO DE CROMATOGRAFA INICA

VENTAJAS DEL MTODO DE KJELDAHL

APLICABLE A TODO TIPO DE ALIMENTOS RELATIVAMENTE SIMPLE BARATO PRECISO ES EL MTODO OFICIAL PARA MEDIR EL CONTENIDO DE PROTENA CRUDA

DESVENTAJAS DEL MTODO DE KJELDAHL

MIDE EL NITRGENO ORGNICO TOTAL, NO SLO EL NITRGENO PROTICO CONSUME MUCHO TIEMPO (AL MENOS 2 HORAS PARA COMPLETARSE) PRECISIN MS POBRE QUE EL MTODO DE BIURET USA REACTIVOS CORROSIVOS

DETERMINACIN DE PROTENAS POR EL MTODO DE BIURET

FUNDAMENTO
AL FORMAR COMPLEJOS LOS IONES CPRICOS CON LOS ENLACES PEPTDICOS DE LAS PROTENAS SE PRODUCE UN COLOR VIOLETA-MORADO BAJO CONDICIONES ALCALINAS. LA ABSORBANCIA DEL COLOR PRODUCIDO ES LEDO A 540nm.

LA INTENSIDAD DEL COLOR (ABSORBANCIA) ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA.

PROCEDIMIENTO PARA EL MTODO DE BIURET

5 mL DE REACTIVO DE BIURET SE MEZCLA CON 1mL DE SOLUCIN PROTICA (1-10 mg DE PROTENA/mL). EL REACTIVO INCLUYE SULFATO DE COBRE, NaOH, Y TARTRATO DE SODIO Y POTASIO EL CUAL SE UTILIZA PARA ESTABILIZAR EL IN COBRE EN LA SOLUCIN ALCALINA

PROCEDIMIENTO PARA EL MTODO DE BIURET

DESPUS DE REPOSO A TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE 15 A 30 MINUTOS, SE LEE LA ABSORBANCIA A 540nm CONTRA UN BLANCO CON SLO REACTIVO.
SI LA REACCIN NO ES CLARA DEBE CENTRIFUGARSE LA MUESTRA PREVIO A LA LECTURA DE LA ABSORBANCIA

PROCEDIMIENTO PARA EL MTODO DE BIURET

SE DEBE ELABORAR UNA CURVA ESTNDAR DE CONCENTRACIN VS ABSORBANCIA UTILIZANDO ALBMINA DE SUERO DE BOVINO (BSA) PARA COMPARACIN CON LA MUESTRA BAJO ESTUDIO

VENTAJAS DEL MTODO DE BIURET

MENOS CARO QUE EL MTODO DE KJELDAHL RPIDO (SE PUEDE COMPLETAR EN MENOS DE 30 MINUTOS) ES EL MTODO MS SIMPLE DE ANLISIS DE PROTENAS NO ES FRECUENTE ENCONTRAR DERIVACIONES DE COLOR POCAS SUBSTANCIAS NO PROTICAS INTERFIEREN CON LA REACCIN DE BIURET NO DETECTA N2 DE FUENTES NO PROTICAS O NO PEPTDICAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE BIURET

NO ES MUY SENSIBLE COMPARADO CON EL MTODO DE LOWRY REQUIERE DE AL MENOS 2 A 4 mg DE PROTENA POR PRUEBA LAS CONCENTRACIONES ALTAS DE SALES DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIN PUEDE OCURRIR OPALESCENCIA EN LA SOLUCIN FINAL SI ESTN PRESENTES ALTAS CONCENTRACIONES DE LPIDOS O CARBOHIDRATOS DEBE ESTANDARIZARSE EL COLOR MEDIANTE CANTIDADES DE PROTENA CONOCIDAS

MTODO DE LOWRY

FUNDAMENTO COMBINA LA REACCIN DE BIURET CON LA REDUCCIN DEL REACTIVO DE FENOL FOLINCIOCALTEAU (CIDO FOSFOMOLBDICOFOSFOTNGSTICO) POR LOS RESIDUOS DE TIROSINA Y TRIPTOFANO DE LAS PROTENAS. EL COLOR AZULOSO DESARROLLADO ES LEDO A 750nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIN PROTICA BAJA) O A 500nm (ALTA SENSIBILIDAD PARA UNA CONCENTRACIN PROTICA ALTA)

VENTAJAS DEL MTODO DE LOWRY

MUY SENSIBLE MENOS AFECTADO POR LA TURBIDEZ DE LA MUESTRA MS ESPECFICO QUE LA MAYORA DE LOS OTROS MTODOS RELATIVAMENTE SIMPLE SE PUEDE COMPLETAR EN 1 A 1.5 HORAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE LOWRY

EL COLOR VARA CON DIFERENTES PROTENAS (MS QUE EL MTODO DE BIURET)

EL COLOR NO ES ESTRICTAMENTE PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIN DE PROTENAS LA SACAROSA, LPIDOS, BUFFERS FOSFATO, MONOSACRIDOS Y HEXOAMINAS INTERFIEREN CON LA REACCIN LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE AZCARES REDUCTORES, SULFATO DE AMONIO Y COMPUESTOS CON SULFHIDRILO INTERFIEREN CON LA REACCIN

MTODO DEL CIDO BICINCONNICO (BCA)

FUNDAMENTO SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LAS PROTENAS REDUCEN LOS IONES CPRICOS A IONES CUPROSOS BAJO CONDICIONES ALCALINAS. LOS IONES CUPROSOS REACCIONAN CON EL BCA (VERDOSO) PARA FORMAR UN COLOR MORADO. EL COLOR FORMADO ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA

VENTAJAS DEL MTODO DEL CIDO BICINCONNICO (BCA)

SENSIBILIDAD COMPARABLE A LA DEL MTODO DE LOWRY (0.5mg a 10mg) LA MEZCLA EN UN PASO ES MS FCIL QUE EN EL MTODO DE LOWRY EL REACTIVO ES MS ESTABLE QUE EL REACTIVO DE LOWRY LAS SALES DE BUFFER Y DETERGENTE NO INICO NO INTERFIEREN CON LA REACCIN LAS CONCENTRACIONES DEL MEDIO DE REACTIVOS DESNATURALIZANTES NO INTERFIEREN (GUANIDINA 4M-HCl O UREA 3M)

DESVENTAJAS DEL MTODO DEL CIDO BICINCONNICO (BCA)

EL COLOR NO ES ESTABLE CON EL TIEMPO. SE NECESITA CONTROLAR CUIDADOSAMENTE EL TIEMPO ENTRE EL ANLISIS Y LA LECTURA EN ABSORBANCIA. LOS AZCARES REDUCTORES INTERFIEREN CON LA REACCIN. ALTAS CONCENTRACIONES DE SULFATO DE AMONIO INTERFIEREN CON LA REACCIN. LA RESPUESTA EN LA ABSORBANCIA NO ES LINEAL

MTODO DE ABSORCIN EN ULTRAVIOLETA A 280nm

FUNDAMENTO

LAS PROTENAS MUESTRAN UN FUERTE GRADO DE ABSORCIN A 280nm EN UV, PRINCIPALMENTE DEBIDO PRINCIPALMENTE A LOS RESIDUOS DE TRIPTOFANO Y LA TIROSINA DE LAS PROTENAS. YA QUE LAS CONCENTRACIONES DE ESTOS AMINOCIDOS EN LAS PROTENAS ES FRANCAMENTE CONSTANTE SE PUEDE UTILIZAR LA ABSORBANCIA A 280nm PARA ESTIMAR LA CONCENTRACIN DE PROTENAS USANDO LA LEY DE BEER

MTODO DE ABSORCIN EN ULTRAVIOLETA A 280nm

FUNDAMENTO

DADO QUE CADA PROTENA TIENE UNA COMPOASICIN NICA DE AMINOCIDOS AROMTICOS, EL COEFICIENTE DE EXTINCIN (E280) O SU ABSORTIVIDAD MOLAR (Em) DEBEN SER DETERMINADOS PARA PROTENAS INDIVIDUALES PARA LA ESTIMACIN DEL CONTENIDO PROTICO

VENTAJAS DEL MTODO DE ABSORCIN EN UV (280nm)

MTODO RPIDO Y RELATIVAMENTE SENSIBLE (VARIAS VECES MS SENSIBLE QUE EL MTODO DE BIURET) NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO Y OTRAS SALES BUFFER MTODO NO DESTRUCTIVO UTILIZADO EN DETECCIN POST-COLUMNA DE LAS PROTENAS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE ABSORCIN EN EL UV (280nm)

LOS CIDOS NUCLICOS TAMBIN ABSORBEN EN LA REGIN DE 280nm EL CONTENIDO DE AMINOCIDOS AROMTICOS DIFIERE CONSIDERABLEMENTE EN VARIAS PROTENAS. LA SOLUCIN DEBE SER CLARA E INCOLORA. LA TURBIDEZ PUEDE PRODUCIR RESULTADOS ERRTICOS SE REQUIERE UN SISTEMA RELATIVAMENTE PURO PARA UTILIZAR ESTE MTODO

MTODOS DE DETERMINACIN DE PROTENAS POR ADHESIN DE UN COLORANTE

ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

MTODO DE BRADFORD

ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

FUNDAMENTO LA MUESTRA PROTICA SE MEZCLA CON UNA CANTIDAD EXCESIVA CONOCIDA DE UN COLORANTE ANINICO EN UNA SOLUCIN BUFFER.
LAS PROTENAS SE UNEN AL COLORANTE PARA FORMAR UN COMPLEJO INSOLUBLE.

ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

FUNDAMENTO SE MIDE EL COLORANTE NO ADHERIDO, SOLUBLE POSTERIOR A LA EQUILIBRACIN DE LA REACCIN Y LA REMOCIN DEL COMPLEJO INSOLUBLE POR CENTRIFUGACIN Y FILTRACIN. EL COLORANTE NO ADHERIDO EST INVERSAMENTE RELACIONADO AL CONTENIDO PROTICO DE LA MUESTRA

ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

FUNDAMENTO

PROTENA + EXCESO DE COLORANTE COMPLEJO PROTENA-COLORANTE INSOLUBLE + COLORANTE NO ADHERIDO SOLUBLE

COLORANTES UTILIZADOS EN ESTE MTODO

CIDO SULFNICO ANINICO NARANJA CIDO 12 NARANJA G NEGRO AMIDO 10B

UNEN GRUPOS CATINICOS DE LOS RESIDUOS BSICOS DE AMINOCIDOS (IMIDASOL DE LA HISTIDINA, GUANIDINA DE LA ARGININA Y EL GRUPO -AMINO DE LA LISINA) Y EL GRUPO LIBRE TERMINAL AMINO DE LAS PROTENAS.

VENTAJAS DEL MTODO DE ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

MTODO RPIDO (15 MINUTOS O MENOS) BARATO RELATIVAMENTE EXACTO PARA EL ANLISIS DE PROTENAS EN ALIMENTOS PUEDE UTILIZARSE PARA ESTIMAR LOS CAMBIOS EN EL CONTENIDO DE LISINA DISPONIBLE DE LOS CEREALES DURANTE SU PROCESAMIENTO.

VENTAJAS DEL MTODO DE ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

NO UTILIZA REACTIVOS CORROSIVOS NO MIDE NITRGENO NO PROTICO MS PRECISO QUE EL MTODO KJELDAHL

DESVENTAJAS DEL MTODO DE LA ADHESIN DEL COLORANTE ANINICO

LAS PROTENAS DIFIEREN EN SU CONTENIDO DE AMINOCIDOS BSICOS DIFIEREN EN SU CAPACIDAD DE ADHESIN DEL COLORANTE SE NECESITA ELABORAR CURVA DE CALIBRACIN MUCHOS COMPONENTES NO PROTICOS TAMBIN SE PUEDEN ADHERIR AL COLORANTE (ALMIDN), METALES (Ca O P) Y CAUSAR ERRORES EN LOS RESULTADOS

MTODO DE BRADFORD

FUNDAMENTO
EL AZL BRILLANTE G-250 COOMASSIE SE ADHIERE A LA PROTENA, EL COLORANTE SE TORNA DE ROJIZO A AZULADO YE L MXIMO DE ABSORCIN DEL COLORANTE CAMBIA DE 465 A 595nm. EL CAMBIO EN LA ABSORBANCIA A 595nm ES PROPORCIONAL A LA CONCENTRACIN DE PROTENA EN LA MUESTRA.

VENTAJAS DEL MTODO DE BRADFORD

MTODO RPIDO (LA REACCIN SE PUEDE COMPLETAR EN 2 MINUTOS)

REPRODUCIBLE SENSIBLE (MUCHO MS QUE EL MTODO DE LOWRY) NO EXISTE INTERFERENCIA DE CATIONES COMO K+, Na+, Y Mg+

VENTAJAS DEL MTODO DE BRADFORD

NO EXISTE INTERFERENCIA DEL SULFATO DE AMONIO

NO EXISTE INTERFERENCIA DE LOS POLIFENOLES NI CARBOHIDRATOS COMO LA SACAROSA MIDE PROTENA O PPTIDOS CON UNA MASA MOLECULAR APROXIMADAMENTE IGUAL O MAYOR DE 4 000 DALTONS

DESVENTAJAS DEL MTODO DE BRADFORD

EL COMPLEJO PROTENA-COLORANTE FORMADO PUEDE UNIRSE A LAS CELDAS DE CUARZO

EL COLOR VARA CON DIFERENTES TIPOS DE PROTENAS. LA PROTENA ESTNDAR DEBE SELECCIONARSE CON MUCHO CUIDADO INTERFERENCIA CON DETERGENTES.

MTODO DE LA NINHIDRINA

FUNDAMENTO
AL SER HERVIDOS EN UN BUFFER A UN pH DE 5.5 EN PRESENCIA DE NINHIDRINA E HIDRINDANTINA, LOS AMINOCIDOS, AMONACO, Y LOS GRUPOS AMINO PRIMARIOS, ORIGINAN UN COLOR MORADO RUHEMANN

VENTAJA DEL MTODO DE LA NINHIDRINA

MTODO RELATIVAMENTE RPIDO SI SE COMPARA CON EL MTODO DE KJELDAHL

DESVENTAJAS DEL MTODO DE LA NINHIDRINA

LA PRESENCIA DE PEQUEAS CANTIDADES DE AMINOCIDOS, PPTIDOS, AMINAS PRIMARIAS, Y AMONACO OCASIONA UNA SOBREESTIMACIN DEL CONTENIDO PROTICO BAJA PRECISIN
EL COLOR VARA CON LA DIFERENTE COMPOSICIN DE AMINOCIDOS SE NECESITA ELABORAR UNA CURVA ESTNDAR EN CADA ANLISIS