ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO

UNIDAD DE NIVELACION

CICLO DE NIVELACIN: SEPTIEMBRE 2012 / FEBRERO 2013 MDULO INTRODUCCION A LA COMUNICACIN CIENTIFICA: TEMA: EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIAVILIDAD DE LAS LARVAS DE TRICHINELLA ESPIRALIS

1.- DATOS INFORMATIVOS - NOMBRES Y APELLIDOS: - DIRECCIN DOMICILIARIA: - TELFONO: - MAIL: - FECHA: Johnny Daniel Ojeda Bustos Cdla. Los Olivos CELULAR: 0986882765 zixt_77@hotmail.com Noviembre 08 de 2012

Riobamba - Ecuador

Introduccin En el presente trabajo se tratara el tema de El efecto de la temperatura sobre la viabilidad de larvas de Trichinella spiralis, dicho parsito es producido por larvas de nematodos del gnero Trichinella. La infeccin se produce por el consumo de carne de cerdo y de especies silvestres cruda o mal cocida que contiene larvas que son vas de infeccin del parasito. En el mundo la zona geogrfica ms afectada constantemente es en Argentina debido a su aumento de infecciones en dicho lugar. Diversos datos muestran que esta enfermedad se ha expandido a zonas en donde antes se la consideraba ausente, con un aumento importante del nmero total de casos en el periodo 2009 2011 en provincias donde la enfermedad es endmica. Productos crnicos que no son analizados por un mtodo aceptable de diagnstico para Trichinella spiralis requieren, antes de ser distribuidos para el consumo humano, de un tratamiento para eliminar de una forma eficaz aquellas larvas que pudieran estar presentes en el producto. Los diferentes mtodos o procedimientos propuestos por la Comisin Internacional de Trichinillosis que se pueden tomar para destruir al parsito se encuentran la coccin, el congelamiento y la irradiacin. El objetivo de dicho trabajo fue el determinar las temperaturas y los tiempos de tratamientos necesarios para lograr la perdida de la viabilidad de larvas libres y enquistadas de Trichinella espiralis. Justificacin Hago este proyecto con la finalidad de aprender ms acerca de este parasito que todos hemos escuchado pero que muy pocos conocen a fondo el tema en s, para de esta forma dar a conocer las diferentes causas, efectos y las diversas formas de prevencin para evitar infectarse con Trichinella espiralis, ya que es un parasito que se lo contrae mediante el consumo de alimentos como carnes de cerdo y de especies silvestres que no estn bien cocidas o se las ingiere crudas. Se trataron larvas libres y enquistadas a diferentes temperaturas (-30C, -20C, 4C, 20C, calentamiento gradual entre 0-100C). Se determin el tiempo necesario para matar el 100% de las larvas. Durante los primeros das, la mortalidad larvaria en todos los tratamientos con frio aumento significativamente en funcin del tiempo. El calentamiento disminuyo la viabilidad, sin observarse diferencias en los estados larvarios. Fue necesaria una coccin durante 15 minutos a una temperatura de 90C para matar al 100% de las larvas libres y el mismo tiempo pero a una temperatura de100C para lograr una mortalidad igual en las larvas enquistadas. Los resultados indican que la temperatura y los tiempos tradicionalmente utilizados para tratar los productos crnicos que tienen potencial transmisin de Trichinella spiralis no seria los ms efectivos para lograr la eliminacin de la totalidad de las larvas vivas de este parsito. Se deseara establecer un mtodo eficaz que se pudiera utilizar para eliminar estas larvas que son las va de infeccin de Trichinella espiralis, para evitar enfermedades e incluso la muerte, pero an no se ha establecido uno. Sin embargo existen diversas alternativas que se pueden tomar, las que ya se ha mencionado anteriormente y las cuales deberan de seguirse como ya se encuentran establecidas ya que son mtodos que se sacaron de una investigacin.

DESARROLLO DEL ANALISIS MATERIALES Y MTODOS

Condiciones experimentales Se utiliz la cepa BBSC 01 de T. spiralis tipificada por PCR en el Centro Internacional de Referencia en Roma, Italia, y en la Ctedra de Parasitologa Clnica de la Universidad Nacional del Sur (UNS). Como modelo animal se utilizaron ratones BALBc infectados con el parsito, obtenidos del Bioterio del Departamento de Biologa, Bioqumica y Farmacia (UNS) y controlados sanitariamente. Cada ratn fue infectado con 2500 larvas vivas de T. spiralis cuantificadas utilizando un microscopio ptico. En un ensayo previo, los autores determinaron que dicha carga parasitaria produce infecciones con intensidades de 250 50 larvas enquistadas por gramo de tejido muscular, sin provocar la muerte del hospedero. Los ratones fueron sacrificados a los 45 das pos infeccin. Los animales fueron ambientados y tratados de acuerdo con estndares humanitarios. Las larvas libres (L) y enquistadas (E) fueron obtenidas a partir del sacrificio y evisceracin de 10 ratones para conformar cada grupo. Las larvas libres fueron recuperadas a partir de la digestin enzimtica artificial de los ratones muertos. Se prepararon 600 tubos con 500 larvas en 1 ml de H2O destilada por tubo. Cada tubo fue asignado aleatoriamente a uno de los cinco grupos que representaron a las larvas libres (L1, L2, L3, L4 y L5). Las larvas enquistadas fueron obtenidas a partir de 600 muestras de msculo (2 g; 2,5 0,2 cm de espesor) con 500 50 larvas enquistadas cada una, las cuales fueron cuantificadas utilizando un microscopio ptico. Cada muestra fue asignada aleatoriamente a uno de los cinco grupos que representaron a las larvas enquistadas (E1, E2, E3, E4 y E5). Al momento de su estudio, las muestras con larvas enquistadas fueron sometidas a digestin enzimtica artificial para el posterior recuento de larvas vivas.

Todos los recuentos fueron realizados utilizando un microscopio ptico. Las larvas fueron clasificadas como muertas cuando se observaron al mismo tiempo las siguientes condiciones: 1) Ausencia de movimientos. 2) Retraccin de las estructuras internas. 3) Ruptura de la capa quitinosa del parsito. La ausencia de estas tres caractersticas permiti clasificar a las larvas como vivas. Finalmente, la viabilidad fue confirmada mediante la tcnica de azul de metileno. Los recuentos de larvas fueron realizados hasta el da en que se logr el 100 % de mortalidad, momento definido como T100. Los recuentos fueron realizados por triplicado y los resultados fueron promediados. Anlisis estadstico Inicialmente se ajustaron modelos aditivos generalizados (MAG) no paramtricos para explorar la forma de la relacin entre cada variable independiente y la respuesta. Luego se construyeron modelos de regresin lineal polinmica (MLP) para evaluar la bondad de ajuste del mejor modelo e interpretar los resultados. En principio, se analiz la asociacin entre la variable independiente das (ordinal) y la variable dependiente mortalidad (conteo), de forma separada para cada tratamiento trmico. La variable estado larvario (libre/enquistada) fue incorporada en cada modelo como variable indicadora (dummy). Cada modelo incluy trminos paramtricos (lineales, cuadrticos y cbicos, cuando fue necesario) y funciones de enlace adecuados para reproducir las relaciones identificadas en los MAG y producir el mejor ajuste. Se parti de un modelo saturado, el cual incluy todas las variables independientes y las posibles interacciones entre ellas. Cada modelo fue seleccionado y reducido a su estructura ms simple utilizando el criterio de informacin de Akaike (AIC) como medida de contraste entre modelos alternativos. Las variables fueron excluidas del modelo, a menos que redujeran el AIC en ms de 2 unidades. La bondad de ajuste de cada modelo final fue determinada por el valor de R2 ajustado, el cual indica la proporcin en la variabilidad de la variable dependiente explicada por el modelo. La falta de mejora de ajuste por parte de la interaccin das grupo indic que la relacin entre das y mortalidad no dependi del estadio larvario. En todos los tratamientos, la mortalidad larvaria tuvo una relacin no lineal con los das transcurridos. Por lo tanto, los modelos requirieron de trminos polinmicos de segundo o tercer orden para describir adecuadamente las funciones de mortalidad. Para la construccin de los MAG, se utiliz la funcin gam del paquete mgcv del programa R. Los MLG y MLP fueron construidos con las funciones glm y lm de los paquetes mgcv (28) y stats de R, respectivamente. La cantidad de larvas por gramo de alimento necesarias para producir trichinellosis humana vara entre 1 y 150. En nuestro estudio, cada tubo tratado contena 500 larvas libres/ml o 500 larvas enquistadas/2 g de tejido (250 larvas/g). Ambas concentraciones se encuentran por encima del rango antes mencionado. A partir de cada modelo, se realizaron predicciones de la curva de mortalidad larval para nuevos valores de las variables das y temperatura, utilizando la funcin predict de R. As, se estim para cada tratamiento la cantidad de das necesarios para matar un mnimo de 430 larvas dejando de este modo no ms de 70 larvas vivas, lo cual fue definido como T70 y representara una cifra conservadora con potencial de producir enfermedad. Debido a la presencia de un punto de cambio abrupto en la pendiente de la curva de mortalidad de larvas enquistadas tratadas a -30 C, adems de ajustar el modelo de regresin global correspondiente, se utiliz un modelo de regresin segmentada para estudiar la mortalidad larvaria en cada uno de los segmentos de la curva. La presencia de problemas de colinearidad fue evaluada mediante la matriz de correlacin y el factor de inflacin de la varianza. DISCUSIN En este estudio, la mortalidad observada para todos los tratamientos con fro mostr un marcado aumento inicial en funcin del tiempo, el cual fue independiente del estado larvario. Este hallazgo indica que el efecto negativo de la baja temperatura sobre la viabilidad es ms intenso durante los primeros das de tratamiento, y sugiere que el enquistamiento no acta como factor de proteccin de la muerte. Si los alimentos potencialmente infectados no pudieran ser analizados por los mtodos diagnsticos obligatorios, los organismos regentes en sanidad animal recomiendan la coccin de la carne de cerdo y de caballo hasta que su temperatura interna alcance los 71 C, o bien su congelacin a -15 C durante 3 semanas, en caso de cortes con un espesor mayor de 15 cm. En cortes de mayor espesor, se recomienda el congelamiento durante por lo menos 4 semanas (12). Sin embargo, ya en la dcada Efecto de la temperatura en Trichinella spiralis 261 de los 70 se sugera la posible existencia de cepas con mayor resistencia a la congelacin (29) y adaptadas a diversas regiones geogrficas (14). Ms recientemente, organismos internacionales mencionan que estos tratamientos podran ser inefectivos para carnes procedentes de animales silvestres que alberguen cepas de Trichinella spp. con mayor resistencia a bajas temperaturas. RESUMEN En conclusin, el siguiente trabajo proporciona informacin valiosa acerca de los requerimientos trmicos para obtener un producto libre de Trichinella spiralis refirindonos as a los alimentos crnicos que consumimos sobre la base de un estudio realizado con una cepa previamente aislada en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires, se quiere dar a conocer una forma en la que se puede eliminar las larvas que son vas de la Trichinella espiralis, dicha forma es utilizando los cambios de temperatura al momento de coccin o al momento de almacenar los alimentos.