Chlamydiae

Chlamydiaceae es una familia de parsitos intracelulares obligados con tropismo por las clulas epiteliales cilndricas que tapizan la membrana de la mucosa.

 Las

clamidias son bacterias inmviles, gramnegativas, parsitos intracelulares obligados. Se replican dentro del citoplasma de la clula husped, formando inclusiones intracelulares caractersticas que pueden verse con el microscopio de luz. Difieren de los virus en que tienen tanto DNA como RNA y pared celular parecida en estructura a la de las bacterias gram-negativas.

Existen tres especies: C. trachomatis, C. psittaci y C. pneumoniae.

C. trachomatis incluye a los organismos que causan tracoma, conjuntivitis de inclusin, linfogranuloma venreo (LGV) y otras infecciones transmitidas sexualmente. Las cepas de C. trachomatis son sensibles a las sulfonamidas y producen un material parecido al glucgeno dentro del cuerpo de inclusin, el cual se tie con yodo.

Especies
C. trachomatis C. psittaci C. pneumoniae

Ciclo infeccioso

Despus de unirse a sitios especficos en la superficie de la clula husped, las clamidias son endocitadas por ella, entrando el cuerpo elemental dentro del endosoma. Las clamidias evitan la fusin del endosoma con el lisosoma. Una vez que el cuerpo elemental ha entrado en la clula, se reorganiza en una partcula reticular (cuerpo inicial), que es ms grande y rica en RNA.

Cuerpo elemental
Forma esfrica y densa

Cuerpo reticular
Dimetro de 0.6 m 1 m Forma intracelular Metablicamente activa Incapaz de sobrevivir en el medio ambiente exocelular

Dimetro de 0.2 m- 0.4 m Contiene ARN ribosomal procaritico Pared celular rgida: Protenas con uniones disulfuro entre s. Carece de actividad metablica Forma infecciosa

ADN circular, compacto en un mucleoide central. Genoma: 1 1.2 millones de pb

Despus de aproximadamente 8 h, los cuerpos iniciales empiezan a dividirse por fisin binaria. Aproximadamente 18-24 h despus de la infeccin, estos cuerpos iniciales se convierten en cuerpos elementales mediante procesos de reorganizacin y condensacin. Entonces los cuerpos elementales son liberados para iniciar otro ciclo de infeccin.

Los cuerpos elementales estn adaptados especficamente para la sobrevivencia extracelular, y son las formas infecciosas; mientras que la forma intracelular metablicamente activa y replicativa, el cuerpo inicial, no sobrevive fuera de la clula husped y parece adaptada a un medio intracelular. En general, un ciclo completo toma de 36 a 72 h.

Morfologa
Dos formas morfolgicamente diferentes

Cuerpo elemental (CE) Forma infecciosa

Cuerpo reticulado (CR)

Forma

intracelular metablicamente activa y replicativa

Ciclo de crecimiento
Fijacin y penetracin de CE. Transicin del CE a CR. Desarrollo y divisin del CR. Maduracin de los CR no infecciosos a CE

infecciosos.
Liberacin del CE de la clula husped.

Cuerpos reticulares de Chlamydia trachomatis en la vescula fagosmica

IMPORTANCIA MDICA

C. trachomatis es casi exclusivamente un patgeno humano. Sus serotipos causan tracoma (serotipos A, B, Ba, C y J), conjuntivitis de inclusin y Linfogranuloma venreo (LGV) (serotipos L1, L2 y L3). Los serotipos D-K son las principales causas de uretritis no gonoccica en varones, y tambin puede causar epididimitis. Puede producir proctitis en ambos sexos.

Serotipos de Chlamydia trachomatis

Tracoma

A B Ba C J

Infecciones genitales y Conjuntivitis de inclusin

D E F G H I K

Linfogranuloma Venreo (LGV)

L1 L2 L3

Epidemiologa
En diferentes pases del mundo, incluyendo Estados Unidos e Inglaterra se acepta a Chlamydia trachomatis como la principal causa de las enfermedades de transmisin sexual, representa un papel importante en la infertilidad y es una de las causas ms frecuentes de ceguera. Las infecciones por C. trachomatis pueden dividirse en 3 categoras: 1.- Tracoma. 2.- Infecciones oculares y respiratorias perinatales. 3.- Infecciones genitales de transmisin sexual.

 Desde un punto epidemiolgico, las infecciones por C.

trachomatis se dividen en tres categoras:

Tracoma clsico o endmico

Linfogranuloma venreo

Infecciones por C. trachomatis

Enfermedades por contacto sexual Uretritis/cervicitis Infecciones perinatales, oculares y del tracto respiratorio

En mujeres, la cervicitis es el resultado ms comn de la infeccin por clamidias, y puede ocurrir salpingitis. C. trachomatis es el patgeno bacteriano ms comn transmitido sexualmente. La clamidia puede transmitirse al recin nacido durante su paso por el canal del parto, y desarrollar conjuntivitis de inclusin y neumona clamidial. Tambin puede causar enteritis y vaginitis en los recin nacidos.

Bacteria
Varn N. gonorrhoeae

Manifestaciones clnicas
Mujer Sndrome uretral agudo, Bartolinitis, cervicitis, salpingitis, conjuntivitis, perihepatitis, infeccin gonoccica diseminada, peritonitis, meningitis Sndrome uretral agudo, Bartolinitis, cervicitis, displasia cervical, salpingitis, conjuntivitis, perihepatitis, artritis, dermatitis

Uretritis, epididimitis, proctitis conjuntivitis, infeccin gonoccica diseminada, peritonitis, meningitis

C. trachomatis

Uretritis no gonoccica, uretritis posgonoccica, epididimitis, proctitis, conjuntivitis

Infecciones clnicas ocasionadas por C. trachomatis (serotipos D-K)

Uretritis/cistitis

Conjuntivitis
Infecciones subclnicas

Uretritis
Prostatitis

Cervicitis
Displasia Salpingitis

Epididimitis

Infecciones en el recin nacido

Conjuntitivitis Neumona

Gastroenteritis

Otitis media

Vaginitis

Patogenia del Linfogranuloma Venreo (LGV)

Chlamydia trachomatis (L1, L2 y L3)

5 a 22 das
Lesin primaria

5 a 120 das
Adenopata inguinal mltiple Masa dura y firme (indolora)

7 a 15 das
Adhesin a la piel y TCS (Signo del canal) Ausencia de fluctuacin (dolorosa)

Involucin Perforacin

Bubn

Cuadro clnico
Infeccin

primaria: inoculacin por lesin genital, asintomtica. Luego de incubacin de 3 a 21 das aparece lesin primaria genital que en la mujer compromete labios, vagina y cuello uterino. secundaria: 2 a 3 semanas despus, caracterizada por adenopatas inguinales en el hombre e ilacas en la mujer., En casos no tratados evoluciona a supuracin y formacin de escaras.

Infeccin

 Infeccin

terciaria: en casos no tratados, extensas adenopatas confluentes del espacio retrorrectal o retroperitoneal, convirtindose en pelvis leosa con estrechamiento del recto y vagina.

LGV se caracteriza por tres fases:

FASE SECUNDARIA FASE PRIMARIA Aparicin, en el sitio de infeccin inicial, de una lesin inicial primaria que dura poco tiempo. Linfadenitis aguda. Afecta los ganglios linfticos inguinales, que aumentan de tamao y se fusionan entre s hasta formar una zona de tumefaccin inguinal.

FASE TERCIARIA Estadio crnico. Desarrollo de hiperplasia genital, fstulas y estrecheces rectales , drenaje de senos, etc.

LINFOGRANULOMA VENEREO
Es una ETS que causa inflamacin y

drenaje de los ganglios linfticos inguinales, as como la destruccin y cicatrizacin de los tejidos circundantes

Sntomas lcera pequea rganos genitales Hinchazn y enrojecimiento de la piel sobre los ganglios linfticos inguinales GL inguinales inflamados en uno o ambos lados Drenaje de los ganglios linfticos Sangre en las heces Tenesmo

TRACOMA
Infeccin ocular causada por la C.

trachomatis (A, B, Ba o C) que puede producir cicatrizacin crnica y ceguera.

Sntomas
Conjuntivitis Secrecin ocular Prpados inflamados Pestaas invertidas Inflamacin

de los ganglios linfticos retroauriculares Opacidad de la crnea

 Estadio I Estadio II

Estadio III
Estadio IV

Conjuntivitis de inclusin
Conjuntivitis causada por Chlamydia trachomatis

(D a K) se da mayormente en lactantes que en adultos

Sntomas
Clnicamente

evidente despus de 5 a 12 das. Conjuntivitis Exudado pegajoso Puede estar acompaada de vulvovaginitis infeccin de odos y rinitis mucopurulenta.

Mecanismos de

transmisin
En lactantes pasaje por el

canal del parto

En adultos contaminacin

de piletas de natacin no cloradas

Infecciones urogenitales por Clamidias

Cervicitis mucopurulenta

Uretritis no gonoccica Epididimitis

Endometritis y salpinguitis

Prostatitis

Cervivitis por Clamidia (no gonoccica)

DIAGNSTICO DE LABORATORIO.

Diagnstico de laboratorio
Examen directo de las muestras clnicas.
Aislamiento de microorganismos. Deteccin de anticuerpos especficos contra

estas bacterias.

El cepillo urogenital.

Transferencia de la torunda uretral al medio de transporte para cultivo de clamidias y micoplasmas genitales.

 Si no est disponible un medio de transporte, o si

la muestra consiste en gran cantidad de orina, el espcimen deber llevarse al laboratorio tan rpido como sea posible; si el transporte va a tardar varias horas, la muestra deber mantenerse a 4C.

Material biolgico.

Raspados de clulas epiteliales de la uretra anterior, el cuello uterino y la vagina, biopsias de salpinge o de epiddimo. Orina. Tambin pueden tomarse muestras de la mucosa rectal, la nasofaringe y la garganta. Suero. Las muestras deben depositarse en un medio de transporte especial, y refrigerarse si van a procesarse dentro de las 48 h siguientes; en caso contrario debern congelarse a -60C.

Exudado cervical.

No use lubricantes.

Limpie el crvix de secrecin vaginal y moco.

Rote un hisopo estril, y obtenga exudado de las glndulas endocervicales.

Si no se ve exudado, inserte un hisopo estril en el canal endocervical y rtelo.

Exudado uretral.
El hisopo se introduce unos 2 cm dentro de la uretra y se rota suavemente antes de retirarlo. Dado que las clamidias son patgenos intracelulares es importante extraer clulas epiteliales de la mucosa uretral.

Se requieren muestras separadas para el cultivo de gonococos y

clamidias o ureaplasmas.

Cuando

la descarga uretral es abundante, sobre todo en los hombres, la muestra puede tomarse externamente sin introducir ningn dispositivo en la uretra.

Orina:
Colecte 20 ml de chorro medio de la miccin en un recipiente estril. Esta muestra no es til para inmunofluorescencia directa (IFD) ni para sondas de cidos nucleicos, pero s para ELISA.

Recoleccin de las muestras

Muestras:

rectales, fauces.
mucosas.

oculares, urogenitales, nasofarngeas y de las

se recolectan mediante el raspado de

Aspirados urogenitales y de ganglio

linftico Deben obtenerse clulas epiteliales cilndricas. Se utiliza hisopos de rayn, dacrn o algodn en varilla de metal o de plstico con dispositivo para la toma de muestras citolgicas.

Examen directo.

Los frotes o los tejidos infectados pueden teirse con Giemsa, Gimenez o Macchiavello para buscar cuerpos de inclusin. Los cuerpos elementales se tien de prpura rojizo con Giemsa, en contraste con la coloracin azul que toma el citoplasma de la clula husped. Tambin puede emplearse la inmunofluorescencia directa y el ELISA.

Examen directo
Tincin de Giemsa Tincin de Gimenez para

Chlamydia
Tincin de Macchiavello

para Chlamydia
Tincin con yodo

ELISA:

Existen varios productos comerciales que pueden detectar antgenos clamidiales en muestras clnicas. La mayora de estos productos detectan al LPS. Las pruebas incluyen ya sea anticuerpos policlonales o monoclonales contra el LPS, de manera que al menos en teora pueden detectar todas las clamidias. Son un poco ms sensibles y menos especficas que la inmunofluorescencia directa (IFD). Son menos sensibles que el cultivo y tienen una especificidad de 97%.

Sondas de DNA:

Existen en el mercado algunas sondas de cido nucleico. Son menos sensibles que el cultivo y su especificidad es de alrededor de 95%.

MEDIOS DE TRANSPORTE.
Sacarosa-fosfato (2SP).
Sacarosa ........................... K2HPO4 ............................. KH2PO4 ............................. Agua destilada ..................
Gentamicina ....................... Vancomicina ....................... Anfotericina B .....................

68.46 g 2.01 g 1.01 g un litro

50 g/ml 100 g/ml 25 g/ml

Ajuste el pH a 7.2-7.4, esterilice y aada:

Tambin puede usarse Estreptomicina (50 g/ml),y, en vez de Anfotericina B, puede usarse Nistatina (25 U/ml).

Sacarosa-fosfato-glutamato (SPG)
Sacarosa ................................. K2HPO4 ................................... Na2HPO4 ................................. cido glutmico ...................... Agua destilada ........................ 75.00 g 0.52 g 1.22 g 0.72 g un litro

Ajuste el pH a 7.4-7.6, esterilice y aada los antibiticos como se describi en el medio 2SP.

Transporte de las muestras para su cultivo

Medios de transporte Sacarosa 2-fosfato Sacarosa fosfato glutamato
Gentamicina Vancomicina Anfotericina B

Condiciones
Refrigerar a 4C Procesar dentro de las 48 hrs. posteriores Conservar a -70C si no se puede procesar

dentro de las 48 hrs.

AISLAMIENTO Y CULTIVO.

La tcnica ms popular involucra la inoculacin de los especmenes en clulas de McCoy tratadas con cicloheximida. Los principios bsicos involucran la centrifugacin del inculo (tratado con antibiticos para descontaminar), con la monocapa celular a aproximadamente 3,000 x g durante una hora, incubacin de la monocapa por 48-72 h, y luego tincin con yodo, con Giemsa o con anticuerpos marcados con fluorescena para detectar los cuerpos de inclusin.

Tambin puede inocularse el saco vitelino de embrin de pollo, incubarse durante 13 das y examinar improntas del saco vitelino de los que mueran despus del tercer da, mediante la tincin de Gimenez, de Macchiavello o la inmunofluorescencia directa.

MEDIO DE CRECIMIENTO.
Medio Mnimo Esencial de Eagle (MEM) (10X) en sales de Earle, sin glutamina...... Suero fetal de ternera ............................... L-glutamina, solucin 200 mM .................. Agua destilada estril, a ............................

50.0 ml 50.0 ml 5.00 ml 500.0 ml

Ajuste el pH a 7.4 con bicarbonato de sodio al 7.5%

MEDIO DE AISLAMIENTO.
Es el medio de crecimiento, adicionado con:
Vancomicina ............................ Gentamicina ............................ Anfotericina B .......................... Glucosa ................................... Cicloheximida .......................... 50.0 g/ml 10.0 g/ml 2.0 g/ml 0.594 mg/ml 1 a 2 g/ml

IDENTIFICACIN.

Se

realiza mediante la tincin de Gimnez, la tincin con yodo, o la inmunofluorescencia directa del crecimiento en cultivos celulares o en embrin de pollo.

Fotografa de un cultivo de clulas de McCoy con cuerpos de inclusin por Chlamydia trachomatis. Tincin de Giemsa, x1,000).

Tincin inmunofluorescente contra Chlamydia trachomatis en clulas de McCoy infectadas.

Aplicacin de diferentes pruebas diagnsticas para infecciones por Chlamydia

a) Citologa Tincin con Giemsa o con anticuerpos fluorescentes b) Serologa 1.- Fijacin de complemento 2.- Microinmunofluorescencia c) Aislamiento 1.- Saco vitelino 2.- Ratn 3.- Cultivos de tejidos Tracoma, conjuntivitis de inclusin en el recin nacido y en el adulto. A menudo en uretritis y cervicitis

d) Otras pruebas inmunolgicas (directamente en la muestra) 1.- ELISA 2.- Anticuerpos monoclonales fluorescentes e) Sondas de DNA

1.- Principalmente en psitacosis y en LGV. 2.- Puede ser usada en LGV, tracoma, conjuntivitis de inclusin en el adulto y en el recin nacido, en uretritis y en cervicitis 1.- Psitacosis, LGV y en conjuntivitis de inclusin del recin nacido 2.- Principalmente en casos de psitacosis, y tambin en LGV 3.- En psitacosis, LGV, uretritis, cervicitis, tracoma, conjuntivitis de inclusin en el recin nacido y en el adulto 1.- Uretritis y cervicitis 2.- Conjuntivitis de inclusin, uretritis, cervicitis y proctitis

En estudio

Diagnstico serolgico
Es posible detectar anticuerpos en el suero, las

lgrimas y las secreciones genitales. Se logra por medio de: Prueba de fijacin de complemento (FC) Usa un Ag especfico de gnero Tcnica de microinmunofluorescencia (micro-IF)

Inmunoensayo enzimtico (ELISA)

Mide anticuerpos de inmunotipo contra cada una de las 15 serovariedades.

Tratamiento
Incluye sulfadiazina o tetraciclina La penicilina ha demostrado ser efectiva

cuando otros frmacos han fracasado.

Los

que tienen mayor actividad en los cultivos celulares son tetraciclinas, eritromicina, sulfonamidas, trimetroprimsulfametoxazol.