LA CROMATOGRAFÍA DE GASES Y SUS

APLICACIONES
22 DE OCTUBRE DE 2007

INTRODUCCIÓN A LA CROMATOGRAFÍA DE GASES

Introducción a la cromatografía.
Definición
Principios básicos
Cromatografía de Gases
Campo de aplicación
Partes de un cromatógrafo de gases
 INTRODUCCIÓN A LA CROMATOGRAFÍA
Definición
Principios básicos
Flujo de fase móvil
Definición
to
“Técnica que permite separar
los componentes de una
A B
muestra debido a su diferente t1
afinidad entre dos fases
inmiscibles entre sí, una
A B
estacionaria (liquida o sólida) y t2
otra móvil (gas o líquida)”
La muestra se introduce en la fase móvil y es transportada a
lo largo de la columna que contiene una fase estacionaria
distribuida.
Las especies de la muestra experimentan interacciones
repetidas (repartos) entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Cuando ambas fases se han escogido de forma adecuada, los
componentes de la muestra se separan gradualmente en
bandas en la fase móvil.
Los componentes abandonan la columna en orden creciente
de interacción con la fase estacionaria.
La amplia gama de selección de materiales para la fase
móvil y la estacionaria permite separar moléculas que difieren
muy poco en sus propiedades físicas y químicas.
 Clasificación de los métodos cromatográficos
Cromatografía

Cromatografía de gases Cromatografía de líquidos

Gas –Líquido Gas –Sólido Líquido –Líquido Líquido –Sólido Intercambio Exclusión
iónico
GLC GSC LLC LSC EC
IEC

Casos particulares:
Intercambio Iónico: Los componentes iónicos de la muestra se separan por el
intercambio selectivo con contraiones de la fase estacionaria
Exclusión: La fase estacionaria proporciona una clasificación de moléculas basada
en la geometría y el tamaño molecular
 Comportamiento cromatográfico de los compuestos

• El comportamiento cromatográfico de un componente de una muestra

puede describirse de diversas formas:
– VR Volumen de retención
Volúmen de fase móvil necesario para transportar la banda de un
componente desde el punto de inyección, a través de la columna, hasta
el detector (en el máximo de pico del componente)
– tR tiempo de retención
Tiempo necesario para que el componente, una vez inyectado pase a
través de la columna y alcance el detector (en el máximo de pico del
componente)
– k´ razón de reparto
Es una medida del tiempo que el componente está en la fase
estacionaria en relación con el tiempo que está en la fase móvil
 Flujo de fase móvil Señal

to to

A B
t1 t1

A B
t2
t2

A B
tB tB

A
tA tA
tiempo
 Señal

to
k´ razón de reparto
tR – tM VR - V M
k´= =
tM
VM

Donde tM es el tiempo de retención de

un compuesto que no interaccionara con
la fase estacionaria y tR es el tiempo de
tB
retención del compuesto de interés. Lo
mismo se puede expresar en relación con
Los volúmenes de retención.
tA
tiempo
 El objetivo de la cromatografía es doble:
•Separar los distintos componentes de la muestra
•Identificar los componentes previamente separados

Separar los distintos componentes de la muestra

Selectividad y eficiencia

Buena selectividad Baja selectividad Buena selectividad

Eficiencia baja Buena eficiencia Buena eficiencia
 Identificar los componentes previamente separados
• Selección de detectores adecuados que permitan el análisis
cualitativo.
– La selección de un detector está relacionada con la naturaleza de las sustancias
a determinar.
– Los componentes de una muestra se identifican por su tiempo de retención
– Se pueden emplear técnicas que aporten una mayor información sobre la
naturaleza de los componentes: Acoplamiento con Espectrometría de Masas

• Análisis Cuantitativos basados generalmente en la integración del

área bajo los picos.
– Calibración con patrones o estándares: Si se realizan determinaciones
cromatográficas de muestras de concentración conocida de alguno de sus
componentes, se puede realizar una recta de calibrado y posteriormente el
análisis e integración de una muestra de concentración desconocida del citado
componente permitirá la cuantifcación del mismo.
– Estándar interno: Permite que varíen las condiciones de operación entre
muestra y muestra.
 Cromatografía de Gases
“Es la técnica a elegir para la separación de compuestos orgánicos e
inorgánicos térmicamente estables y volátiles”

• Un cromatógrafo de gases consiste en el acoplamiento de varios

módulos básicos ensamblados para:
– Proporcionar un flujo constante de gas portador
– Permitir la introducción de vapores de la muestra en la corriente de
gas que fluye
– Contener la longitud apropiada de fase estacionaria
– Mantener la columna a la temperatura apropiada (o la secuencia del
programa de temperatura)
– Detectar los componentes de la muestra a medida que eluyen de la
columna
– Proveer una señal legible proporcional en magnitud a la cantidad de
cada coomponente
Cromatografía de Gases
Cromatografía de Gases
Cromatografía de Gases
Sistema de inyección
El modo estándar es la inyección
directa, la muestra es inyectada
con una jeringa a través de un
septum de goma a un alineador de
vidrio donde es vaporizada y
transportada por el gas al interior
de la columna.
El bloque de inyección, se
mantiene a una temperatura tal
que permita convertir
prácticamente de forma
instantánea la muestra líquida en
un tapón de vapor.
Existen jeringas especiales para
muestras gaseosas. También se
puede emplear un lazo o bucle
para incoporar las muestras
gaseosas al flujo de gas portador
Sistema de inyección
El modo de separación más
extendido en la actualidad se basa
en el empleo de columnas
capilares. Estas columnas
requieren muy pequeños
volúmenes de muestra.
Esto se logra empleando un
inyector que incorpora un divisor
de flujo (split). Normalmente se
introduce en la columna un 1%
Cuando las sustancias a separar se
encuentran a muy bajas
concentraciones se realiza
inyección sin divisor (splitless)
Sistema de inyección

Para el análisis de compuestos

orgánicos volátiles en muestras
sólidas y líquidas, se han
desarrollado algunas técnicas
auxiliares:
Espacio de cabeza (Head space)
Purga y trampa (Purge and trap)
 Espacio de cabeza (Head space)
Se analiza la fase de vapor en
equilibrio termodinámico con la
muestra en un sistema cerrado.
Para ello se procura un equilibrio
estable, mediante el control de la
temperatura del vial que contiene
la muestra.
Posteriormente, se arrastra la fase
vapor al interior del cromatógrafo.

T equilibrio
Gas portador A la columna
 Purga y trampa (Purge and trap)
Es aplicable solo a muestras líquidas.
Consiste en la continua renovación del gas en
equilibrio con la muestra, con lo que se
consigue el desplazamiento dinámico de los
compuestos volátiles de la muestra líquida a la
fase gaseosa.
Los vapores se arrastran a una trampa donde
quedan retenidos y se van concentrando.
Finalizado el proceso se calienta la trampa y
se arrastran los vapores al interior del
cromatógrafo.
1) Gas portador 2) Gas portador
trampa trampa A la columna

T baja T alta

T T
 Columnas cromatográficas

Columnas capilares Columnas Empacadas

Columnas cromatográficas empacadas

Se construyen con tubo de acero

inoxidable, niquel o vidrio.
Los diámetros interiores van de 1,6 a 9
mm.
La longitud suele ser inferior a los 3 m.
Se rellenan de un material adsorbente
adecuado a las sustancias que se quiere
separar.
 Columnas cromatográficas capilares

Se construyen con sílice fundida.

Los diámetros interiores suelen ser de 200-250 m.
La longitud suele ser superior a los 20 m.
Hay dos tipos:
Empacadas con partículas sólidas ocupando el total del diámetro
de la columna (micro-empacadas)
Tubulares abiertas, con trayectoria para el flujo abierta y sin
restricción por el centro de la columna
 Ejemplos de fases estacionarias en cromatografía de gases

Separaciones por punto de ebullición de compuestos en un

intervalo amplio de pesos moleculares:
Escualano
Polidimetilsiloxano
Para hidrocarburos insaturados y otros compuestos
polidifenildimetilsiloxano
policarboranometilcianoetilsilicón
Para compuestos nitrogenados
poliamida
policianoetilmetilsilicon
Para alcoholes, ésteres, cetonas y acetatos
polietilenglicol
pentaeritritol tetracianoetilado
 Horno

• Las columnas cromatográficas se enrollan, se sujetan en un

soporte y se introducen en el interior de un horno

• El horno debe poderse calentar y enfriar rápidamente

• La temperatura se debe poder programar para poder trabajar

en régimen de gradiente

• Muchas aplicaciones y métodos cromatográficos requieren

comenzar a temperaturas por debajo de la ambiental
 Horno

T1

T 2> T 1
 Sistemas de detección
Características ideales de un detector para Cromatografía de
Gases:
  Sensibilidad alta y estable; típicamente 10-8 g soluto/s
  Bajo nivel de ruido
  Respuesta lineal en un amplio rango dinámico
  Tiempo de respuesta corto
  Buena respuesta para toda clase de compuestos orgánicos
  Insensibilidad a las variaciones del flujo y la temperatura
  Estabilidad y robustez
  Simplicidad en su operación
  Identificación de compuestos positiva
  Técnica no destructiva
  Pequeño volumen en prevención del mezclado de componentes
 Sistemas de detección

Detector de ionización de llama (FID) Este detector añade hidrógeno al

eluyente de la columna.
La mezcla pasa a través del
conducto de un mechero, donde se
mezcla con aire externo y luego
arde.
Cuando entra en la llama material
ionizable del eluyente de la columna
Se quema y la corriente aumenta
notablemente.
Este detector es ideal para compuestos
oxidables.
No responde a los compuestos de
carbono totalmente oxidados, como
carbonilos o carboxilos y grupos éster
 Sistemas de detección

Detector de conductividad térmica (TCD) Utiliza un filamento caliente colocado

en el flujo de gas emergente.

La cantidad de calor por conducción

que pierde el filamento hacia las
paredes del detector depende de la
conductividad térmica de la fase
gaseosa.

Es útil para determinar la presencia

incluso de pequeñas cantidades de
materiales orgánicos que producen una
reducción relativamente grande en la
conductividad térmica del eluyente de
la columna.
 Sistemas de detección
Detector de captura de electrones (ECD)
El eluyente pasa entre dos electrodos.
Uno de los electrodos tiene en su
superficie un radioisótopo que emite
electrones de alta energía conforme
decae.
Los electrones bombardean el gas
portador (N2) formándose un plasma
que contiene iones positivos, radicales
y electrones térmicos.
Se aplica una diferencia de potencial
de modo que se recolectan los
electrones generados.
Los compuestos que absorben
electrones reaccionan con los
electrónes térmicos disminuyendo la
corriente del detector, la cual es
medida y permite la cuantificación
 Sistemas de detección
Los eluyentes son ionizados y
Detector de espectroscopía de masas (MS) fragmentados.
Los iones resultantes se dirigen a
través de un cuadrupolo y se ordenan
en función de su masa.
Ese detector permite obtener el
espectro de masas del compuesto que
ha eluido.
Podemos por tanto conocer, además
del tiempo de retención el espectro de
masas del compuesto y contrastarlo
con bibliotecas de espectros.
Se trata por tanto de un detector
universal para la mayoría de los
compuestos conocidos.
Cromatografía Iónica
 Polaridad
Basándose en la polaridad de la fase estacionaria y la
fase móvil, se distinguen los siguientes métodos de
cromatografía líquida:
Polaridad de la
fase estacionaria

Cromatografía en
fase normal
iónico
Cromatografía en
fase reversa
polar Cromatografía de pares iónicos
Cromatografía iónica
no polar

Polaridad de la
fase móvil
no polar polar iónico
El intercambio iónico como mecanismo de
separación
La gran mayoría de las separaciones por cromatografía iónica
ocurren por intercambio iónico sobre fases estacionarias con grupos
funcionales cargados. Los correspondientes contraiones del
eluyente se localizan en la vecindad de los grupos funcionales y se
intercambian con iones del analito de la misma carga en la fase
móvil. Para cada ion el proceso de intercambio se caracteriza por
un equilibrio de intercambio iónico correspondiente, que determina
la distribución del analito (M+ ó A-) entre la fase móvil y la fase
estacionaria:

E f.e.  A f.m.  E f.m.  A f.e.

KA 
A   E 

f.e.

f.m.

A   E 

f.m.

f.e.
A- es el ion del analito
E- es el ion del eluyente (contraion)
El intercambio iónico como mecanismo de
separación
El grupo más importante de intercambiadores iónicos son los basados
en resinas sintéticas hechas de un copolímero de estireno y
divinilbenceno.

Los intercambiadores catiónicos se obtienen por posterior sulfonación

de esta resina de estireno-divinilbenceno. Los intercambiadores
aniónicos por posterior clorometilación seguida de aminación.

Intercambiador catiónico Intercambiador aniónico

 Cromatografía iónica
También llamada cromatografía de intercambio iónico, determina iones
inorgánicos y orgánicos, normalmente por conductividad.

Se utilizan dos tipos de técnicas en la práctica:

• Supresión química, en la que la conductividad de fondo se suprime

tanto química como electrónicamente. Normalmente utilizada en
aniones.

• Supresión electrónica, en la que se emplean eluyentes con sales de

ácidos orgánicos en baja concentración sobre intercambiadores de iones
de muy baja capacidad para alcanzar una conductividad de fondo
relativamente baja, que puede ser suprimida directamente por medios
electrónicos.
 Supresión química
Se basa en el uso de sales de ácidos débilmente disociables (NaHCO 3, por ejemplo)
como eluyentes. Estos eluyentes se pueden eliminar en gran medida mediante una
reacción post-columna de acuerdo con el siguiente proceso

El ácido carbónico formado como resultado del intercambio catiónico se disocia muy
débilmente, por lo que aporta poca conductividad.
Por otro lado, los iones de la muestra sufren la reacción correspondiente. Por ejemplo,
para el cloruro

El proceso de supresión convierte el NaCl al correspondiente ácido fuerte, el cual tiene

una mayor conductividad que la sal original. Cuanto menor fuerza tenga el ácido
producido, el incremento en sensibilidad debido a la supresión química será menor.
 Supresión química

Inyección de Detección
Eluyente - bomba Separación Supresión
muestras
Sin supresión química Con supresión química
Eluyente: ácido ftálico Eluyente: HCO3-/CO3-

Aniones
Cationes sin supresión química
 Inyección de Detección
Eluyente - bomba Separación Supresión
muestras
 Detección por conductividad
La conductividad es una medida de la capacidad que tienen las disoluciones de
electrolitos para transportar la corriente por migración iónica en un campo
eléctrico aplicado entre dos electrodos.
La conductividad (κ) es directamente proporcional a la concentración para
disoluciones diluidas, siguiendo la relación

  c(eq)

Donde
10002 -1
Λ es la conductividad equivalente en Scm mol
c(eq) es la concentración equivalente en eq/l o normalidad
 Inyección de Detección
Eluyente - bomba muestras
Separación Derivatización
Detección UV/VIS
•Directa: Se usa en la determinación de iones que absorben fuertemente
en el rango UV (nitrito, nitrato y aniones orgánicos, p.e.) en presencia
de altas concentraciones de iones inorgánicos (cloruro, fosfato y sulfato,
p.e.) que tienen escasa o nula absorción UV.

•Indirecta: Se utiliza con eluyentes de alta absorción UV (ftalato, p.e.).

De este modo, los iones con menor actividad UV que el eluyente darán
picos negativos y los iones con mayor actividad UV que el eluyente
darán picos positivos.

•Con reacción post-columna: Usada en la detección de metales de

transición (Fe, Ni, Cu, Mn y Zn, p.e.)
 Inyección de
Eluyente - bomba Separación Detección
muestras
 Detección electroquímica
Se utiliza ocasionalmente. Requiere que los iones a determinar sean susceptibles
de oxidarse o reducirse. Entre ellos hay muchos compuestos orgánicos (azúcares
y aminas, p.e.), metales de transición y aniones como nitrito, nitrato, haluros,
sulfuro, cianuro, sulfito y sulfato.

Hay cuatro técnicas diferentes :

•Amperometría: Medida de la corriente a potencial constante
•Culombimetría: Medida de la corriente a potencial constante con 100% de
conversión del analito
•Voltametría: Medida de la corriente frente al potencial en un rango definido de
potencial
•Amperometría de pulsos: Medida de la corriente a pulsos de potencial constante
 Estado, cantidad y preparación de muestras
• Los líquidos que sean acuosos o miscibles en el agua se pueden
analizar directamente. Los líquidos, sólidos y gases inmiscibles en
agua deben ser extraídos o disueltos en disolución acuosa antes del
análisis.

• El volumen típico a analizar es de 5 a 200 µl, aunque se puede partir

de volúmenes tan grandes como 100 ml, utilizando técnicas de
preconcentración cromatográficas cuando se requiera una mayor
sensibilidad.

• Dilución y filtración son los procedimientos más comunes de

preparación de muestras. Se requiere extracción para muestras no
acuosas o preconcentración para muestras diluidas. La necesidad de
derivatización precolumna es rara.
 Técnicas complementarias
Absorción atómica, emisión atómica y plasma de
acoplamiento inductivo. Se usan para determinar la
cantidad total de un metal en vez de una cierta forma iónica.