Bases Científicas del Estrés

Oxidativo y la Importancia en la
Ozonoterapia

Dr.Sc. Frank Hernández Rosales

frankozono@yahoo.com
 MECANISMO GENERAL DE ACCIÓN
DE LA OZONOTERAPIA

A través de producir, de forma exógena,

un Estrés Oxidativo Transitorio y
controlado por el Sistema de
Antioxidantes endógenos.

DrSc. Frank Hernández

 The Impact of stress. An interview with George Chrousos.
BMC Medicine 2014, 12:102  doi:10.1186/1741-7015-12-102
Concepto General de Estrés
Homeostasis: básicamente es el balance o equilibrio
que los seres humanos o los organismos vivos
necesitan mantener.

Estresores: son los estímulos que molestan o

amenazan a la homeostasis. La respuesta de
adaptación es lo que el organismo hace para
antagonizar a los estresores.

“El Estrés se produce cuando un Estresor de cualquier

tipo supera un umbral que provoca un estado que
amenaza a la homeostasis“.
 ESTRÉS

Organización Mundial de la Salud

Físico
Psíquico
Inflamatorio
OXIDATIVO
DrSc. Frank Hernández
DrSc. Frank Hernández
 Eyes Brain

Heart and
Lungs and
cardiovascular system respiratory system
Liver
Circulatory system
Pancre as
Digestive system Kidneys
Reproductive system
Muscles
Skin

Joints Immune system

Bones
DrSc. Frank Hernández
 Glomerulonefritis
Hepatitis Insuf. Renal Crónica
Envejecimiento
Cirrosis Cáncer
Isquem-Reperfus.
Retinopatias
Inflamación
Cataratas
Diabetes
Degeneración Higado Riñon
macular Fallo
Ojos Multiórgano
Eritema
Aterosclerosis Dermatitis
Vasos
Vasoespasmos E. O. Piel Esclerodermia
Quemadas de sol
Corazón Psoriasis
Cardiopatías
Articulación
Cerebro Huesos
Pulmón
Alzheimer
Parkinson Asma Artritis reumatoidea
Epilepsia SDRA Osteoartritis
AVE Hyperoxia
Trauma Fibrosis quistica

DrSc. Frank Hernández

 ERO SISTEMA ANTIOXIDANTE
O2·- Trx
HO· SOD
RO· CAT
1
O2 GPX
NO· GST
H2O2 GSH
ROO· HO-1
HOCL VIT-C
O=NOO · VIT-E

• El estrés oxidativo celular es un evento muy

Importante y complejo en el cual están involucrados
gran variedad de factores químicos y biológicos.
DrSc. Frank Hernández
 • peróxido de hidrógeno
OZONOTERAPIA = EROs • ozonidos de Criegee
• hidroxihideoperóxidos
• aldehídos
INTERCONVERSIÓN DE LAS ESPECIES REACTIVAS DEL OXÍGENO
 EROs

LÍPIDOS
ADN
PROTEÍNAS
Lipoperóxidos Ácidos nucléicos
8-isoprostanos oxidados
Dienos
Conjugados Aminoácidos Nucléotidos
oxidados Oxidados
Aldehídos (8-oxo-deoxyguanosina)

Hidroperóxidos
Grupos Carbonilos
DrSc. Frank Hernández
 EL EO como activador del Nrf2/ARE
“Nuclear factor E2-related factor 2 dependent antioxidant response element activation
by tert-butylhydroquinone and sulforaphane occurring preferentially in astrocytes
conditions neurons against oxidative insult,” A. D. Kraft, D. A. Johnson, and J. A. Johnson,
Journal of Neuroscience, vol. 24, no. 5,pp. 1101–1112, 2004.

“Induction of the Nrf2-driven antioxidant response confers neuroprotection during

mitochondrial stress in vivo,” A. Y. Shih, S. Imbeault, V. Barakauskas et al., The Journal of
Biological Chemistry, vol. 280, no. 24, pp. 22925–22936, 2005.

“Transcription factor Nrf2 mediates an adaptive response to sulforaphane that protects

fibroblasts in vitro against the cytotoxic effects of electrophiles, peroxides and redox-
cycling agents,” L. G. Higgins, M. O. Kelleher, I. M. Eggleston, K. Itoh,M. Yamamoto, and J.
D. Hayes Toxicology and Applied Pharmacology, vol. 237, no. 3, pp. 267–280, 2009.

“Mild oxidative stress activates Nrf2 in astrocytes, which contributes to neuroprotective

ischemic preconditioning,” K. F. Bell, B. Al-Mubarak, J. H. Fowler et al., Proceedings of the
National Academy of Sciences of the United States of America, vol. 108, no. 1, pp. E1–E2,
2011.
DrSc. Frank Hernández
 Generación de un EO crónico y no regulado
[EO] (daño orgánico)

Generación de un EO temporal
(procesos regulatorios)

Condiciones basales

Tiempo

DrSc. Frank Hernández

El Estrés Oxidativo “controlado” funciona
como gatillo señal para el funcionamiento
de vías metabólicas, mientras que el Estrés
Oxidativo “no-controlado” provoca daño
celular que lleva a las enfermedades.

DrSc. Frank Hernández

Review Article
How increased oxidative stress promotes longevity and metabolic
health: The concept of mitochondrial hormesis (mitohormesis)
Experimental Gerontology 45 : 410–418, 2010

Review Article
Oxidants, Antioxidants, and the Beneficial Roles of
Exercise-Induced Production of Reactive Species
Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2012.

The overexpression of major antioxidant enzymes does not extend

The lifespan of mice.
Aging Cell 8:73-75, 2009

Review Article
The Neglected Significance of “Antioxidative Stress”
Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2012

DrSc. Frank Hernández

 DESEQUILIBRIO

Mecanismos Mecanismos
pro-oxidantes antioxidantes

ESTRÉS OXIDATIVO / ANTIOXIDATIVO

DrSc. Frank Hernández
Finkel T and Holbrook N.J. Oxidants, oxidative stress and the
biology of Ageing. Nature (2000) 408:239-247.

“ La mayor y mejor estrategia para aumentar los niveles de

antioxidantes endógenos es realmente el Estrés Oxidativo por si
mismo, en base al concepto clásico fisiológico de la hormesis”

DrSc. Frank Hernández

 EL PROCESO BIOLÓGICO DE HORMESIS

HORMESIS: (Goto et al, 2003)

Describe las acciones beneficiosas de respuesta del organismo
frente a estresores de baja intensidad.

El concepto básico de la HORMESIS es provocar o estimular las

capacidades intrínsecas de un organismo, en vez de suplementar
agentes exógenos, para compensar la declinación de las
actividades fisiológicas en el mantenimiento total de los
mecanismos de vida.

AGENTES ESTRESORES DE BAJA INTENSIDAD: RC, F y V, EF, Calor,

Frío, Hiper gravedad, PCI, PCO/O3.

MITOHORMESIS = HORMESIS MITOCONDRIAL (2010)

DrSc. Frank Hernández
 Hormetic shape of the ozone
response

Hormetic shape of serum creatinine (Cr) and superoside dismutase (SOD) after
15 days of ozone treatment and cisplatin-induced nephrotoxicity in rats

Hormetic shape of antioxidant enzymatic activities after 90 days of ozone

treatment in rabbits. Dose log. (0.36, 0.85 and 1.57 mg/kg) vs. enzymatic
activities.

Re L, Malcangi G, Martinez-Sanchez G. Medical ozone is now ready for a scientific challenge:

current status and future perspectives. J Exp Integr Med. 2012; 2(3): 193-196. doi:10.5455/jei
DrSc. Frank Hernández
EL PROCESO BIOLÓGICO DE HORMESIS

Respuesta

Intensidad

DrSc. Frank Hernández

MECANISMO DE ACCIÓN DE LA OZONOTERAPIA

A través de producir un estrés oxidativo transitorio

el cual activa o regula determinadas vías metabólicas
produciéndose un proceso de respuesta hormética.

DrSc. Frank Hernández

¿ESTÁ DILUCIDADO EL MECANISMO DE ACCIÓN,
A NIVEL MOLECULAR, DE LA OZONOTERAPIA?

DrSc. Frank Hernández

LA OZONOTERAPIA Y LA ACTIVACIÓN DE LA VÍA Nfr2/ARE

“Effect of ozonized saline on signaling pathway of Keap1-Nrf2-

ARE in rat hepatocytes”. Qu DD, Peng FJ, Liu L, Yang SL, Guo YB.
Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi.19(5):367-71; 2011

Nrf2 activation is involved in ozonated human serum

upregulation of HO-1 in endothelial cells. Pecorelli, A., Bocci, V.,
Acquaviva, A., Belmonte, G., Gardi, C., Virgili, F., et al..  Toxicol.
Appl. Pharmacol. 267, 30–40; 2013

“Is ozone pre-conditioning effect linked to Nrf2/EpRE

activationpathway in vivo? A preliminary result”. Lamberto Re,
Gregorio Martínez-Sánchez, Marica Bordicchia, Giuseppe
Malcangi, Antonella Pocognoli, Miguel Angel Morales-Segura,
John Rothchild e, Armando Rojas. European Journal of
Pharmacology. 742 :158–162; 2014
DrSc. Frank Hernández
 OZONO
plasma sanguíneo, mucosa rectal, fase acuosa de la superficie de la
piel, fluidos intersticiales

ERO ERO
Fase temprana Fase tardía

Endotelio
Eritrocitos Regula el NO
Plaquetas Otros órganos
Mejora transporte
Liberación de Regulación de proteínas
de oxígeno
eicosanoides y de estrés oxidativo y
factores de estimulación de enzimas
crecimiento antioxidantes (los 4-
Médula ósea hidroxialquenales por
Generación de inducción de la
Leucocitos eritrocitos expresión de la
Modulación superdotados, glutamato cisteína ligasa
inmunitaria liberación de células causa un incremento de
madres la GSH intracelular)
DrSc. Frank Hernández
 Respuestas biológicas inducidas por la activación de
Nrf2/ARE vía ligero estrés oxidativo.

1. Incremento directo de los niveles de agentes antioxidantes, tales

como GSH, CO, y bilirubina.
2. Estimulación de la regeneración del GSH vía las enzimas GR y
TXR.
3. Incremento de los niveles de enzimas que destoxifican oxidantes y
electrofilos (CAT, SOD, GPx, GSTr, NADPH-quinone-
oxidoreductase (NQO1), HO-1, HSP70, etc).
4. Incremento de los niveles de las enzimas de fase II, reconocimiento,
reparación y remoción de las proteínas dañadas
5. Inhibición de la inflamación mediada por citoquinas vía la inducción
de la leukotrieno B4 reductasa.
6. Reducción de la carga de hierro, y por tanto del estrés
oxidativo inducido por la elevación de la ferritina.
7. Protección de la apoptosis inducida vía elevado estrés oxidativo.
8. Incremento en la actividad de reparación del DNA.

DrSc. Frank Hernández

¿Cómo medir el estrés oxidativo/antioxidativo
en los organismos vivos?

DrSc. Frank Hernández

 Metodologías en E.O.
• Determinación de biomarcadores individuales (1980s)
• Determinación de varios biomarcadores (1992)
• Comparación estadística de resultados de varios
biomarcadores.
• Utilización de gráficos de integración a partir de los
resultados de varios biomarcadores
• Total Antioxidant Status (TAS)
• Derivative Reactive Oxygen Metabolites (D-ROM)
• Equipos que miden oxidación de biomoléculas y
capacidad antioxidante del plasma.
DrSc. Frank Hernández
BIOMARCADORES QUE VARIAN EN DIFERENTES
ENFERMEDADES
CÁNCER: MDA , GSH/GSSG, NO2 -Tyr, F2-Isop, HPT, GSH
GPx, SOD,CAT

PARKINSON: GSH, HNE, MDA, GSH/GSSG, GTP, GC, FRAP,

ATEROSCLEROSIS: MDA, HNE, F2-Isop, PP, SOD, HPT

DIABETES: SOD, CAT, GSH/GSSG, GPX, PAOP, NO2/NO3

ENF. CARDIOVASCULAR: GPX, SOD, CAT, GSH/GSSG, GTP

GC, NO2 -Tyr, F2-Isop

INSUFICIENCIA RENAL: GSH, GPX, CAT, SOD, MAD, GSH/GSSSG

8-HOG.
ENVEJECIMIENTO: GC, PAOP, GPX, GSH, SOD, CAT, GR.
DrSc. Frank Hernández
 FRAS 5
(Free Radical Analytical System)

Test principle
d-ROM test (derivative-Reactive Oxygen Metabolites test)
This test uses the principle of Fenton’s reaction: by mixing a biological sample with
an acidic buffer (Reagent R1), the transition metal ion (iron or copper) formed
catalyzes the hydroperoxides breakdown, generating new radical species , such as
hydroperoxyl (ROO*) and alkoxyl (RO*) radicals, wich can be quantify by
photometric reading using the analytical program of FRAS 5 .
PAT test (Plasma Antioxidant Capacity test)
In the PAT test, a small amount of plasma (10 µl) is added to a colored solution,
obtained by mixing a source of ferric ions (FeCl3 ferric chloride) with a chromogen
(chromogenic mixture containing thiocyanate). After only 1 minute of reading time
at 37C, the solution will change the color and the intensity of this chromatic
change will be directly proportional with the plasma ability to reduce the ferric ions
to ferrous ions. By photometrical measurement the intensity of discoloration can
be adequately evaluated, allowing an effective measurement of reducing ability or
OB MANAGER SOFTWARE FOR THE OXIDATIVE STRESS INDEX

Calculation of Oxidative Stress Index is done automatically by the dedicated

spectrophotometer FRAS5 or by using the proprietary software for oxidative
stress management 
DrSc. Frank Hernández
 Sistema para el Diagnóstico
Del Estrés Oxidativo

•Actividad Antioxidante Total

•Actividad Pro-oxidante Total
•Indice Redox
•Grado de Estrés Oxidativo

DrSc. Frank Hernández

 Sistema para el Diagnóstico
del Estrés Oxidativo/Antioxidativo

GRADOS SIGNIFICACIÓN
0 No Estrés O/A
1 Ligero E. O/A
2 Moderado E. O/A
3 Severo E. O/A
4 Muy Severo E. O/A

DrSc. Frank Hernández

 Manejo del Diagnóstico de Estrés Oxidativo en
la Ozonoterapia
• Grado 0: Se puede comenzar el tratamiento por:
(IR = 5,5 mg; AHTM = 2,75 mg)

• Grado 1: Se puede comenzar el tratamiento por:

(IR = 2,5 mg; AHTM = 1,12 mg)

• Grado 2: Se puede comenzar el tratamiento por:

(IR = 2,0 mg; AHTM = 1,0 mg)

• Grado 3: Se puede comenzar el tratamiento por:

(IR = 1,0 – 1,5 mg; AHTM = 0,5 – 0,75 mg)

• Grado 4: No ozonoterapia.

DrSc. Frank Hernández

Ventajas y desventajas de ambos Sistemas
 LA OZONOTERAPIA EN EL
•Universo de estudio: VIH
Pacientes seropositivos al VIH que se encontraban acogidos al sistema sanatorial de la provincia
de Guantánamo
•Criterios de inclusión:
Paciente seropositivo al VIH.
Edad mayor de 15 y hasta 50 años.
De cualquier raza y de ambos sexos.
Conteo CD4+ absoluto menor de quinientas células por milímetro cúbico.
No pérdida de 10 % del peso corporal en los últimos 3 meses.
Estado físico general y neurológico adecuado de forma tal que permitan la cooperación del
paciente para evaluar los resultados del tratamiento.
Autorización escrita del paciente a participar en el estudio

•Criterios de exclusión:
Estado físico general y neurológico no adecuado que no permitan la cooperación del paciente
Pacientes con más de una complicación (candidiasis, neumonía, diarreas, etc).
Pacientes afectados por enfermedades asociadas que conlleven tratamiento específico como:
• -Diabetes Mellitus descompensada.
• -Hepatopatías.
• Nefropatías
Embarazo y lactancia.
Consumo regular de bebidas alcohólicas.
No cumplir los criterios de inclusión DrSc. Frank Hernández
 LA OZONOTERAPIA EN EL VIH
•Esquema de tratamiento:
•Grupo A: Tratamiento ambulatorio de ozonoterapia, por insuflación rectal, 5 días a la semana
durante 6 meses, después 3 veces a la semana durante otros 6 meses y posteriormente 2 veces a
la semana durante 6 meses, hasta completar 18 meses de tratamiento. La dosis inicial según
diagnóstico inicial de estrés oxidativo. (N = 14)
•Grupo B: Tratamiento convencional: (N = 15)
• Inmunomoduladores: Interferon y Factor de transferencia
• Antirretrovirales: Indinavir y AZT
•Grupo C: Tratamiento convencional más la ozonoterapia como está especificado
en el grupo A.(N = 15)
•Criterios de evaluación
•Los indicadores de la calidad de vida de estos pacientes: índice de depresión y evaluación integral.
•Sintomatología clínica.
•La efectividad del tratamiento se evaluó mediante:
•La medición en sangre total de: % CD4, % CD3, % CD8/CD38 y % CD95 y: antígenos y
anticuerpos p24.
Criterios de fracaso terapéutico
Se consideró fracaso cuando el 30 % de los pacientes evaluados presenten:
•Con respecto a los marcadores de progresión: Descenso de los niveles absolutos de linfocitos
CD4+ a un ritmo superior a los de la evolución normal de la enfermedad, desaparición o
disminución de los anticuerpos anti-p24, aparición del antígeno p-24 y aumento de la expresión del
marcador CD95 y de la subpoblación CD8/CD38+, respecto a su valor inicial.

DrSc. Frank Hernández

 LA OZONOTERAPIA EN EL VIH

RESULTADOS:

GRUPO A GRUPO B GRUPO C

(Ozonoterapia) (Convencional) (ambos)
INDICADORES
antes después antes después antes después

Grado Estrés Ox. 3 1 4 3 4 1

% CD4 4 23 8 14 11 23
T cel CD4 414 639 153 241 280 535

DrSc. Frank Hernández

Importancia del Estrés Oxidativo en la
Ozonoterapia

– Está vinculado al Mecanismo de Acción

– El Estrés O/A es Regulado por la Ozonoterapia

– El Diagnóstico de Estrés O/A permite la

dosificación y el seguimiento de la Terapia

DrSc. Frank Hernández

 "La ciencia se compone de errores, que
a su vez, son los pasos hacia la verdad."
 Julio Verne

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GRACIAS
DrSc. Frank Hernández