Revista: Molecular

Oral Microbiology
IF: 2.90

REGULACIÓN DE IL-24 EN
QUERATINOCITOS ORALES
HUMANOS ESTIMULADOS CON
TANNERELLA FORSYTHIA
YEON-KYEONG KO1, SUN-JIN AN1, NA-YOUNG HAN2, HOOKEUN
LEE2, AND BONG-KYU CHOI1*
 INTRODUCCIÓN
• IL-24: CITOQUINA PLEIOTRÓPICA INVOLUCRADA EN
PROLIFERACIÓN Y DIFERENCIACIÓN CELULAR, EL
DESARROLLO, APOPTOSIS E INFLAMACIÓN. (PERSAUD ET AL.,
2016)
• ASOCIADA A ENFERMEDADES INFLAMATORIAS COMO
PSORIASIS, ARTRITIS REUMETODIDE, ENFEMERDAD
INFLAMTORIA INTESTINAL. (CAUDELL ET AL., 2002; GUPTA
2006; PERSAUD 2016)
• IL-19 ; IL-20 E IL-24, COMPARTEN EL MISMO COMPLEJO
RECEPTOR IL-20R1 E IL-20R2 (PARRISH-NOVAK ET AL., 2002;
WANG ET AL. ., 2002).
• LA UNIÓN DE IL-24 A SUS RECEPTORES ACTIVA PRINCIPALMENTE
LA SEÑALIZACIÓN DE JAK-STAT (WANG ET AL., 2002).
• IL-24 HUMANA SE GLICOSILA PARA SER SECRETADA POR LAS IMAGEN OBTENIDA DE ARTICULO DE
YASUTAKA MITAMURA ET ALL., 2020
CÉLULAS, Y LA N-GLICOSILACIÓN JUEGA UN PAPEL CRÍTICO EN SU
FUNCIÓN (FUSON ET AL., 2009).
• IL-20 E IL 24 PUEDEN UNIRSE AL IL-22R DE LOS OSTEOCLASTOS,
AUMENTANDO MPC-1, LO QUE A SU VEZ CONDUCE A UNA
OSTEOCLASTOGÉNESIS INFLAMATORIA (GREISEN ET AL., 2015;
KRAGSTRUP ET AL., 2016).
• TANNERELLA FORSYTHIA
• ENTRE LOS PRINCIPALES PATÓGENOS PERIODONTALES, ALTAMENTE
PROTEOLÍTICOS (HOLT Y EBERSOLE, 2005).
• ABUNDANTE EN PLACAS SUBGINGIVAL DE PACIENTES CON
PERIODONTITIS CON GRAN HEMORRAGIA E INFLAMACIÓN (CAMELO-
CASTILLO ET AL., 2015).
• FACTORES DE VIRULENCIA: PROTEASA SIMILAR A TRIPSINA, PROTEASA
PRTH, SIALIDASAS, PROTEÍNA A DE SUPERFICIE BACTERIANA,
IMAGEN OBTENIDA DE
HEMAGLUTININA, CAPA S, KARILISINA Y DIPEPTIDIL AMINOPEPTIDASA
IV (BRYZEK ET AL. 2014; KARIM ET AL., 2010; SHARMA, 2010; YOST Y ES.123RF.COM
DURAN-PINEDO, 2018).
• IL-24 SIGNIFICATIVAMENTE AUMENTADA EN QUERATINOCITOS ORALES
HUMANOS HOK-16B DESPUÉS DE LA INFECCIÓN CON T. FORSYTHIA
(DATOS NO PUBLICADOS).
• T. FORSYTHIA INDUCE VARIAS CITOCINAS
PROINFLAMATORIAS, INCLUIDAS IL-1B, IL-
1Β, IL-6, TNF-A E IL-8, EN DIFERENTES TIPOS
DE CÉLULAS (BLOCH ET AL., 2017; JUNG ET
AL., 2017 ; LEE ET AL., 2016; SEKOT ET AL.,
2011).
• HASTA LA FECHA NO HA HABIDO INFORMES
SOBRE SU PAPEL EN LA REGULACIÓN DE IL-
24.
 OBJETIVO E HIPÓTESIS

• OBJETIVO: INVESTIGAR LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE IL 24 POR T.

FORSYTHIA EN CÉLULAS HOK-16B.
• HIPÓTESIS:
• T. FORSYTHIA INDUCE LA EXPRESIÓN DE IL-24 Y LA SECRECIÓN DE IL-24 GLICOSILADA
EN CÉLULAS HOK-16B.
• LA EXPRESIÓN DE IL-24 ES REGULADA POR IL-6 A TRAVÉS DE LA ACTIVACIÓN DE ROS Y
MAPK TRAS LA INFECCIÓN POR T. FORSYTHIA.
• IL-24 ES CAPAZ DE AUMENTAR LOS FACTORES PROINFLAMATORIOS.
 MÉTODOS
INMUNOBLOTIN
G

HOK-
16B
Medición de
ROS
 RESULTADOS
1. T. FORSYTHIA INDUCE LA EXPRESIÓN
DE IL-24 Y LA SECRECIÓN DE IL-24
GLICOSILADA.
• FIG 1: T.F INCREMENTA LA EXPRESIÓN
DE ARNM IL-24 EN TODOS LOS
TIEMPOS DE INCUBACIÓN A
DIFERENTES MOI DE T.F.
• SE HACE ENSAYO LIVE DEAD (NO
ENCONTRADO) EN DONDE SE APRECIA
MÍNIMA MUERTE CELULAR AL
TRATAMIENTO POR 24 Y 48 HRS CON
T.F.
 RESULTADOS
1. T. FORSYTHIA INDUCE LA EXPRESIÓN DE IL-
24 Y LA SECRECIÓN DE IL-24 GLICOSILADA.
• FIG 2A: TRATAMIENTO DE HOK-16B CON T.F.
• LISADOS CELULARES: IL-24 EN LA POSICIÓN
DE 24 KDA
• SOBRENADANTE: IL-24 EN LA POSICIÓN DE 24
KDA Y 45 KDA
• CONCLUSIÓN: IL-24 SECRETADA A 45 KDA
PUEDE ESTAR EN FORMA GLICOSILADA

• FIG 2B: NO SE IDENTIFICARON PROTEÍNAS EN

LA POSICIÓN DE 45 KDA DESPUÉS DE LA
DESGLICOSILACIÓN: PROTEÍNAS
IDENTIFICADAS A 45 KDA FORMA
GLICOSILADA DE IL-24
 RESULTADOS
1. T. FORSYTHIA INDUCE LA EXPRESIÓN DE IL-24 Y LA
SECRECIÓN DE IL-24 GLICOSILADA.
• FIG 3A: ANÁLISIS DE IL-19 ; IL-20 E IL-24 POR RT-PCR
• IL-20 SE EXPRESÓ EN CÉLULAS HOK-16B, PERO NO SE
VIO AFECTADA POR T. F., MIENTRAS QUE LA IL-19 SE
DETECTÓ MUY POCO.
• LA EXPRESIÓN DE ARNM DE IL-24 EXHIBIÓ UNA
REGULACIÓN BIMODAL POR T.F. SIMILAR AL SOCS3
DESCRITO ANTERIORMENTE (ROSS ET AL., 2017).
• IL-24 AUMENTÓ A LAS 3HRS, DISMINUYÓ A LAS 6HRS Y
AUMENTÓ NUEVAMENTE A LAS 24HRS

• FIG 3B: LA EXPRESIÓN DE LOS RECEPTORES DE IL-

24 EN LAS CÉLULAS HOK 16B SE ANALIZÓ
MEDIANTE RT-PCR. LA INFECCIÓN CON T.
FORSYTHIA NO AFECTÓ A SU NIVEL DE EXPRESIÓN
 RESULTADOS
2. IL-6 INDUCE LA EXPRESSION DE IL-24
• FIG 4A Y B: ENTRE TODAS LAS CITOCINAS
PROBADAS, IL 6 FUE UN FUERTE INDUCTOR DE LA
EXPRESIÓN DE ARNM DE IL-24, INDUCIÉNDOLO DE
UNA MANERA BIMODAL SIMILAR A T. FORSYTHIA
• FIG 4C: EL AUMENTO DE LA EXPRESIÓN DE IL-24
POR IL-6 TAMBIÉN CONDUJO AL AUMENTO DE IL-24
SECRETADA
• FIG COMPLEMENTARIA NO ENCONTRADA: AL
IGUAL QUE IL-6, TNF-A INDUJO LA EXPRESIÓN DE
IL-24 DE UNA MANERA BIMODAL. SIN EMBARGO, T.
F. NO INDUJO TNF-A EN CÉLULAS HOK-16B
 RESULTADOS
3. ROS INDUCIDOS POR T. FORSYTHIA
CONTRIBUYEN A AUMENTO DE EXPRESSION DE
IL-24
• FIG 5A: T. F. INDUJO LA PRODUCCIÓN DE ROS
DE UNA MANERA TIEMPO Y DOSIS
DEPENDIENTE.
• FIG 5B Y 5C: EL TRATAMIENTO DE LAS
CÉLULAS CON NAC CONDUJO A
• EXPRESIÓN SIGNIFICATIVAMENTE REDUCIDA
DE ARNM DE IL-24 INDUCIDA POR T.F
• MENOR SECRECIÓN DE IL-24 GLICOSILADA
INDUCIDA POR T. F.

• FIG 5D: NAC INHIBIÓ LA IL-6 INDUCIDA POR T.

FORSYTHIA TANTO A NIVEL DE GENES COMO
DE PROTEÍNAS.
 CONCLUSIÓN: ROS INDUCIDAS POR T.
RESULTADOS FORSYTHIA INDUCEN LA ACTIVACIÓN DE
MAPK, LO QUE CONDUCE A LA EXPRESIÓN DE
IL-6 QUE CONTRIBUYE A UNA MAYOR
4. LA SEÑALIZACIÓN DE MAPK ESTÁ INVOLUCRADA
EXPRESIÓN DE IL-24
EN LA EXPRESIÓN DE IL-24 POR T.FORSYTHIA
• FIG 6A: T. FORSYTHIA ACTIVÓ ERK Y P38 MAPK
PERO TUVO UN EFECTO MÍNIMO EN LA VÍA
SAPK/JNK
• FIGURA NO MOSTRADA: LA BACTERIA NO ACTIVÓ
LA SEÑALIZACIÓN DE NF-ΚB
• FIG 6B Y 6C: EL TRATAMIENTO DE CÉLULAS CON EL
INHIBIDOR DE ERK MAPK PD98050 O EL INHIBIDOR
DE P38 MAPK SB203580 INHIBIÓ
SIGNIFICATIVAMENTE LA EXPRESIÓN DE ARNM DE
IL-24 Y LA SECRECIÓN DE IL-24, MIENTRAS QUE EL
INHIBIDOR DE JNK SP600125 NO LO HIZO
• FIG 6D: NAC INHIBIÓ LA ACTIVACIÓN DE MAPK
ACTIVADA POR T. F.: ROS PRODUCIDAS POR T. F.
SON RESPONSABLES DE INDUCIR LA EXPRESIÓN DE
IL-24 MEDIANTE LA ACTIVACIÓN DE LA VÍA MAPK
• FIG 6E: LOS INHIBIDORES DE ERK Y P38 INHIBIERON
LA PRODUCCIÓN DE IL-6 INDUCIDA POR T.
FORSYTHIA
 RESULTADOS
5. IL-24 HUMANA RECOMBINANTE INDUCE
MEDIADORES PRO INFLAMATORIOS.
• FIG 7A: IL-24 RECOMBINANTE AUMENTÓ
SIGNIFICATIVAMENTE LA EXPRESIÓN DE
ARNM DE IL-1B, IL-8, CXCL10 Y MCP-1
DESPUÉS DEL TRATAMIENTO DURANTE
3HRS A 24HRS
• FIG COMPLEMENTARIA NO MOSTRADA:
LA IL-24 RECOMBINANTE TUVO EFECTO
MÍNIMO EN LA EXPRESIÓN DE IL-6.
CONCLUSIÓN: IL-6 INDUCE IL-24 EN
CÉLULAS HOK-16B, PERO NO AL REVÉS.
 DISCUSIÓN
IL-24 se una a receptor de IL-
20 induciendo via MAPK
Aumento en
secreción de IL-
IL-24 incrementa producción de MCP-
24 e IL 24 1 en queratinocitos, lo cual induce
glicosilada osteoclastogenesis por aumento de
CCR2

Aumento en secreción de IL-6 lo que induce la

secreción de IL_24 y no al revés
ROS inducidas por t. Forsythia provocan la
activación de MAPK, lo que conduce a la expresión
de IL-6 que contribuye a una mayor expresión de IL-
24