Comparative pathogenesis of piscirickettsiosis in Atlantic

salmon (Salmo salar l.) post-smolt experimentally challenged

with LF-89-like and EM-90-like Piscirickettsia salmonis isolates

M. ROZAS-SERRI., R ILDEFONSO., A PEÑA., R ENRÍQUEZ.,S BARRIENTOS1., L MALDONADO.

DOI: 10.1111/JFD.12671 / JOURNAL OF FISH DISEASES

PUBLISHER MAY 24, 2017

 OBJETIVO
• Caracterizar comparativamente la patogénesis de SRS en Salmón Atlántico post-smolt infectado
con Piscirickettsia salmonis LF-89-like (PS-LF-89) y EM-90-like (PS -EM-90) por medio de un
estudio de cohabitación.
• La caracterización incluyó la evaluación de los cambios patológicos macroscópicos y
microscópicos, la bioquímica sanguínea y la carga bacteriana durante las etapas tempranas y tardías
de la infección.
 MATERIALES Y MÉTODOS

• Análisis y evaluación previa peces  libres de patógenos (PCR)

• Las cepas de P. salmonis PS-LF-89 y PS-EM-90 se cultivaron en agar Austral-TS Hem durante 6
días a 18 °C
• Las colonias bacterianas obtenidas en placas, se suspendieron en 1 ml de medio Leibovitz L-15
suplementado con 10% de suero bovino fetal bovino.
• (OD625) medida en espectrofotómetro  Biomasa
• Para cuantificar la biomasa producida; Se obtuvieron 12 ml de inóculo de PS-LF-89 y PS-EM-90
con OD625 de 0,057 y 0,056, respectivamente.
• Este OD625 correspondía a aproximadamente 10 5,6 u.f.c./ml.
 Desafío de cohabitación: Piscirickettsia salmonis

Sistema 1 Sistema 2 Sistema 3

(3 Tanques 1000 L C/u) (3 Tanques 1000 L C/u) (3 Tanques 1000 L C/u)

N = 150 ><> N = 150 ><> N = 150 ><>

(55 Troyanos + 95 Sanos) (55 Troyanos + 95 Sanos) (55 Control + 95 Sanos)
PS - LF 89 PS - EM 90 Sol. Salina

• Sistema 1,2 y 3 Idénticos con Recirculación

independiente
• Troyano (Pez inyectado con 0,1 mL Cepa estudio)
 Metodología: Desafío de cohabitación: Piscirickettsia salmonis

Sistema X
(3 Tanques 1000 L C/u)

Tiempos de Muestreo ><> Cohabitantes:

7, 9, 12, 14, 16, 19, 21, 24, 28, 35, 42, 49 y 56

Muestras:

Riñón
Hígado
Corazón
Cerebro
Músculo esquelético
Branquias (análisis histopatológico)
n = 150 ><> Sangre (Marcadores Bioquímicos)
(55 Troyanos + 95 Sanos) ARNm del gen 16S rRNA – RT-qPCR

• El desafío de cohabitación se completó 61 días después de la inoculación de los troyanos (dpi)

• Se obtuvieron muestras de sangre total en cada punto de tiempo para identificar marcadores
bioquímicos sanguíneos que podrían revelar una infección temprana con P. salmonis.
• La cuantificación relativa del ARNm del gen 16S rRNA de PS-LF-89 y PS-EM-90 se
realizó utilizando RT-qPCR.
 RESULTADOS
• La patogénesis de peces cohabitantes infectados con ambos aislamientos fue relativamente diferente debido a que los
peces cohabitantes infectados con PS-EM-90 mostraron una mayor mortalidad acumulada (94.9%, chi 6.524, p = 0.011)
y menos tiempo hasta la muerte (42.2 días, p <0.001 ) en comparación con PS-LF-89 (81,7% y 45,9 días.

Porcentaje de mortalidad acumulada en troyanos y cohabitantes de Peces de salmón del Atlántico infectados con (a) PS-LF-89, (b) PS-LF-89 tanque duplicado, (c) PS-EM-90 y (d) PS-EM -90 tanque duplicado.
(e) Estimador de Kaplan-Meier de la función de supervivencia acumulada para troyanos y peces
cohabitantes PS-LF-89 y PS-EM-90 durante el período de estudio
 RESULTADOS

• PS-LF-89 causó una infección SRS caracterizada por lesiones renales y hepáticas, pero PS-EM-90 causó
una enfermedad sistémica caracterizada por riñón, hígado, corazón, cerebro, músculo esquelético y lesiones
intestinales.
• La disminución de la concentración sérica de proteínas totales y albúmina, así como el aumento de los
niveles séricos de ALT, AST y creatinina en los peces infectados con ambos aislamientos confirmaron que
se produjeron cambios en la función hepática y renal
 RESULTADOS

• Se observa una fuerte correlación positiva con la carga bacteriana expresada como abundancia de
transcritos de rRNA de 16S de P. salmonis en hígado y riñon de peces afectados con cualquier aislamiento,
pero la correlación fue significativamente mayor en peces infectados con PS-EM-90
• Se detectó P. salmonis en las branquias de peces cohabitantes de ambos grupos a 21 dpi, lo que confirma
que las branquias son el principal punto de entrada de la bacteria al hospedero.
 CONCLUSIÓN

• LA PATOGÉNESIS DE LOS PECES INFECTADOS CON PS-LF-89 Y PS-EM-90 DIFIERE, Y

ESTO PROBABLEMENTE ESTÉ ASOCIADO CON LA PATOGENICIDAD DE PS-LF-89 Y
PS-EM-90.
Lesiones patológicas externas en salmón atlántico post-smolt infectado a través de la cohabitación con PS-LF-89 y PS-EM-90.
Los peces PS-LF-89 no mostraron lesiones epidérmicas significativas durante las etapas de infección temprana o tardía, mientras que los peces
PS-EM-90 mostraron (a) áreas focales de protrusión focales y áreas nodulares focales y multifocales a 35 dpi (flecha blanca), (b ) úlceras
hemorrágicas de superficie focal de 1-3 mm en la zona ventral del pez a 38 ppp (flecha negra), (c) hemorragias superficiales multifocales de 2-5
mm en las zonas lateral y ventral del pez a 42 ppp (negro) flecha) y (d) úlceras focales a multifocales de 3-6 mm en la zona dorsal del pez a 49
dpi (flecha negra).