Diseño del Reactor Enzimático

- Determinación del tamaño del reactor (volumen operacional).

- Evaluación del comportamiento.
Enzimas
Cronología

s. XVIII Estudios de digestión de carne utilizando

secreciones estomacales.

s. XIX Conversión de almidón a azúcar utilizando

saliva y extractos de plantas.

1850’s L. Pasteur: fermentación de azúcar en alcohol.

“fermentos”.

1897 E. Buchner: extractos de levadura.

F. Kühne: denominación “enzymes”

1926 J. Summer: separación y cristalización de ureasa.

Todas las enzimas son proteínas.
Concepto y determinación de actividad enzimática

1 UI

Cantidad de enzima que cataliza la conversión de 1 mol

de sustrato en producto en 1 min en condiciones estándar

S P
Concepto y determinación de actividad enzimática

lactosa glucosa + galactosa

3000 moles de glucosa por min:

4.7% lactosa
1 g Lactozym 3000 L
pH = 6.5
30 °C
Concepto y determinación de actividad enzimática

glucosa + O2 ác. glucónico + H2O2

Oxida 10000 moles de glucosa

por min:
1 g Gluzyme 10000 BG
10% glucosa
pH = 5.1
35 °C
Kirk et al. 2002. Industrial enzyme applications. Current Opinion in Biotechnology
Jemli et al. 2016. Biocatalysts: applications and engineering for industrial purposes.
Critical Reviews in Biotechnology
1. Industria Química

Choi et al. 2015. Industrial applications of enzyme biocatalysis. Biotechnology Advances

2. Industria Farmaceutica

Choi et al. 2015. Industrial applications of enzyme biocatalysis. Biotechnology Advances

2. Industria Farmaceutica

Choi et al. 2015. Industrial applications of enzyme biocatalysis. Biotechnology Advances

2. Industria Farmaceutica

Choi et al. 2015. Industrial applications of enzyme biocatalysis. Biotechnology Advances

2. Industria Alimentos

Choi et al. 2015. Industrial applications of enzyme biocatalysis. Biotechnology Advances

Clasificación
Clasificación internacional
internacional de
de la
la enzimas
enzimas
Número Clase Tipo de reacción catalizada

1 Oxidoreductasas Transferencia de e- o H-
2 Transferasas Transferencia de grupos
3 Hidrolasas Reacciones de hidrólisis
4 Liasas Adición de grupos a dobles enlaces o inversa
Transferencia de grupos dentro de la misma
5 Isomerasas
molécula, formación de isómeros
6 Ligasas Formación de enlaces

ATP + glucosa  glucosa-6-fosfato + ADP

ATP:glucosa fosfotransferasa (2.7.1.1)

2: clase; 7: subclase; 1: aceptor hidroxilo; 1: glucosa

Clasificación
Clasificación internacional
internacional de
de la
la enzimas
enzimas

Cornish-Bowden (2012)
Cofactores:
Cofactores: -- Elementos
Elementos inorgánicos
inorgánicos
-- Compuestos
Compuestos orgánicos
orgánicos (coenzimas)
(coenzimas)

Elemento Enzima
Cu2+ Citocromo oxidasa
Fe2+, Fe3+ Citocromo oxidasa, catalasa, peroxidasa
K+ Piruvato quinasa
Mg2+ Hexokinasa, piruvato quinasa
Mn2+ Arginasa, ribonucleótido reductasa
Mo Dinitrogenasa
Ni2+ Ureasa
Se Glutatión peroxidasa
Zn2+ Anhidrasa carbónica, alcohol deshidrogenasa
Coenzimas:
Coenzimas: Compuestos
Compuestos orgánicos
orgánicos

Coenzima Grupo químico transferido Precursor

Biocitina CO2 Biotina
Coenzima A Grupos acil Ácido pantoténico
Coenzima B12 Átomos de H y grupos
Vitamina B12
(cobalamina) alquílicos
FAD Electrones Riboflavina (vitamina B2)
NAD Ión hidruro (H-) Ácido nicotínico (niacina)
Fosfato de
Grupos amino Piridoxina (vitamina B6)
piridoxal
Tetrahidrofolato Grupos de un carbono Ácido fólico
Tiamina
Aldehídos Tiamina (vitamina B1)
Pirofosfato
Catálisis
Catálisis
Modelo
Modelo de
de cinética
cinética enzimática:
enzimática: Michaelis-Menten
Michaelis-Menten
Cinética
Cinética enzimática:
enzimática:

o Estudios de O’Sullivan y Tompson (1890).

invertasa
Sacarosa + agua Glucosa + Fructosa

1,0

0,8

0,6   +
S
0,4

0,2

0,0
0 1 2 3 4 5
t
Cinética
Cinética enzimática:
enzimática:

o O’Sullivan and Tompson, 1890

o Brown, 1902

o Henri, 1902

o Sørensen, 1909

o Michaelis and Menten, 1913

o Briggs and Haldane, 1925

Cinética
Cinética enzimática:
enzimática:
o Estudios de Michaelis y Menten (1913).

 𝐄+ 𝐒 ⇋ 𝐄 𝐒 → 𝐄+ 𝐏

1. Primer paso: equilibrio (hipótesis de pseudo-equilibrio).

2. Balance de E.

3. Segundo paso: reacción de 1° orden.

Cinética
Cinética enzimática:
enzimática:
o Estudios de Briggs y Haldane (1925).

 𝐄+ 𝐒 ⇋ 𝐄 𝐒 → 𝐄+ 𝐏

1. Concentración de ES constante
(hipótesis del pseudo-estado estacionario).

2. Balance de E.

3. Segundo paso: reacción de 1° orden.

Cinética
Cinética enzimática:
enzimática: Parámetros
Parámetros cinéticos
cinéticos

  Parámetro Michaellis-Menten Briggs-Haldane

Velocidad

Concentración de sustrato
Velocidad

Concentración de sustrato
Valores
Valoresde
deKm
Kmde
dealgunas
algunasenzimas
enzimas
Constante
ConstanteCatalítica
Catalíticade
dealgunas
algunasenzimas
enzimas
Especificidad
Especificidadde
dealgunas
algunasenzimas
enzimas
Reacciones
Reaccionesbisustrato
bisustrato
Inhibición
Inhibición Enzimática
Enzimática

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,

con el complejo enzima-substrato o con ambos:

• I. Competitivo E+I EI
• I. Acompetitivo
• I. Mixto
ES + I ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica químicamente a la enzima:

E+I E’
Inhibición
Inhibición Reversible
Reversible
Inhibición Competitiva
Inhibición Acompetitiva
Inhibición Mixta
Inhibición
Inhibición Irreversible
Irreversible

Se unen covalentemente a la enzima

Diisopropilfluorofosfato
Cinética Enzimática: Efecto del pH
Cinética Enzimática: Efecto del pH

1.0

HEH
0.8

K1

Concentración relativa
0.6

HE- + H+
0.4

K2
0.2

E2- + 2H+
0.0
2 3 4 5 6 7 8 9 10
pH

pK1 = 4.0; pK2 = 8.0

Cinética Enzimática: Efecto del pH