Motilidad y recuperación

de espermatozoides de alpaca ( Vicugna

pacos ) después de la centrifugación en
una solución de gradiente de densidad
Autores:
Gómez-Quispe, O. E. ; Gutiérrez-Reynoso, G. A ; Gallegos-Cardenas, A. ; Fumuso, F. G.; Asparrin, M.;
Asparrin-Del Carpio, M.; Jara, C. W. ; Ponce, D.5 ; Miguel, M. ; Youngs, C. R. Y Vivanco, H. W.
1. ¿Cuál es el problema general de investigación?
 La naturaleza viscosa de la eyaculación
2. ¿Cómo otros investigadores y/o laboratorios están tratando de
solucionar este problema general de investigación?
Licuefacción del semen por métodos enzimáticos (Bravo et al., 1997a, 2000a;
Giuliano et al., 2010)
Desgelificación por cultivo a temperatura ambiente (Garnica et al., 1993) o
incubación a temperatura corporal (Wani et al. al., 2008).
Pipeteo repetido de semen (Santiani et al., 2005; Raymundo et al., 2006).
Agitación magnética (Mosaferi et al., 2005; Niasari-Naslaji et al., 2006, 2007).
Recuperación de espermatozoides epididimarios post mortem (Morton et al., 2007).
Adquisición de espermatozoides derivados in vivo de los conductos deferentes (Pérez
et al., 2014; Gómez-Quispe et al., 2016).
3. ¿Cuáles son los inconvenientes de esas soluciones? ¿Logran resolver el problema
general de investigación?
• Ninguno de eso enfoques sin embargo, ha mejorado significativamente la calidadd de los parámetros del
espermatozoide después del procesamiento.

4. ¿Cómo los autores del artículo científico, que le toca exponer, plantean solucionar el
problema general de investigación?
• centrifugar los espermatozoides a bajas velocidades después de la dilución

• 5. ¿Porque el enfoque (solución) del artículo es diferente (mejor) a las planteadas por
los otros laboratorios y/o investigadores?
OBJETIVOS

• Evaluar la recuperación, la motilidad y la integridad de la membrana plasmática de espermatozoides de

alpaca después de la centrifugación en una de dos soluciones diferentes en una de tres combinaciones
diferentes de velocidad y tiempo.
MATERIALES Y METODOS
 Se recuperó un total de 24 eyaculados de
siete machos Huacaya reproductivamente
sanos usando una vagina artificial
modificada (AV)
 Colección de semen
 Antes de la intromisión, el técnico desvió el
pene con la mano hacia la AV donde se
mantuvo hasta el final de la cópula
(aproximadamente 15-25 min). La frecuencia Fig. 1: Vagina artificial modificada (Vivanco et
del la recolección semen fue de 2 a 3 veces al., 2010). a: abertura principal del tubo de
por semana durante el temporada goma (4 cm de diámetro), b: abertura del tubo
reproductiva (febrero a marzo). excéntrico (2 cm de diámetro), c: longitud del
tubo de goma (24 cm), d: funda de látex cónica
(color naranja), e: funda de látex recta (color
morado) y f: tubo de recogida de semen
 Selección de eyaculado
• Solo los que eyaculan con motilidad > 60% y concentración de esperma > 80 millones
de espermatozoides / ml fueron aceptados para el experimento.
Diseño experimental
• Se utilizó un arreglo de tratamiento factorial 2 × 3 para este estudio.
 El eyaculado se dividió en fracciones para centrifugación:
 En una de dos soluciones (extensor Tris o solución de gradiente de
densidad PureSperm ® 80)
 A una de las tres combinaciones de velocidad y tiempo (492 × g durante 15 min, 1968
× g durante 10 min, o 4448 × g durante 7 min).
Preparación de semen para centrifugación
• Consistió en colocar 0.5 ml de PureSperm ® 80 o Tris extensor en el fondo de un tubo
de centrífugado cónico de 15 ml, en el que se añadieron cuidadosamente 0,5 ml de
semen crudo.
• La centrifugación de esperma se realizó a 20 ° C utilizando un centrifugadora
estándar
RESULTADOS

Fig. 2: Ubicación de espermatozoides, plasma seminal e

impurezas en solución Tris (tubo a) o PureSperm®80 (tubo b)
después de la centrifugación de semen de alpaca a 4448 × g
durante 7 min.
Tabla 1: Tasas de recuperación de espermatozoides, pérdida de movilidad de los espermatozoides
e integridad funcional de la membrana plasmática de los espermatozoides de alpaca después de
la centrifugación a varias combinaciones de velocidad y tiempo en uno de dos medios diferentes

Variable Valor p

Tiempo de Medio‡ Velocidad-tiempo X

velocidad† medio

Recuperación de esperma <0.001 <0.001 <0.001

Pérdida de motilidad espermática <0.318 <0.001 <0.005
Integridad funcional de la membrana <0.002 <0.001 <0.165
plasmática

† Velocidad-tiempo de centrifugación: 492 × g durante 15 min, 1968 × g durante 10 min, 4448 × g durante
7 min, y ‡ Medio utilizado para la centrifugación de eyaculados: Tris o PureSperm®80
Fig. 3: tasa de recuperación de esperma segregada por la combinación de
velocidad de centrifugación y tiempo. Los números dentro de cada barra
representan medios de mínimos cuadrados de recuperación de esperma
Fig. 4: Velocidad de recuperación de esperma segregada por medio
de centrifugación. Los números dentro de cada barra representan
medios de mínimos cuadrados de recuperación de esperma
Fig. 5: Pérdida de la motilidad
de los espermatozoides
segregada por la
combinación de velocidad y
tiempo de centrifugación. Los
números dentro de cada
barra denotan medios
mínimos cuadrados de
pérdida de motilidad,
mientras que los números
por encima de las barras
representan medios mínimos
cuadrados de motilidad
posterior a la centrifugación
Fig. 6: Pérdida de la motilidad espermática segregada por medio de centrifugación.
Los números dentro de cada barra denotan medios mínimos cuadrados de pérdida de
motilidad, mientras que los números por encima de las barras representan medios
mínimos cuadrados de motilidad posterior a la centrifugación.
Fig. 7: Pérdida de la integridad funcional de la membrana plasmática del esperma segregada
por la combinación de velocidad y tiempo de centrifugación. Los números dentro de cada
barra denotan medios mínimos cuadrados de pérdida de integridad funcional de la
membrana, mientras que los números sobre las barras (entre paréntesis) representan
medios mínimos cuadrados de integridad funcional de la membrana plasmática posterior a la
centrifugación
Fig. 8: Pérdida de la integridad funcional de la membrana plasmática del esperma
segregada por medio de centrifugación. Los números dentro de cada barra denotan
medios mínimos cuadrados de pérdida de integridad funcional de la membrana, mientras
que los números sobre las barras (entre paréntesis) representan medios mínimos
cuadrados de integridad funcional de la membrana plasmática posterior a la
centrifugación
Fig. 9: Correlación entre la motilidad de los espermatozoides antes y después de la centrifugación de las
eyaculaciones de alpaca en medio Tris o solución de gradiente de densidad PureSperm®80 en una de tres
combinaciones diferentes de velocidad y tiempo. Los puntos blancos representan la centrifugación a 492 ×
g durante 15 min, los puntos grises representan la centrifugación a 1968 × g durante 10 min, y los puntos
negros representan la centrifugación a 4448 g × durante 7 min.