COMPOSICIÓN DEL CONTENIDO DE

ÁCIDOS FENÓLICOS EN EL ORUJO

DE MANZANA
(MALUS SP)

Márcia Christina Soares.; Érika Taciana Ribeiro; Eugênia Marta Kuskoski; Luciano
Valdemiro Gonzaga; Alessandro Lima; Jorge Mancini Filho; Roseane Fett. (2, ABRIL,
2008).

ESTUDIANTES DE INGENIERIA AGROECOLOGICA

INTEGRANTES: FACULTAD DE INGENIERIA
CAMILO CAMACHO UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
LEYDI CUYABAZO FLORENCIA- CAQUETA
2019
 ¿QUE ES EL FENOL?
El fenol es un sólido incoloro a blanco cuando ocurre en forma pura. La
preparación comercial es un líquido que se evapora más lentamente que el agua.
El fenol tiene un olor repugnantemente dulce y alquitranado característico.
Son un grupo de compuestos orgánicos que presentan en su estructura un grupo
funcional hidroxilo unido a un radical arilo.
La formula general para un fenol se escribe como Ar-OH
 RESUMEN
Estudiar la composición de ácidos fenólicos en orujo de
manzana en cultivos de Gala y Fuji. Se fraccionaron en
ácidos fenólicos, se esterificaron y se analizaron
mediante cromatografía de gases y espectrometría de
masas (GC-MS). Se obtuvo peso seco, 93.94 mg / g y
68.38 mg / g, ácidos fenólicos libres en Gala fue de
29,11 mg / g, y en Fuji fue de 16.03 mg / g. El salicílico
fue el ácido fenólico libre predominante encontrado en
ambos cultivos, que consiste en 91.67% y 63.57%.
Contenido total de ácidos fenólicos esterificados fue de
53.75 mg / y 48.29 mg / g.
 INTRODUCCION
Las frutas de manzana, especialmente la piel, son ricas en flavonoides
(por ejemplo, flavonoles, catequinas, floridina y antocianinas) y
contienen cantidades considerables de derivados del ácido
hidroxicinámico.
Los flavonoides y los ácidos fenólicos contribuyen a los aspectos de
calidad de las manzanas. Estos compuestos están involucrados en las
características de calidad de las frutas frescas y sus productos
procesados, como la textura, el color y el sabor.
El orujo de manzana, una mezcla heterogénea que consiste en piel,
núcleo, semilla, cáliz, tallo y tejidos blandos, ha demostrado ser una
fuente rica de polifenoles, Los polifenoles de manzana se encuentran
principalmente en la piel y semillas.
 OBJETIVO
Fraccionar los constituyentes fenólicos del orujo
(Aguardiente) de manzana en formas libres, solubles e
insolubles y, después de la hidrólisis, determinar las
proporciones relativas de los diversos ácidos fenólicos.

Cultivo de gala Cultivo de Fuji

 MATERIALES
Las muestras de orujo de manzana de los cultivos de
Gala y Fuji fueron suministradas por Fischer, un
productor de jugo industrial, Fraiburgo-SC, Brasil.

Se sometieron a un tratamiento térmico de 80 °

durante 10 minutos. para inactivar las enzimas
peroxidasa y polifenol oxidasa.
 Metodología
Extracción de ácidos fenólicos libres.

La fracción se
esta muestra se
concentró en un
extrajo seis
El evaporador
1 g de polvo veces con 20 ml
sobrenadante rotatorio al
seco de de
resultante de vacío a 40 ° C y
muestra se tetrahidrofuran
las se diluyó en 5
sometió a o y se mezcló
extracciones se ml de
deslipidación durante 5
filtró y tetrahidrofurano
con éter minutos en un
deshidrató con . El extracto se
etílico en vórtice a
sulfato de almacenó bajo
Soxhlet temperatura
sodio anhidro. refrigeración y
ambiente (±
atmósfera de
23ºC).
nitrógeno.
 Extracción de ácidos fenólicos esterificados.
Los fenólicos solubles de la Para liberar los
muestra se extrajeron 6 ésteres solubles,
veces con 20 ml de que se
solución de metanol: esterificaron con
acetona: agua (7: 7: 6). La proteínas y
muestra se agitó durante 5 polipéptidos, se
minutos y se centrifugó. Al añadió un volumen
final, el sobrenadante se igual de hidróxido
evaporó al vacío, a 40 ° C, de sodio 4N
hasta la fase acuosa.
El sobrenadante se llevo a un embudo
de separación, se extrajo con hexano
(1: 1) para eliminar los ácidos grasos
libres y también para extraer los
fenólicos de la fase acuosa con una
mezcla de éter dietílico: acetato de
etilo: tetrahidrofurano (1: 1: 1),
durante 6 veces.
Después de 3 horas de
hidrólisis a temperatura
ambiente (± 23ºC) en la
atmósfera oscura y de
nitrógeno, el pH se
ajustó a 2 con HCl 6N,
seguido de
centrifugación a 10,000
rpm durante 10 minutos.
La fracción extraída se
filtró y se deshidrató con
sulfato de sodio anhidro,
se evaporó a 40 ° C y se
completó hasta 5 ml con
tetrahidrofurano.
Extracción de ácidos fenólicos ligados a insolubles
El residuo de la
extracción de fenólicos
solubles se hidrolizó
con 25 ml de NaOH 4N
a temperatura
ambiente (± 23ºC) y en
la oscuridad durante 3
horas.
El extracto de ácido
fenólico unido
insoluble se acidificó
hasta pH 2 usando HCl
6N, seguido de
centrifugación a 10,000
rpm durante 10
minutos. Desde este
paso, el procedimiento
fue el mismo utilizado
en el ítem 2.2.2.
Identificación de ácidos fenólicos por cromatografía
de gases.
Se añadió una décima de ml de
patrón interno
(heptadecanoato de metilo-1.5
mg / ml) a 0.5 ml de cada
fracción. La muestra se
derivatizó con 0,2 ml de N, O-
bis (trimetilsilil) acetamida
(BSA) CALENTADA A 60ºC
durante 30 minutos y, después
de enfriarla a temperatura
ambiente, se inyectó en un
cromatógrafo Shimadzu CG 17A
equipado con una ionización
por llama
Se utilizó la columna
semipolar DB5 (J & W ) (25 m
x 0,25 mm); Las condiciones
operativas fueron las
siguientes: temperatura inicial
de la columna 150 ° C,
isotérmica durante 3 minutos;
de 150 a 300 ° C a una
velocidad de 5 ° C / min;
Isotérmica 300 ° C durante 3
minutos. La temperatura de la
cámara de inyección fue de
250 ° C y la del detector fue
de 300 ° C.
 La temperatura de la
cámara de inyección fue de
250 ° C y la del detector fue
de 300 ° C. Se preparó una
solución estándar diluyendo
los 18 ácidos fenólicos
(benzoico, p- se creó con los espectros
hidroxibenzoico, salicílico,
protocatéquico,
clorogénico, elágico, t-
cinámico, vanílico,
ocoumárico, gentisic,
quinic, pumárico, cinámico,
gálico, propilgallate,
ferúlico, caénico y synapic
Las identificaciones se
confirmaron con los
espectros de masas
obtenidos en la
biblioteca fenólica que
de los estándares
fenólicos (Sigma) en el
detector selectivo de
masas Hewlett Packard
5973 y se registró en la
estación de trabajo
Windows NT 4.0
 ANALISIS ESTADISTICO

Todos los análisis se realizaron por triplicado. Análisis de varianza

de una vía (ANOVA) y comparaciones múltiples de Tukey se
llevaron a cabo para probar cualquier Diferencias significativas
entre los medios, utilizando Estadística. 6.0. Diferencias entre
medias al 5% (P <0.05) el nivel se consideró significativo.
 RESULTADOS Y DISCUSION
.

• Identificación de ácidos fenólicos.

Las figuras 2 y 3 muestran ácidos fenólicos libres (A), ácidos fenólicos
esterificados (B) y ácidos fenólicos unidos (C) extraídos de orujo de
manzana de los cultivares Gala y Fuji.

Figura 2. Cromatogramas de gases de ácidos fenólicos libres (A),

ácidos fenólicos esterificados (B) y ácidos fenólicos unidos a insolubles
(C) obtenidos en el cultiuvo de Gala
ácidos fenólicos libres
ácidos fenólicos esterificados
Acido fenólicos unidos a insolubles
Figura 3. Cromatogramas de
gases de ácidos fenólicos
libres (A), ácidos fenólicos
esterificados (B) y ácidos
fenólicos unidos a insolubles
(C) obtenidos del cultivo de
Fuji.
Obtenidos para el cultivo de Fuji

Cromatogramas de gases de ácidos fenólicos libres

ácidos fenólicos esterificados
ácidos fenólicos unidos a insolubles
Contenido de ácido fenólico

Las tablas 1 y 2 muestran los contenidos de ácido

fenólico libre, esterificado e insoluble en los
cultivares Gala y Fuji, respectivamente. Los
contenidos totales de ácido fenólico en orujo de
Gala y orujo de Fuji fueron muy diferentes,
mostrando 93.94 mg / g y 68.38 mg / g,
respectivamente.
 CONTENIDO DE ÁCIDO FENÓLICO (ORUJO DE GALA)
Compuesto Tiempo de retencion Ácidos fenólicos libres fenólicos esterificados Insoluble unido

(min) acidos Acidos fenolicos

Acido salicílico 6.4 28.22 ± 2.10 52.760 ± 4.80 10.690 ± 0.80

Acido cinamico 6.8 - 0.084 ± 0.03 0.032 ± 0.01

Acido vanilico 11.0 - 0.044 ± 0.02 -

Acido gentisico 11.6 - - 0.050 ± 0.01

Acido o-cumario 12.0 - 0.028 ± 0.02 -

Acido protocatechuico 12.3 0.634 ± 0.09 - 0.055 ± 0.01

Acido quinino 13.6 0.032 ± 0.01 - -

Acido p-cumárico 14.6 0.070 ± 0.02 0.044 ± 0.0 -

Acido galo 15.1 0.065 ± 0.01 0.175 ± 0.04 0.077 ± 0.01

Propylgallate 16.5 0.075 ± 0.02 0.198 ± 0.01 0.038 ± 0.00

Acido ferulico 17.5 - 0.159 ± 0.10 0.079 ± 0.02

Acido cafeico 18.4 - 0.062 ± 0.04 0.033 ± 0.00

Acido sinapico 20.1 0.009 ± 0.08 0.140 ± 0.10 0.021 ± 0.01

Acido elágico 38.1 - 0.055 ± 0.01 -

Total fenolicos 29.11 53.75 11.08

 CONTENIDO DE ÁCIDO FENÓLICO (ORUJO DE FUJI)
Compuesto Tiempo de retencion (min) Acidos fenolicos libres Acidos fenolicos esterificados Acidos fenolicos unidos por insoluble

Acido benzoico 3.2 - 0.194 ± 0.01 0.114 ± 0.02

Acido salicílico 6.4 12.450 ± 0.8 47.416 ± 1.00 3.704 ± 0.10

Acido gentisico 11.6 - 0.073 ± 0.01 0.026 ± 0.02

Acido protocatechuico 12.5 1.723 ± 0.01 0.057 ± 0.09 0.051 ± 0.00

Acido galo 15.1 0.0804 ± 0.08 0.061 ± 0.10 -

Propylgallate 16.5 - 0.270 ± 0.02 0.088 ± 0.01

Acido ferulico 17.9 0.655 ± 0.90 - -

Acido cafeico 18.4 - 0.046 ± 0.00 0.025 ± 0.00

Acido sinaptico 20.1 0.633 ± 0.01 0.115 ± 0.03 0.026 ± 0.00

Acido clorogenico 34.9 1.147 ± 0.40 - -

Acido elagico 38.1 - 0.059 ± 0.01 0.022 ± 0.01

Fenolicos totals 16.03 48.29 4.06

 CONCLUSION

• Compuestos fenólicos (ácido benzoico,

ácido salicílico, ácido t-cinámico, ácido
vanílico, ácido o-cumárico, ácido
gentísico, ácido protocatúcico, ácido
quínico, ácido p-cumárico, ácido gálico,
ácido ferúlico propilgalato, ácido
férgico, ácido cafeico, ácido clorogénico
y ácido sinápico) y sus derivados fueron
identificados en el orujo de manzana.
• En las tres fracciones obtenidas de manzana Gala
y Fuji se identificaron dieciséis ácidos fenólicos
diferentes como formas libres, esterificadas e
insolubles.

• El total de ácidos fenólicos en los extractos de

orujo de Gala y Fuji fue de 93.94 y 68.38 mg / g, y
el componente principal de ambos cultivares fue
el ácido salicílico.
GRACIAS POR SU
ATENCIÓN.