PROPAGACIÓN in vitro DE LIMA ÁCIDA citrus

aurantifolia, A PARTIR DE SEMILLAS

JHON FREDYS MORALES VILLA

PRESENTADO A:
DARIO GARAVITO GARAVITO

INSTITUTO UNIVERSITARIO DE LA PAZ

ESCUELA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA
PROGRAMA INGENIERÍA AGRONÓMICA
BARRANCABERMEJA
2019
citrus aurantifolia

es una de las especies de árbol hibrida

de citrus micranatha x citrus medica,
que en si tiene gran porcentaje de
vitamina C, es un árbol oriunda de
sudeste de Asia, se ha extendido a
gran parte del mundo debido a su gran
contenido de vitamina C y gran valor
comercial y forma de alimentarse.
 OBJETIVOS
GENERAL

Propagar masivamente, mediante técnicas in vitro, la especie citrus

aurantifolia a partir de semillas.

ESPECÍFICOS

• Evaluar la respuesta de citrus aurantifolia a reguladores de crecimiento

BAP y ABA.
• Validar efectos en los métodos de desinfección de explantes.
• Obtener cultivos masivos de citrus aurantifolia.
 MATERIALES DE LABORATORIO

• Hipoclorito de Sodio (NaClO) • Recipiente para desechos

5,25% líquidos
• Mecheros • Biker 400 ml, 1000 ml
• Frasco para herramientas • Auto clave
• Envases de vidrio • Estufa
• Pinza • Cultivo madre
• Agua Destilada Esterilizada • Atomizador
• Pipetas
• Alcohol 70%
• Mechera
 ELABORACIÓN DE LA VIDRIERÍA

1. Se lavan los envases de vidrio con una solución de jabón detergente y agua para eliminar lo
macro que puede haber en ellos, mugre y la grasa.
2. Lavar con abundante agua caliente (de la llave) los envases para retirar residuos de jabón.
3. Lavar la vidriera con agua destilada que ya haya ebullido para remover completamente el jabón.
4. Realizar un lavado de la vidriería con una solución de NaClO al 1%.
5. Poner boca abajo la vidriera con el fin de escurrir por completo el agua sobre una superficie
previamente desinfectada.
 ELABORACIÓN DE MEDIO MS
● tomar 5 ml del cultivo madre y embazarlo en el biker para un total de 35 mil
de cultivo madre
● aforrar con agua destilada el biker hasta 500 ml
● calentar en la estufa a temperatura media
● agregar sacarosa y mover hasta homogenizar
● elevar temperatura
● agregar el agar y homogenizar el medio
● agregarlos a los frascos correspondientes
MÉTODOS DE DESINFECCIÓN DE EXPLANTES

1. Un enjuague de 20 min con agua destilada.

2. Se sumergen los explantes en alcohol al 1.0% y 1,5% por 10 y 20 minutos.
3. Se hizo un triple enjuague con agua destilada estéril para retirar el alcohol.
MÉTODOS DE DESINFECCIÓN DE EXPLANTES

1. NaClO al 1,5% por 10 minutos

2. NaClO al 1,0% por 20minutos.

 RESULTADOS
Procedimiento

C.P: Explante con síntomas de contaminación parcial por hongos.

• Tratamiento 1: MS Básico, NaClO al 1,0% por 20 minutos.
• Tratamiento 2: MS Básico, NaClO al 1,5% por 10 minutos.

Tabla 1. Resultados del procedimiento 2 Tabla 2. Resultados del procedimiento 2

semanas de siembra semanas de trasplante

C.T: Explante con contaminación total por hongos.

RESULTADOS DEL PROCEDIMIENTO RESULTADOS DEL PROCEDIMIENTO

Planta Tratamiento Tratamiento Planta Tratamiento Tratamiento

1.0% 1,5% 1.0% 1,5%

SANA: Explante sanos de hongos.

1 SANO SANO 1 SANO SANO

2 SANO SANO 2 SANO SANO

Fuente: Elaboración propia

3 SANO SANO 3 C.P SANO

4 SANO SANO 4 C.T C.P

5 C. P SANO 5 C. P C.T

6 SANO SANO 6 SANO C.T

7 SANO C.TOTAL 7 SANO C.TOTAL

 GRAFICAS
Resultados Resultados
tratamientos tratamientos

Tratamiento
tratamiento 8% 1.0% sanos
1.0% sanos 8% 28%
26% 24% Tratamiento
tratamiento 21% 1.5% sanos
1.5% sanos
24% 14% 21% Tratamiento
26% tratamiento 1.0% C.P
1.0% C.P

procedimiento 2 Procedimiento 2
semanas de siembra semanas de trasplante
 EVIDENCIAS.

Elaboracion MS
transplantes
 ELABORACIÓN DE LA VIDRIERÍA

1. Se lavan los envases de vidrio con una solución de jabón detergente y agua para eliminar lo
macro que puede haber en ellos, mugre y la grasa.
2. Lavar con abundante agua caliente (de la llave) los envases para retirar residuos de jabón.
3. Lavar la vidriera con agua destilada que ya haya ebullido para remover completamente el jabón.
4. Realizar un lavado de la vidriería con una solución de NaClO al 1%.
5. Poner boca abajo la vidriera con el fin de escurrir por completo el agua sobre una superficie
previamente desinfectada.
 ELABORACIÓN DE MEDIO MS
● tomar 5 ml del cultivo madre y embazarlo en el biker para un total de 35 mil
de cultivo madre
● aforrar con agua destilada el biker hasta 500 ml
● calentar en la estufa a temperatura media
● agregar sacarosa y mover hasta homogenizar
● elevar temperatura
● agregar el agar y homogenizar el medio
● agregarlos a los frascos correspondientes
MÉTODOS DE DESINFECCIÓN DE EXPLANTES

1. Un enjuague de 20 min con agua destilada.

2. Se sumergen los explantes en alcohol al 1,5% por 10 minutos.
3. Se hizo un triple enjuague con agua destilada estéril para retirar el alcohol.
MÉTODOS DE DESINFECCIÓN DE EXPLANTES

1. NaClO al 1,5% por 10 minutos

 RESULTADOS
Procedimiento

• Tratamiento 2: MS Básico, NaClO al 1,5% por 10 minutos.

1. del procedimiento 23-10-19 siembra, se utilizaron 20 frascos con su medio de

cultivo, en cada uno de los frascos se le proporcionaron 4 semillas.

Esperando resultados de la siembra.