CROMATOGRAFIA

 Es un método muy empleado para la separación,

identificación y determinación de los componentes
químicos de mezclas complejas.

 Ningún otro método de separación es tan poderoso

ni tiene tantas aplicaciones como la cromatografía
DESCRIPCION GENERAL DE LA
CROMATOGRAFIA
 Es difícil definir con rigor el termino “cromatografía”
porque el concepto se aplica a una gran variedad de
sistemas y técnicas. Sin embargo, todos estos
métodos tienen en común el empleo de una fase
estacionaria y una fase móvil.
 Fase estacionaria:
En cromatografía, la fase estacionaria está fija en
una columna o en una superficie plana.

 Fase móvil:
En cromatografía, la fase móvil se desplaza sobre o
a través de la fase estacionaria, acarreando una
mezcla en la que se encuentra el analito. La fase
móvil puede ser gas, liquido o fluido supercrítico.
 Los componentes de una mezcla se pasan a través
de una fase estacionaria mediante el flujo de una
fase móvil y las separaciones están basadas en las
diferencias de la velocidad de migración entre los
componentes de la fase móvil
CLASIFICACION DE LOS METODOS
CROMATOGRAFICOS

 Los métodos cromatogràficos son de dos tipos

fundamentales.

1.-En la cromatografía en columna la fase

estacionaria se mantiene dentro de un tubo angosto
y la fase móvil se hace pasar por el tubo, con
presión o por gravedad.
 2.- En la cromatografía plana la fase estacionaria
está sujeta por una placa plana o en los poros
de un papel. En este caso la fase móvil se
mueve a través de la fase estacionaria por
acción capilar o por la influencia de la gravedad.
 CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
Figura 1. Clasificación de métodos cromatogràficos en columna
 Como se muestra en la primer columna de la
tabla 1, los métodos de cromatografía en
columna se clasifican de acuerdo con la
naturaleza de la fase móvil, específicamente,
líquidos, gases y fluidos supercríticos. La
segunda columna de la tabla muestra que hay
cinco tipos de cromatografía liquida y dos tipos
de cromatografía de gases que difieren en la
naturaleza de la fase estacionaria y en los tipos
de equilibrio entra las fases.
 En la figura 1 se muestra como se resuelven, por
elución, en una columna empacada, dos
componentes de una muestra, A y B. La columna
consta de un tubo angosto empacado con un sólido
inerte finamente dividido cuya superficie constituye
la fase estacionaria.
 La fase móvil ocupa los espacios que quedan entra
las partículas del empaque. Al inicio se introduce,
por la parte superior de la columna, una solución de
la muestra que contiene una mezcla de A Y B en la
fase móvil, en forma de una capa angosta, en donde
losa dos componentes se distribuyen entre las dos
fases, como se muestra en la figura 1, en el tiempo
t0
 La porción de la muestra contenida en la fase móvil
se mueve hacia abajo en la columna, en donde se
efectúa la partición entre la fase móvil y la fase
estacionaria (tiempo t1).
 El aislamiento de las especies separadas se logra
pasando una cantidad suficiente de fase móvil a
través de la columna para hacer que las bandas
individuales salgan hacia el extremo, en donde se
pueden recolectar o detectar ( tiempos t3 y t4)
CROMATOGRAMAS

 Un cromatograma es un gráfico de alguna función

de concentración del soluto contra el tiempo o
volumen de elución.
 Si durante la elución se coloca en el extremo de la
columna un detector que responda a la
concentración del soluto y se hace un gráfico de la
señal como función del tiempo , se obtiene una serie
de picos, como se muestra en la parte inferior de la
figura 1.
 En este grafico, denominado cromatograma, es útil
tanto para análisis cualitativo como cuantitativo. La
posición de los picos en el eje del tiempo se puede
utilizar para identificar los componentes de la
muestra; el área bajo los picos proporciona una
medida cuantitativa de la cantidad de cada especie.
VELOCIDADES RELATIVAS DE
MIGRACION DE LOS SOLUTOS
 La eficiencia de una columna cromatogràfica para
separar dos solutos depende, en parte, de las
velocidades relativas a las cuales se eluyen dos
especies. Estas velocidades están determinadas por
la relación de la concentración del soluto en cada
una de las dos fases.
CONSTANTE DE DISTRIBUCION
 Todas las separaciones cromatogràficas se basan
en las diferencias de la cantidad de la distribución
del soluto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Para la especie A de soluto, el equilibrio implicado
se describe con la ecuación:

A( móvil ) A( estacionaria)
 La constante de equilibrio Kc, para esta reacción, se
denomina constante de distribución, que se define
como:

Kc= [A]E = CE
[A]M CM

En donde los términos entre corchetes son las

actividades del soluto A en las dos fases. Por lo
general se sustituye por Cs, la concentración molar
del soluto en la fase estacionaria, y CM , su
concentración analítica molar en la fase móvil.
APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA

 La cromatografía es una herramienta útil y versátil

para la separación de especies químicas muy
relacionadas. Además, se puede emplear para la
identificación cualitativa y la determinación
cuantitativa de las especies ya separadas.

 *Cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).

 *Cromatografía de gases.
GRACIAS POR SU ATENCION