1.

Fixação em fixador simples ou mistura fixadora

Preserva a morfologia e a composição dos tecidos
Duração: cerca de 12 horas dependendo do fixador e
do tamanho da peça
2. Desidratação em álcool etílico de
concentrações crescentes (70 a 100%)
Remover a água dos tecidos
6 a 24 horas, dependendo do tamanho da
peça
3.Clareamento ou diafanização em benzol, xilol
ou toluol, solventes do álcool e parafina
Embeber a peça em substância miscível em
parafina
1 a 6 horas, dependendo do tamanho da peça
4. Impregnação pela parafina fundida geralmente
realizada em estufa a 600C
A parafina penetra nos espaços tornando o corte mais
fácil
30 minutos a 6 horas, dependendo do tamanho da
peça
5. Inclusão a peça é colocada num molde
retangular com parafina fundida
Obtenção do bloco de parafina de forma regular,
para ser cortado no micrótomo
Até o endurecimento em temperatura ambiente
6. Microtomia
Cortes com 5m de espessura em
média no micrótomo
6. Microtomia
Cortes com 5m de espessura em
média no micrótomo
7. Montagem em lâmina
Cortes postos em banho-maria para
distensão e “pescados”com lâminas de vidro
e secos em estufa
7. Montagem em lâmina
Cortes postos em banho-maria para
distensão e “pescados”com lâminas de vidro
e secos em estufa
Os corantes podem ser:
Ácidos: coram formações básicas (citoplasma), ex: eosina,
fucsina ácida, orange G
Básicos: coram estruturas ácidas (núcleo), ex: azul de
toluidina, azul de metileno, hemalúmen
Neutros: formados pela associação de um corante básico
com um ácido.
Ou:
Simples (azul de metileno)
Duplos (HE)
Múltiplos (Papanicolau).
Etapas da coloração:

Desparafinização e hidratação: as lâminas

permanecem 24 horas em estufa a 560C para retirar a
parafina. O resíduo é retirado com banhos sucessivos
de xilol (2), álcool absoluto, 95%, 70%, água de
torneira e água destilada.
Coloração: Hematoxilina-eosina
Montagem: com glicerina, goma arábica, gelatina ou
resinas naturais (bálsamo do Canadá, óleo de cedro),
semi-sintéticas ou sintéticas (lamínula)