Porque motivo se realizan los análisis

de los suelos

El análisis de suelos es una herramienta

fundamental para evaluar la fertilidad
del suelo, su capacidad productiva y es
la base para definir la dosis de
nutrientes a aplicar. Para que el dato
analítico reportado por el laboratorio
sea útil, es imprescindible realizar un
adecuado muestreo de suelos, ya que
en esta etapa es donde se define la
exactitud de los resultados del análisis
de suelos.
 Análisis
microbiológicos
del suelo

Microbio
Microbios aerobios
anaerobios

Cuenta de
Hongos totales Bacterias totales Bacterias
microorganismos BACTERIAS
por dilución en por dilución en anaerobias sulfato
placa placa viables por FERMENTATIVAS
reductoras
dilución en placa
Cuenta de microorganismos viables por dilución en placa
Introducción
Procedimiento
Interpretación de resultados
Contar solo aquellas cajas que contengan de 30 a 300 colonias

Calcular con la siguiente ecuación

UFC/g s.s. = (NC * 1/FD * 1/ V) / (P * FH)

Donde:
UFC/ g s. s. = unidades formadoras de colonias / g de suelo seco.
NC= número de colonias en una caja.
FD = factor de dilución que corresponde a la dilución de donde se tomó la muestra
con la que se inocula la caja (10-2 a 10-10).
V= volumen inoculado en la caja = 0.1 ml.
P = peso de la muestra húmeda = 1 g.
FH = factor de corrección de humedad (1-(%humedad/100)).
Bacterias totales por dilución en placa
Introducción
Material y equipo
Soluciones y reactivos
 Esterilizar el Una vez
medio de cultivo esterilizado el
a 15 lb, 121°C medio de
durante 15 cultivo dejarlo
minutos. enfriar a 50°C
aprox.

Preparar la muestra
de suelo y
diluciones, e
inocular cada caja

UFC se debe considerar la dilución con que se inoculó la caja, la

cantidad de inóculo (0.1 ml) y la humedad de la muestra.
1) Contar sólo aquellas cajas (diluciones) que contengan de 30 a 300
colonias.
2) Con la siguiente ecuación calcular las UFC/g s.s.

UFC/g s.s. = (NC * 1/FD * 1/ V) / (P * FH).

Donde:
UFC/ g s. s. = unidades formadoras de colonias / g de suelo seco.
NC = número de colonias en una caja.
FD = factor de dilución que corresponde a la dilución de donde se tomó
la muestra con la que se inocula la caja (10-2 a 10-10).
V= volumen inoculado en la caja = 0.1 ml.
P = peso de la muestra húmeda = 1 g.
FH = factor de corrección de humedad (1-(%humedad/100)).
Hongos totales por dilución en placa
Introducción
Material y equipo
Reactivos y medios de cultivo
Procedimiento
 Calculos
1) Contar sólo aquellas cajas (diluciones) que contengan de 30 a
300 colonias.

2) Con la siguiente ecuación calcular las UFC/g s.s. UFC/g s.s. = (NC
* 1/FD * 1/ V) / (P * FH).

Donde:
UFC/ g s. s. = unidades formadoras de colonias / g de suelo seco.
NC = número de colonias en una caja.
FD = factor de dilución que corresponde a la dilución de donde se
tomó la muestra con la que se inocula la caja (10-2 a 10-10).
V= volumen inoculado en la caja = 0.1 ml.
P = peso de la muestra húmeda = 1 g.
FH = factor de corrección de humedad (1-(%humedad/100)).
Método de NMP para la cuantificación de
microorganismos anaerobios en suelos
La técnica del numero mas probable es muy adecuado para determinar
bacterias anaerobias, porque permite mantener un ambiente anaerobio
dentro de los tubos, sin necesitar de sistemas anaerobios más complejos
como cámaras o jarras anaerobias.

McCrady en Consiste en la estimación del

Para es timar el número N° de m.o viables a partir de
de m.o en muestras de
1915 diluciones sucesivas (1/10)
alimentos y aguas partiendo de 1g de suelo o
sedimento en base húmedo o
1ml de agua.
Determinación de m.o
aerobios y anaerobios en
Se asume que al menos un m.o
lodos , sedimentos marinos
generara crecimiento. Se inoculan 3 o mas tubos
y suelos contaminados.
Produciendo respuesta con medio de cultivo con
positiva (turbidez, cambio de sustrato y aceptores de
color, producción de algún electrones especificos .
metabolismo especifico)
a) Preparacion de tubos con c) Preparación de tubos
medio de cultivo base con solución salina para
diluciones 1/10.

9 ml de
b) Adición de sustratos y • Agregar 8.5 g de NaCl
cultivo
aceptores de electrones. • 0.5 g de cisteína-HCl
base • 1.0 ml de solución de
resarzurina
Tubo Hungate En 1L de agua destilada
Se retirar el matraz de la
parrilla antes de que el nivel de Se agrega 0.4 ml
la solución llegue hasta la de KOH 1N ; la
marca, se enfria con N2 para tonalidad de la
Ajustar el pH a
mantener las condiciones solución se
7 a la solución
anóxicas. tornará de color
salina a
azul oscuro a
temperatura
guinda.
• Adicionar 9.0 ml de solución ambiente
fisiológica salina anóxica
• Tapar el tubo con el septo de hule
• Colocar la tapa de rosca horadada
• Esterilizar los tubos en autoclave
durante 20 minutos a 121°C a 15
lb/pulg2 de presión.
d) Inoculación.

Preparación del Mantener los tubos inoculados en

Inoculación.
inóculo. oscuridad

• Se utiliza como
inoculo las últimas
tres diluciones
preparadas
La temperatura y el tiempo de
incubación dependerá de las
condiciones de crecimiento
específicas de los
microorganismos por evaluar.

• Pesar 1 g de muestra de • Se adiciona 1 ml de la

suelo en base húmeda dilución correspondiente
• Adicionarla a un tubo con a cada uno de los tubos
9 ml de solución salina con 9 ml de medio de
estéril. cultivo por dilución.
e) Análisis de resultados, indicador de crecimiento
Ordenar resultados negativos
y positivos por dilución.
Corregir la cuenta de
microorganismos por la
humedad de la muestra
para obtener los
resultados en base seca.
Determinar, el número más probable
Multiplicar el número de
de microorganismos, empleando las
microorganismos por la dilución
tablas de valores reportadas por
más baja inoculada.
(NACE, 1990).
• NMP/g suelo húmedo = número
NMP/g suelo húmedo = Vt * FD.
más probable de microorganismos
por g de suelo húmedo.
• Vt = valor de tablas (NACE, 1990).
• FD = factor de la primera dilución
NMP/g suelo seco = NMP x (100/(100-h)).
h = humedad del suelo con
respecto al peso húmedo
(%).
 Ejemplo con tres diluciones y tres réplicas por dilución:

4 3
Dilucion 10 10 10 8
Respuesta +++ +-+ --+
Valor 3 2 1

• Buscar el valor de tablas: 3, 2, 1 = 15

• Multiplicar por la dilución más baja:

NMP/g de suelo húmedo = 15 x 104

• Suponiendo una humedad de 30%:

NMP/g de suelo (base seca) = 21 x 104.
BACTERIAS FERMENTATIVAS
La cuantificación se basa en el crecimiento específico de bacterias fermentativas de muestras de
suelo, en un medio de cultivo anaerobio utilizando glucosa como única fuente de carbono y aceptor
de electrones. La cuantificación se realiza por el método de número más probable (NMP), utilizando
como indicador positivo el cambio del color del medio de cultivo de azul a transparente.
 A) Adición de sustratos y aceptores de electrones.

1. Indicador azul de Medio de cultivo

Adicionar 1ml de la
bromtimol base
solución por cada
litro de medio
preparado.

3.
2. La fuente de
carbono se
adiciona a los
tubos con 9ml de
medio de cultivo
base y azul de
bromito
B) Condiciones de cultivo.

C) Análisis de resultados, indicativo de fermentación.

El indicador azul de bromotimol, presente en el medio, funciona como un indicador de acidez;
varía a incoloro cuando el medio se acidifica como resultado de la presencia de ácidos orgánicos,
producidos por el metabolismo fermentativo.

Motivo por el que se realiza el estudio

Este método es aplicable para el cultivo y cuantificación de bacterias anaerobias fermentativas,

provenientes de muestras de suelo por la técnica NMP.
Bacterias anaerobias sulfato reductoras
Introducción
Este método se basa en el
cultivo de bacterias sulfato
reductoras presentes en
muestras de suelo, en un
medio de cultivo anaerobio
utilizando acetato como
fuente de carbono y sulfato de
sodio como aceptor de
electrones.
Procedimiento
El procedimiento comprende la
Soluciones y reactivos
adición de sustratos y aceptores de
1. Agua destilada electrones a tubos con medio de
anoxica. cultivo base anaerobio, previamente
2. Acetato de sodio preparados.
3. Sulfato de sodio
4. Cloruro ferroso
El tipo de sustratos y aceptores
adicionados dependerán del grupo de
microorganismos que se está
evaluando
A) Adición de sustratos y aceptores de electrones.

Agregar, con una jeringa hipodérmica a cada

tubo con 9 ml medio de cultivo base anaerobio.

0.2 ml de la solución estéril de acetato de sodio

0.2 ml de solución de sulfato de sodio

y 0.2 ml de cloruro férrico.

Todo se realiza bajo condiciones estériles y

anóxicas.
B) Condiciones de cultivo.
Mantener los tubos inoculados a una temperatura controlada de 30°C durante 30 días.

C) Análisis de resultados, indicativo de sulfato reducción.

Al término del tiempo de incubación determinar

los tubos positivos por la formación de un
precipitado negro en el medio de cultivo y
calcular el número de bacterias.
1) Ordenar los resultados negativos y positivos por dilución.

2) Determinar, de acuerdo con el número de tubos positivos en cada

dilución, el número más probable de microorganismos, empleando las
tablas de valores reportadas por (NACE, 1990).
3) De acuerdo con estas tablas, multiplicar el número de microorganismos
por la dilución más baja inoculada.
Interpretación
NMP/g suelo húmedo = Vt * FD. Dependiendo de las
respuestas obtenidas se
NMP/g suelo húmedo = número más probable de microorganismos por g utiliza el siguiente
de suelo húmedo. procedimiento para
Vt = valor de tablas (NACE, 1990). calcular el número de
FD = factor de la primera dilución. microorganismos más
probables por gramo de
suelo (base seca):
4) Corregir la cuenta de microorganismos por la humedad de la muestra
para obtener los resultados en base seca.

NMP/g suelo seco = NMP x (100/(100-h)).

h = humedad del suelo con respecto al peso húmedo (%).