Luminicencia Molecular

ANÀLISI INSTRUMENTAL AVANÇAT
1
Unidad docente 7
7. Luminescència molecular
Luminescència molecular. Fonaments de la luminescència: Fluorimetria i

fosforimetria. Espectres d’excitació i d’emissió. Variables que afecten a la
luminescència. Relacions quantitatives. Instrumentació. Aplicacions.
Quimioluminescència.
2
INTRODUCCIÓN LUMINISCENCIA MOLECULAR
En esta unidad se tratarán tres tipos de métodos ópticos , relacionados entre sí:
Fluorescencia molecular Se tratan de técnicas de emisión molecular

Fosforescencia molecular
Quimioluminiscencia Luminiscencia molecular: Fenómeno en que las moléculas
son excitadas dando lugar a especies que presentan un
espectro de emisión.
Se puede utilizar esta información para realizar análisis
(cualitativo y cuantitativos) dando lugar a los métodos
luminiscentes.
La excitación de la molécula puede ocurrir de diferentes formas:
1. FOTOLUMINISCENCIA. Excitación por absorción de fotones

A. FLUORESCENCIA. En las transiciones electrónicas no hay cambio del spin del electrón
(fenómeno rápido, t menor 10-5 s)
B. FOSFORESCENCIA. En las transiciones electrónicas hay cambio del spin del electrón
(fenómeno lento, 10-5 s <t< 1s)
2. QUIMIOLUMINISCENCIA. La molécula excitada se forma durante una reacción química.
En algunos casos, el analito se mide por su efecto inhibidor de quimioluminiscencia.
3
EMISIÓN de la radiación Electromagnética
Quimioluminiscencia: La muestra se excita con la

aplicación de energía química. En estos procesos no
participa energía radiante, por tanto son procesos no
radiantes. La energía incidente P0 no radiante puede
ser absorbida por el analito, lo que produce un haz de
energía radiante emitida, PE 4
EMISIÓN de la radiación Electromagnética
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La medida de la intensidad de emisión permite determinar cuantitativamente analitos a niveles de
concentracion traza.
Ventajas luminiscencia vs absorción molecular
1. BAJOS LIMITES DE DETECCION (TRES ORDENES DE MAGNITUD FRENTE A LOS METODOS DE

ABSORCION (ppb FRENTE A ppm)
2. ELEVADO INTERVALO LINEAL DE TRABAJO
3. MAYOR SELECTIVIDAD
DESVENTAJAS:
NO TODOS LOS ANALITOS PRESENTAN ESTE TIPO DE FENOMENO
FLUORESCENCIA FLUORESCENCIA
6
FUNDAMENTO LUMINISCENCIA MOLECULAR
Se da en sistemas químicos sólidos, líquidos o gaseosos.
Tras su interacción con radiación electromagnética, los átomos o

moléculas se excitan a niveles electrónicos de energía superior.
Después de un tiempo, vuelven al estado fundamental mediante la

emisión de una nueva radiación
electromagnética.
Para átomos, la radiación emitida usualmente tiene la

misma longitud de onda que la absorbida.
FLUORESCENCIA DE RESONANCIA
Para moléculas, la radiación emitida tiene una longitud de onda
normalmente superior.
DESPLAZAMIENTO DE STOKES
El tiempo de vida de la especie excitada determina si el

proceso de emisión será por
fluorescencia (tiempo de vida corto)
fosforescencia (tiempo de vida largo).
7
Para comprender la diferencia entre los dos fenómenos fotoluminiscentes se requiere una revisión del espín
del electrón y de los estados excitados singulete/triplete
Mayoría de las moléculas no tienen electrones

desapareados: Son diamagnéticas
Los radicales libres presentan electrones desapareados:

Son paramagnéticas
Estados excitados singulete/triplete
UNA MOLECULA ES PARAMAGNETICA EN

EL ESTADO TRIPLETE Y DIAMAGNETICA
EN EL ESTADO SINGULETE
8
Características de los estados excitados singulete/triplete
Estados excitados singulete/triplete
1.- Una molécula es paramagnética en el estado triplete y diamagnética en el estado singulete

2.- El estado triplete excitado es de menor energía que el estado singulete excitado.
3.- Una transición singulete a triplete es significativamente menos probable que una transición singulete-singulete,
ya que supone un cambio electrónico
COMO CONSECUENCIA
- Tiempo de vida triplete excitado 10-4 s a varios segundos.
- Tiempo de vida singulete excitado 10-8 s a 10-5 s
4.- La probabilidad de una transición inducida por radiación de una molécula en el estado fundamental a un estado
triplete excitado es baja.
5.- Los picos de absorción debidos a este proceso serán de baja intensidad (varios ordenes de magnitud) frente a
una transición singulete- singulete).
6.- La fluorescencia de moléculas implica una transición singulete excitado- singulete fundamental. Más probable
7.- La fosforescencia molecular implica transición de un estado triplete excitado- singulete fundamental. Menos
probable.
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Rendimiento cuántico depende de: •ESTRUCTURA MOLECULAR

es: •ENTORNO/MEDIO
El rendimiento quántico depende de

los procesos de desactivación
predominantes.
Radiantes No radiantes
Provocan fluorescencia/fosforescencia
a. fluorescencia kf b. conversión interna kci
c. conversión externa. kce
d. disociación kd
e. predisociación kpd
f. cruzamiento entre sistemas kces
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Después de un tiempo, vuelven al estado fundamental mediante la

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