Identication of TRIM22 as a progesteroneresponsive gene in Ishikawa endometrial cancer

cells
Mayuko Saito-Kanatania

Alumna: Daniela Gonzlez

Biologa Molecular

Introduccin
Progesterona (P4), es una hormona femenina secretada por el cuerpo lteo en el
ovario. Uno de los roles importantes es la inhibicin de la proliferacin del cncer
endometial y endometrosis.
P4 ejerce su accin a travs del receptor de P4 (PR), este es parte de la superfamilia
de receptores en el ncleo, el cual entra P4 al citoplasma y forma un complejo donde
este complejo se une al elemento respuesta progesterona (PRE) en el DNA genmico
y regula la transcripcin de genes.
El Gen receptor de progesterona (PGN) es traducido y produce dos isoformas PR-A
y PR-B, donde PR-A produce anomalas reproductivas en ratones Knockout (KO).

Objetivos

Identificacin de un grupo de genes que responde a P4 en clulas

Ishikawa que expresan PR-A (clulas derivadas de cncer
endometrial humano).

Identificacin por la tcnica de anlisis cDNA microarray del gen

TRIM22 para verificar la regulacin por PR-A (Los resultados son
validados por qRT-PCR).

Caracterizacin de la regin del promotor que contiene PRE

acompaado de la regin 5 de TRIM22.

Mtodos

Cultivos Celular (condiciones)

Clulas Ishikawa y T47D cultivadas a 37C, atmosfera 5% CO2

Medio de Cultivo DMEM/F12 fenol rojo: 10% FBS, 100U/mL Penicilina G,

100U/mL Sulfato de Estreptomicina.

Clulas Ishikawa generadas expresan FLAG-PR-A

-Cultivo cells Ishikawa PR negativo fueron transfectadas con vector

pcDNA3 (Ishikawa vector #1 y #8)
-Transfectadas con FLAG-PR-A cDNA fueron seleccionadas con G418
(Ishikawa PR-A #15 Y #23 expresando PR-A)
La expresin exgena FLAG-PR-A fueron validadas con qRT-PCR y W. Blott

Mtodos

cDNA fue cuantificado por qRT-PCR (10min. a 50C, despus 10

min. 94C, siguiendo por 40 ciclos de 15 seg. A 94C y 1min. a
60C).

Inmunoprecipitacin

Western Blott

Analisis Microarray

Inmunoprecipitacin Cromatina (ChIP)

EMSA

Resultados

Fig.1. (D) This Venn diagram

demonstrates the number of genes that
were upregulated by treatment with P4.
Fig.1. Characterization of Ishikawa
cells stably expressing PR-A.

Fig.2. Validation of P4-responsiveness of gene candidates identied by microarray analysis Ishikawa

cells stably expressing PR-A were treated with P4. The amounts of mRNA produced were analyzed
by qRT-PCR

Resultados

Fig.3. y 4.(A) TRIM22 is a

progesterone-responsive gene

Resultados

Fig. 4. Reporter assay demonstrates

enhancement of the transcriptional
activity of TRIM22 via PR.

Resultados

Fig.5. (A) y (B) Association of PR with the

TRIM22 PRE following P4 treatment.

Resultados

Fig.5. (C) y (D) Binding properties of a

potential TRIM22 PRE by using EMSA