Ensayos de funcionalidad

Equipo 11
Daryne Berenice Esquivel Arevalo
Isaias Gutierrez Leal

 Los sistemas de tipificacin molecular constituyen una de

aportaciones microbiolgicas que ms difusin han tenido en
ltimos aos. Estos sistemas comprenden una gran variedad
tcnicas que tienen como objeto comparar la composicin de
cidos nucleicos de dos o ms microorganismos.

las
los
de
los

 A la vez, deben ser tcnicas capaces de diferenciar aislamientos

no relacionados, con independencia de su pertenencia a la misma
especie microbiolgica o taxn. Con anterioridad estos estudios se
basaban en las caractersticas fenotpicas de los microorganismos
(propiedades antignicas, metablicas o de resistencia
antibitica).

 La aplicacin de tcnicas y marcadores de epidemiologa

molecular es indispensable en el estudio de la infeccin
nosocomial, sobre todo en hospitales en los que se dispone de
unidades de vigilancia intensiva, neonatologa, quemados,
hematologa u oncologa, en donde ingresan pacientes susceptibles
de adquirir infecciones graves intrahospitalarias.

Marcadores genticos
Los marcadores genticos son un fragmento de ADN que tiene una
ubicacin especifica en un cromosoma el cual es un cuerpo en
donde se organiza la cromatina dentro del ncleo celular , a estos
fragmentos se les puede buscar la herencia , y no necesariamente
este fragmento tiene que tener una funcin especifica. Estos
"rastreadores" estn en lugares especficos del genoma, estos se
heredan y las caractersticas de inters seguirn unidas a estos
marcadores, estos indican la presencia de una caracterstica
deseada.

CAT: Chloramphenicol acetyl transferanse

Chloramphenicol acetyltransferase (CAT) debido al gen CAT, es una
enzima bacteriolgica, que desintoxica el antibitico cloranfenicol y
es responsable de la resistencia de este frmaco en las bacterias.
Esta enzima se une covalentemente un grupo acetilo de la acetilCoA al cloranfenicol, lo que impide la unin de cloranfenicol a
ribosomas. Un residuo de histidina, que se encuentra en la seccin
C-terminal de la enzima, juega un papel central en su mecanismo
cataltico.

Mecanismos de accin
El cloranfenicol se une a la subunidad 50s bloqueando las
funciones principales como el de Ptasa (Peptidil transferasa)
causando una traduccin imprecisa.

Cloranfenicol
El cloranfenicol es un antibitico clsico de amplio
espectro producido por diversas especies del genero
Streptomyces

 El cloranfenicol impide el ensamblaje de los aminocil-ARNt que

transportan los aminocidos al ribosoma inhibiendo el enlace
peptdico.

Resistencia CAT
Consiste en la acetilacin de los grupos hidroxilo presente en el
propanodiol a travs de la enzima cloranfenicol acetil transferasa
(CAT).Por la modificacin de uno de los grupos hidroxilo a travs
de CAT. La enzima realiza
3-O-acetilacin en el grupo 3Hidroxilo produciendo 3-O-acetil-cm el cual se une dbilmente a
los ribosomas y no acta como antibitico.

Ensayo CAT
El ensayo CAT es til como procedimiento general aplicable en
situaciones en las que se pretende estudiar los factores que
influyen en la actividad de un promotor.
Se puede emplear para analizar la actividad de cualquier promotor
eucaritico.
La actividad se mide por la capacidad de un extracto celular para
acetilar cloranfenicol marcado radiactivamente.

 Se coloca en un plsmido la secuencia codificadora de la enzima

CAT bajo el control del promotor.