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Produciendo seres con caractersticas nuevas y mejores, con la finalidad de que se incorpore de manera estable, para que pueda heredarse.
Los organismos obtenidos se llaman organismos modificados genticamente u organismos transgnicos.
1980: Gordon y Ruddle obtienen los primeros ratones transgnicos por microinyeccin.
Organismos cuyo material gentico ha sido modificado, utilizando diversas tcnicas de modificacin gentica, confirindoles caractersticas nuevas y mejores o para que pierdan alguna funcin.
Los mtodos o tcnicas ms utilizados son: DNA recombinante, usando vectores. Microinyeccion, macroinyeccion, microencapsulacin. Hibridacin
Gafo J.; Aspectos cientficos, jurdicos y ticos de los transgnicos. Madrid: Universidad Pontificia Comillas, SAL TERRAE.
Los organismos transgnicos, son organismos genticamente modificados a los que se les transfiere un transgen, tienen la capacidad de producir protenas que no estn codificados naturalmente en su genoma o se inserta un gen con un promotor que permite expresar la protena.
La forma ms efectiva para conocer la funcin de una protena es eliminar su funcin biolgica del organismo.
En stos animales se altera el gen de una protena para que no se exprese, o si se expresa, que no sea funcional.
Son fundamentales para que un organismo funcione adecuadamente, ya que un cambio en la estructura, funcin o cantidad de alguna de ellas, se ve reflejado en el funcionamiento general de un organismo.
El ratn es el animal ms utilizado, debido a su tamao, fcil manejo, ciclo reproductivo corto y gran tamao de camada. Es el segundo animal ms estudiado genticamente. Se cuenta con una gran cantidad de genotecas, sondas y anticuerpos.
Se han modificado a los animales para que crezcan ms rpido, desarrollen menos grasa, metabolicen los alimentos de una forma ms eficaz y resistan las enfermedades.
Deben tener la capacidad de producir grandes cantidades, activas e idnticas de stas. Pueden sintetizarse en fluidos biolgicos, como sangre, orina, liquido seminal, saliva y leche.
Tambin conocidos como genes exgenos o forneos Gen que ha sido insertado en un genoma o vector gentico; generalmente manipulados por ingeniera gentica .
Biologa Molecular, Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud; Salazar Montes Adriana, Sandoval Rodrguez Ana, Juan Armendriz Borunda; McGraw-Hill Education; 2013; Animales Transgnicos y clonacin; pginas: 268-270.
Son diseados en las regiones codificantes y promotoras que son funcionales en la clula u organismo en donde va a introducirse
Biologa Molecular, Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud; Salazar Montes Adriana, Sandoval Rodrguez Ana, Juan Armendriz Borunda; McGraw-Hill Education; 2013; Animales Transgnicos y clonacin; pginas: 268-270.
Promotor Viral o animal y una regin codificante proveniente de una clula eucaritica.
Biologa Molecular, Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud; Salazar Montes Adriana, Sandoval Rodrguez Ana, Juan Armendriz Borunda; McGraw-Hill Education; 2013; Animales Transgnicos y clonacin; pginas: 268-270.
Conocer con precisin en qu secuencia promotora se controlar la expresin del transgen , cual ser la secuencia especfica que codificar para la protena deseada, y qu secuencia de poliadenilacin contendr es de gran importancia para crear un transgn.
Biologa Molecular, Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud; Salazar Montes Adriana, Sandoval Rodrguez Ana, Juan Armendriz Borunda; McGraw-Hill Education; 2013; Animales Transgnicos y clonacin; pginas: 268-270.
Organismos modificados genticamente u organismos transgnicos: Son animales que han sido manipulados genticamente , los cuales tienen alguna caracterstica nueva y mejor, o bien pierden alguna funcin especfica.
Protena fluorescente GFP
http://imperiodelaciencia.wordpress.com/2011/11/13/vectoresmoleculares-jugando-con-los-genes/
Se altera el gen de una protena particular con la finalidad de que no se exprese o que al expresarse se produzca una molcula no funcional.
Finalidades: Conocer la funcin biolgica del organismo y analizar el efecto generado. Obtener fenotipos similares a los de las enfermedades humanas.
http://speakingofresearch.com/2011/11/03/predictions-and-animal-modelsof-human-disease/
Clulas embrionarias (ES) con el gen defectuoso se inyectan en blastocitos y stos se implantan en una hembra de ratn seudopreada los animales quimricos resultantes portarn el gen mutado en diferentes tejidos de forma aleatoria, en funcin del destino de las clulas ES mutadas en el embrin.
http://www.reumatologiaclinica.org/es/aportacion-los-modelosanimales-al/articulo/13117212/
Gen de la leptina (gen ob): Este ratn no expresa esta protena funcional que participa en la va de inhibicin del apetito por lo que se convierte en un ratn obeso.
UTILIDAD A NIVEL CLNICO Se utiliza para predecir el desarrollo de una enfermedad, la confirmacin de diagnsticos o la eleccin de un tratamiento.
Biologa Molecular, Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud; Salazar Montes Adriana, Sandoval Rodrguez Ana, Juan Armendriz Borunda; McGraw-Hill Education; 2013; Animales Transgnicos y clonacin; pginas: 268-270.
Son aquellos a los que se les ha insertado un gen con un promotor que permite expresar la protena cuando no se lleva a cabo de forma natural.
Microinyeccin de un gen clonado en el proncleo masculino de vulos fecundados. Un nmero variable de copias del transgen se insertar en el genoma de estos vulos, los cuales darn lugar a cras transgnicas tras su implantacin en el oviducto de hembras de ratn "seudopreadas"
http://www.reumatologiaclinica.org/es/aportacion-los-modelosanimales-al/articulo/13117212/
Es de suma importancia saber que el gen de inters se ha incorporado al material gentico del animal.
Las ventajas que tiene la utilizacin de este mtodo es su sencillez, rapidez y no es muy costosa. Cabe destacar que los primers que flanquean el fragmento deben ser especficos para el transgen.
1. El ADN genmico que se desea analizar se corta con enzimas de restriccin para generar fragmentos de diferentes tamaos. 2. Los fragmentos se separan por tamao mediante electroforesis. 3. Los fragmentos se transfieren a una membrana de nitrocelulosa o nailon. 4. Para que la sonda hibride, el ADN de doble cadena debe desnaturalizarse en hebras sencillas y fijarse a la membrana por accin de la luz ultravioleta.
5. La sonda con secuencia complementaria a la del gen que se quiere localizar, se marca radioactivamente o con fluorocromos y se pone a hibridar con fragmentos de ADN fijados en la membrana. 6. Despus de la hibridacin y de los lavados, los fragmentos se detectan por auto radiografa o mediante fluorescencia , si el gen se ha integrado al genoma del transgnico que se esta creando el anlisis de la marca ser positivo.
1. El ARN genmico que se desea analizar se corta con enzimas de restriccin para generar fragmentos de diferentes tamaos. 2. Los fragmentos se separan por tamao mediante electroforesis. 3. Los fragmentos se transfieren a una membrana de nitrocelulosa o nailon.
4. Para que la sonda hibride, el ARN de doble cadena debe desnaturalizarse en hebras sencillas y fijarse a la membrana por accin de la luz ultravioleta.
5. La sonda con secuencia complementaria a la del gen que se quiere localizar, se marca radioactivamente o con fluorocromos y se pone a hibridar con fragmentos de ARN fijados en la membrana. 6. Despus de la hibridacin y de los lavados, los fragmentos se detectan por auto radiografa o mediante fluorescencia , si el gen se ha integrado al genoma del transgnico que se esta creando el anlisis de la marca ser positivo. Detecta especficamente RNAm.
Se utiliza una retrotranscriptasa inversa para la formacin de un ADN. Despus se lleva a cabo el PCR con primers especficos para el transgen. Por ultimo se lleva a cabo el anlisis del fragmento amplificado mediante electroforesis de gel de agarosa.
La protena transgnica se separa de la mezcla proteica celular mediante la tcnica de electroforesis en gel de poliacrilamida. Las protenas separadas se transfieren a una membrana de nitrocelulosa. Posteriormente se agrega un anticuerpo especifico para la protena transgnica . La protena de inters se detecta por autorradiografa o fluorescencia.
Se basa en la reaccin antgeno- anticuerpo , entre un anticuerpo especifico contra la protena que genera el transgen unido a un soporte solido, casi siempre un pozo de una placa con 96 pozos.
Al aadir la mezcla proteica, el anticuerpo reconoce la protena de inters y se forma un metabolito detectable que genera un cambio de color. Este producto indica de manera indirecta la presencia de la protena.