Terapia Gnica

Vectores virales y no virales

Terapia gnica
La TERAPIA GNICA es un tratamiento
gentico que incluye la modificacin gentica directa de clulas para lograr un objetivo teraputico

La terapia gnica pretende curar enfermedades hereditarias (que, en la mayora de los casos, se deben a genes defectuosos) mediante la introduccin de genes sanos.

Es aplicable tambin al tratamiento de enfermedades actualmente incurables, como cnceres, determinadas patologas infecciosas (hepatitis, sida), cardiovasculares (hipercolesterolemia y aterosclerosis), enfermedades neurodegenerativas (enfermedades de Parkinson y de Alzheimer) o enfermedades crnicas (artritis reumatoide).

Ms de 5000 enfermedades humanas se han atribuido a factores genticos.

En terapia gnica se utilizan dos grandes estrategias actualmente: * Ex vivo. Comprende transferencia de genes clonados al interior de la clulas desarrolladas en cultivo. Este mtodo se emplea en clulas que son accesibles para extraccin inicial y que pueden inducirse para inyectarse y sobrevivir por un tiempo prolongado despus de la restitucin

Eje: clulas hematopoyticas y clulas de la piel

 * In vivo. Unica opcion en tejidos en los que no es posible cultivar celulas. Se trata de administrar el gen corrector al paciente en lugar de hacerlo a clulas en cultivo. Se emplea en clulas difcil de extraer e implantar nuevamente, como sucede en la mucoviscidosis.

Eje: clulas cerebrales

Los virus son los vectores utilizados con ms frecuencia para la terapia gnica
Los vectores para transferencia gnica empleados de manera mas regular son los virus de mamferos por su gran eficiencia de transduccin a clulas humanas

Terapia gnica (vectores)

Vectores no virales

DNA Desnudo
La inyeccin directa de DNA puede llevarse pero solo tendr el DNA limitado en algunas clulas.El gen clonado en un plsmido que puede ser amplificado en bacterias, purificado y luego administrado, como DNA desnudo permanece siendo el sistema ms simple. Este mtodo de entrega de DNA es, sin embargo, altamente ineficiente en el transporte del gen de la superficie de la clula al ncleo de la clula blanco.

Electroporacin
Primeramente se obtienen las clulas a tratar a travs de biopsia (comnmente), se procede a su electroporacin in vitro, cultivo en el laboratorio y finalmente introducidas al organismo.

Biobalstica
Los sistemas de transferencia balstica de partculas o gene guns (pistolas de genes), principalmente desarrollado para transferencia de DNA a clulas vegetales, han sido evaluadas como un mtodo de mejora de transferencia de DNA, demostrndose que es perfectamente aplicable a las clulas animales (tecnologa que ha sido usada con xito para transferir genes a plantas y peces).

 El principio se basa en acelerar pequeas partculas de oro o tungsteno sobra las que se adhiere la secuencia de DNA para la cual no hay un lmite de tamao siendo disparadas en el tejido por una pistola de presin de helio o a travs de una descarga electrnica. El tejido blanco necesita estar expuesto, as que la piel y las heridas son blancos atractivos.

Liposoma
En algunos casos, las copias de DNA del gen pueden ser empaquetadas en liposomas, paquetes de lpidos que rodean al DNA y ayudan a llevarlo dentro de la clula, cuya ventaja es que permiten la transferencia de una gran cantidad de genes de un gran tamao que son relativamente seguros, fciles de producir y que no generan respuesta inmune.

Lipoplex
Estos lpidos que se acomplejan al DNA, pueden sintetizarse con una carga neutral, negativa o positiva. Sin embargo, la carga positiva o lpidos catinicos han mostrado mayor eficiencia en la transferencia de genes ya que pueden acomplejarse a la carga negativa del DNA y mantener una carga positiva para facilitar la unin a la superficie negativa de la clula. Un complejo lpidos catinicos de cidos nuclicos se llamado lipoplex.

Complejo Liposoma DNA

Distrofina

Vectores virales

Qu es un virus??
Partculas compuestas en su mayora por protenas que tienen como nico fin replicarse usando la maquinaria celular. Hay dos tipos de clasificaciones: Baltimore y la de ICTV (Comit Internacional de taxonoma de Virus)

Vectores Virales
Los vectores virales aprovechan las estrategias desarrolladas evolutivamente por los virus para poder propagarse en las clulas infectadas. Son los ms utilizados, debido a la eficiencia de la transferencia de genes, en comparacin con los vectores no virales. Los retrovirus, los adenovirus, los virus asociados a adenovirus (VAA) y los virus de herpes simplex.

Retrovirus
Un sistema retroviral para terapia gentica necesita de dos componentes: el vector de expresin, el cual lleva el gen teraputico y la clula empaquetadora. El vector retroviral est desprovisto de genes virales, dejando espacio para llevar el gen teraputico.

 Una de las preocupaciones en el desarrollo inicial de los vectores retrovirales fue la posibilidad de insercin del ADN retroviral cerca de genes que controlan la divisin celular (oncogenes), y as hacer que la clula se vuelva cancerosa.

Adenovirus
Los adenovirus son virus de ADN de doble hebra, que producen infecciones del tracto respiratorio, y tienen tropismo por los epitelios respiratorio, gastrointestinal, y de la crnea. Para construir los vectores de adenovirus se han eliminado los genes de las protenas tempranas E1a, E1b, E2 y E3, esenciales para la replicacin viral.

 El proceso de creacin de adenovectores consiste en la incersin del transgn en un pequeo plsmido lanzadera, de manera que el cassette de los transgenes puede ser extirpado con enzimas de restriccin. El cassette es transferido al plsmido vector del adenovirus, donde finalmente el vector y el cassette se unirn por una endonucleasa y posteriormente se inserta todo el material gentico en una lnea celular (llamada 293) para formar las partculas vricas, que dar como resultado el vector viral final para el uso teraputico. La lnea 293, es una lnea celular modificada para que constantemente est expresando protenas para la formacin del adenovirus.

Virus asociados a adenovirus (AAV)

Son naturalmente deficientes en replicacin, pues necesitan de la coinfeccin con adenovirus o virus de herpes simplex para iniciar el ciclo de replicacin viral. Genes Rep y Cap Genoma de no ms de 4.7 Kb

 nico virus con una unin especfica, dentro del DNA celular; cromosoma 19, regin anterior a q13.3. Distrofia Miotnica y Leucemia crnica de linfocitos B, mapean en q13.3

Herpes Virus Simplex (HSV)

Los virus del Herpes Simplex son virus de ADN de doble hebra, con tropismo por las clulas del sistema nervioso. Construccin parecida a adenovirus, se eliminan secuencias que codifican para la replicacin viral: ICPO, ICP4, ICP22 y ICP27. Genes de hasta 15 kb pueden ser transducidos por un vector de HSV.

 La segunda estrategia consiste en construir un "mini-HSV", con las mnimas secuencias necesarias para la formacin de la partcula viral. Requieren de algunas protenas para la formacin de la partcula viral y la infeccin de la neurona a travs de una clula empaquetadora.

APLICACIONES TERAPIA GNICA

Correcciones de un dficit gnico:

-ADA (Amino DesAminasa) -Mucoviscidos.

Cncer

-Melanomas malignos. -Tumores cerebro. -Cncer de pulmn. -Otros. -Hipercolesterolemia familiar - Induccin de angiogiognesis

Enfermedades cardiovasculares

Otras: SIDA.

ADA (adenosin deaminase)

Resumen (NCBI ;ENTREZ GEN) Este gen codifica una enzima que cataliza la hidrlisis de la adenosina en inosina. Varias mutaciones se han descrito para este gen y se han vinculado a las enfermedades humanas. La deficiencia de esta enzima provoca una forma de enfermedad de inmunodeficiencia combinada severa (SCID), en el que hay una disfuncin de los linfocitos B y T, con alteracin de la inmunidad celular y disminucin de la produccin de inmunoglobulinas, mientras que los niveles elevados de esta enzima ha sido asociada con anemia hemoltica ongnita . [proporcionados por RefSeq]
cromosoma: 20; Ubicacin: 20q12-q13.11

Cncer.
Estrategia del gen suicida (Knock-out).

Estrategias de activacin de las defensas inmunitarias naturales (IL-2)

http://revista.inmunologia.org/Upload/Articles/3/5/357.pdf

Melanomas malignos
Los Melanomas son tumores malignos que surgen a partir de clulas denominadas melanocitos. Estas clulas se originan en la cresta neural en el desarrollo embriolgico y migran hacia la piel, los ojos, el sistema nervioso central y hacia otras partes del organismo durante la vida fetal.

Tumor cerebral.
Un equipo de investigadores del Cedars Sinai Medical Center de Los ngeles, segn informa la revista Public Library of Science Medicine, ha logrado con xito ambos objetivos gracias a la combinacin de una terapia gentica y qumica.(13 Enero 2009 ).
inyeccin B
A

Activacin del sistema inmune Dos vas Masa tumoral

A B

Virus teraputicos

Dendrita de mdula sea Protena tipo citoquina

Gen suicida
ganciclovir

Respuesta inmune contra el cncer

HMGB1
Muerte

PROTOCOLOS DE TERAPIA GNICA APROBADOS POR EL RAC EN USA I. ENFERMEDADES HEREDITARIAS Enfermedad Enfisema pulmonar Fibrosis qustica Gen suministrado a -1-antitripsina CFTR Tejido diana Tracto respiratorio Tracto respiratorio Vector Liposomas Adenovirus AAV Liposomas Retrovirus Retrovirus

Hipercolesterolemia familiar Inmunodeficiencia combinada severa (SCID) ("nios burbuja")

Receptor LMW de lipoprotenas Adenosin desaminasa

Hepatocitos Linfocitos Clulas progenitoras hematopoyticas

II. ENFERMEDADES ADQUIRIDAS Enfermedad SIDA (infeccin por VIH) Gen suministrado Ribozimas ARN antisentido Anticuerpos Factor tumoral de angiognesis Genes supresores de tumores HTK-ganciclovir Factor de necrosis tumoral Interfern (gamma) Tejido diana Linfocitos Vector Retrovirus

Restenosis (Arterias perifricas) Cncer

Clulas endoteliales Pulmn, hgado Cerebro TILs Melanoma

Plsmidos Retrovirus, Adenovirus Retrovirus Retrovirus Retrovirus

http://www.uclm.es/profesorado/jjordan/pdf/review/12.pdf

GRACIAS!!!!!!!!