Gentica Bacteriana

Gentica
Ciencia que estudia la ADN
variabilidad hereditaria de un organismo. Unidad de Herencia: Gen - ADN Longitud de ADN se expresa en Kilopares de bases. Plsmidos: ADN c-c-c Transposones: contienen varios Kpb de ADN

 Los cidos nucleicos son macromolculas

compuestas de nucletidos unidos en forma covalente por medio de enlaces fosfodiester entre los carbonos de las posiciones 3 y 5 de dos residuos de azcares adyacentes, que conforman un esqueleto de azcares y fosfatos que es constante a lo largo de toda la macromolcula

El ADN como macromolcula, esta compuesto por 2 cadenas nucleotdicas o hebras antiparalelas, que se enlazan entre si conformando una doble hlice. Los enlaces entre las dos hebras de ADN estn dados por puentes de hidrgeno entre las purinas de una cadena con las pirimidinas de la otra. De esta forma, la A forma dos puentes de hidrgeno con la T , mientras que la C forma 3 puentes de hidrgeno con la G . A esto se le llama complementariedad de bases

 El cromosoma bacteriano, es suficientemente

largo como para formar varios lazos circulares,que como tales pueden a su vez superenrollarse,formando de esta manera una serie de dominios topolgicos independientes. la estructura del ADN modificando su superenrrollamiento. Estas enzimas que se denominan genricamente "topoisomerasas" , actan introduciendo o eliminando vueltas superhelicoidales, cumpliendo un importante rol en los procesos de replicacin y transcripcin del ADN.

Las bacterias poseen enzimas capaces de alterar

Plsmidos . Los plsmidos, son molculas circulares

de ADN de doble cadena que constituyen una unidad de replicacin independiente del cromosoma. Por esto pueden encontrarse ms de una copia del mismo plsmido dentro de la clula bacteriana. En general los plsmidos de mayor tamao, se encuentran en una o unas pocas copias, mientras que los mas pequeos pueden estar en hasta 100 copias por clula (plsmidos multicopia).

Genes Saltarines

Los elementos transponibles , son segmentos de ADN capaces de moverse desde una posicin a otra en el genoma, es decir transponerse o saltar desde un sitio determinado del genoma, escindindose del resto del ADN, hasta otro sitio distinto, integrndose. Pueden saltar del cromosoma a un plsmido y visceversa o a distintos sitios dentro de la misma molcula de ADN. Los elementos transponibles estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, tanto en virus, clulas procariotas y eucariotas. Existen 2 variedades de elementos transponibles: 1) Las secuencias de insercin (elementos IS) 2) Los transposones (Tn)

Los elementos IS , son segmentos de ADN relativamente pequeos, de aproximadamente 1 a 2 Kb que contiene la informacin gentica mnima, necesaria para la transposicin. Poseen secuencias especficas en ambos extremos del fragmento, que consisten en repeticiones invertidas una respecto a la otra.

Los Transposones
Los Tn son segmentos de ADN que adems de
portar la informacin necesaria para la transposicin, contienen genes extra, que pueden codificar para muy distintas propiedades fenotpicas, encontrndose entre las mas importantes desde el punto de vista clnico, la resistencia a antimicrobianos como ser el caso de la resistencia de alto nivel a la gentamicina encontrada en algunas cepas de Enterococcus sp.

Replicacin del ADN

El cromosoma
bacteriano, se replica a partir de un nico origen, que se mueve de forma lineal hasta completar la duplicacin total de la molcula, por lo que constituye un replicn.

El punto en el que el ADN se

est duplicando, se llama horquilla de replicacin . La replicacin puede ser unidireccional o bidireccional , segn se formen una o dos horquillas en el origen. Generalmente, los cromosomas bacterianos tienen replicacin bidireccional, mientras que algunos plsmidos pueden replicarse unidireccionalmente.

 La replicacin es

semiconservativa porque cada molcula de ADN posee una cadena del ADN original y una "nueva" lo cual resalta la importancia de la complementariedad de bases en la estructura del ADN (Fig. 3). Las enzimas encargadas de catalizar el proceso de replicacin, se denominan ADN polimerasas . En E. coli se conocen 3 ADN polimerasas distintas. La responsable de la mayor parte de los procesos de replicacin es la llamada polimerasa III, mientras que las polimerasas I y II cumplen fundamentalmente roles en la reparacin de rupturas o de errores en las molculas de ADN.

Colonias S Lisas, convexas y regulares. Forman ndulos hijos Formas mviles presentan flagelos. Desarrollan bien cpsula. Ms activos bioquimicamente. Se aislan en fases agudas de enfermedad. Se emplean en preparacin de vacunas y antgenos.

Disociaciones Bacterianas

Colonias R Rugosas, irregulares y planas. No forman ndulos con frecuencia. Suelen faltar sus flagelos. Ausencia de cpsulas. Poco activos bioquimicamente. Fase virulenta ausente. Se aislan de procesos crnicos. Resistentes a fagos. No se usan en vacunas ni antgenos.

Mutacin
Definicin: Cambio hereditario saltatorio, es la alteracin de un gen, una base, que altera una caracterstica fenotpica. La mutacin puede ocurrir en forma espontnea o ser inducida (agentes mutgenos). Tipos de Mutaciones: 1. M. Puntual: a) Transiciones: cambio entre bases iguales (purina purina). b) Transversiones: Cambio entre bases distintas (purina pirimidina)

2. Mutaciones por desplazamiento de la pauta (=fase o marco) de lectura ["frameshift"]. Se deben a: eliminacin de uno o un corto nmero de nucletidos; incorporacin de uno o un corto nmero de nucletidos. 3. Grandes delecciones (o borraduras). 4. Inversiones 5. Traslocaciones. 6. Duplicaciones en tndem 7. Mutaciones insercionales ocasionadas por elementos genticos transponibles.

Mutacin

 Bases moleculares de la Mutacin

UAC Codn de Tirosina

Mutaciones Puntuales

UAG CAC Codn histidina Protena incompleta Mutacin sin sentido Codn terminal

UAU Codn adicional

Protena defectuosa Mutacin Contrasentido

Protena normal Mutacin silenciosa

Agentes Mutgenos
AGENTES FSICOS RADIACIN UV Es el mutgeno fsico ms empleado en el laboratorio
para obtener mutaciones en las bacterias. Su efecto principal es originar dmeros de pirimidina intracatenarios (con creacin de una anillo ciclobutano entre dos Py consecutivas). Las proporciones de lesiones son las siguientes: 50% T-T 40% T-C 10% C-C Las mutaciones aparecen principalmente como consecuencia del mecanismo posreplicativo de reparacin propenso a error (o sea, el sistema SOS). Con menor frecuencia la luz UV ocasiona hidratacin de la C, lo que da origen a transiciones.

RAYOS X Y RADIACIONES IONIZANTES

Tienen mayor poder de penetracin que

los rayos UV, pero son de difcil manejo, por lo que se emplean poco en bacterias. Los rayos X ocasionan daos reparables por el sistema SOS. Las radiaciones ionizantes (p. ej., rayos g ) provocan labilizaciones en el ADN, que terminan en roturas en las hebras del ADN (por ataque al enlace fosfodister), que finalmente pueden conducir a delecciones .

AGENTES QUMICOS

ANLOGOS DE BASES Son sustancias con una estructura en anillo similar a las bases naturales de los cidos nucleicos, pero con propiedades qumicas diferentes. Como ejemplos tenemos: 5-bromouracilo (5-BrU) 2-aminopurina (2AP). Estas molculas entran a las clulas y son convertidas a los correspondientes "dNTP", de modo que su estructura les permite ser incorporados durante la replicacin del ADN. 1) El 5-BrU es anlogo de la T . Propicia transiciones T:A G:C debido a que experimenta frecuentes cambios tautomricos desde su forma ceto a su forma enol: BUceto:A BUenol:G

 La 2-AP es un anlogo de la A . Provoca

transiciones A:T C:G debido a sus frecuentes tautomerizaciones (APamino APimino). AGENTES DESAMINANTES O HIDROXILANTES Alteran las Pu o las Py, de modo que: causan errores en el emparejamiento, o bien labilizan las bases, de modo que stas espontneamente se modifican qumicamente con gran frecuencia.

1) cido nitroso: provoca una desaminacin oxidativa de A y C, lo que origina transiciones sobre C dU, que se empareja con la A. sobre A (6-aminopurina) hipoxantina (HX) (6-oxopurina), que en su forma ceto se empareja con la citosina. 2) Hidroxilamina (NH2OH): acta especficamente sobre la citosina, aadindole un hidroxilo a su grupo -NH2:

AGENTES ALQUILANTES Introducen radicales alqulicos en una cadena (los alquilantes monofuncionales) o en las dos cadenas (los bifuncionales) del ADN, produciendo efectos letales y mutagnicos. gas mostaza:actan tanto in vivo como in vitro. nitrosoguanidina (NTG), acta in vivo, ya que su efecto lo ejerce sobre la horquilla de replicacin del ADN.

SUSTANCIAS INTERCALANTES
Se introducen entre los pares de bases del ADN,
dando origen a prdida o ganancia de nucletidos (o sea, generan mutaciones de cambio de la pauta de lectura del mensaje gentico). Algunos ejemplos: Derivados de la acridina, como el naranja de acridina Bromuro de etidio Derivados de la flavina (como la proflavina).