(CO) DISEO DE UN FOTOBIORREACTOR TUBULAR PARA EL CULTIVO MASIVO AL EXTERIOR DE LA MICROALGA MARINA Nannochloropsis gaditana EN LA BAHA DE CDIZ Mantecn,

E; Unamunzaga, C; Caavate, J.P. Centro de Investigacin y Cultivo de Especies Marinas El Toruo, Junta de Andaluca, Apartado 16, 11500-El Puerto de Santa Mara (Cdiz), Espaa.

Resumen En este trabajo se presentan los resultados obtenidos en el cultivo de la microalga marina Nannochloropsis gaditana utilizando fotobiorreactores tubulares en la Baha de Cdiz. Se trata de fotobiorreactores diseados para alcanzar niveles de produccin de biomasa algal que permitan el abastecimiento en los criaderos de especies marinas. A partir de los cultivos realizados se evala la influencia de la variacin estacional de irradiancia y temperatura sobre el rendimiento del sistema. Para ello se efectu un seguimiento del crecimiento de la biomasa y del consumo de nutrientes. Por otro lado, factores que adquieren mayor importancia en los sistemas intensivos de produccin de fitoplancton, como el gasto de CO2, la evolucin de la alcalinidad del medio y los cambios en la concentracin de oxgeno disuelto han sido tambin evaluados. Los resultados obtenidos demuestran que el uso de estos sistemas representa un incremento aproximado de un orden de magnitud en la biomasa producida por unidad de volumen en comparacin con los sistemas convencionales de produccin en bolsa o tanque abierto. Justificacin Las estirpes de Nannochloropsis tienen una gran importancia en los criaderos de peces marinos, gracias a su valor nutricional (Reitan et al 1997) y la mejora de las condiciones de alimentacin en el medio de cultivo larvario (Naas et al 1992). Las tcnicas de produccin de estas microalgas han evolucionado hacia el desarrollo de fotobiorreactores intensivos con reducido paso de luz, (Richmond et al 1993), en los que es posible alcanzar elevada densidad celular. Sin embargo, hasta la fecha, en una zona de elevada iluminacin natural como la Baha de Cdiz no se han desarrollado estos mtodos, estando basada todava la produccin masiva de microalgas en el empleo de sistemas similares a los descritos por Lubin & Caavate (1987). Ante la conveniencia de disponer en la zona de nuevos sistemas de produccin de microalgas con bajo coste energtico, alta productividad y reducida presencia de protozoos y bacterias, los fotobiorreactores tubulares cerrados representan una buena opcin. Entre ellos existen muchas variantes de diseo, marcas y modelos sofisticados que, en muchos casos son costosos, delicados y complicados de utilizar. Teniendo en cuenta estas circunstancias, en este trabajo se ha diseado un sistema de cultivo sencillo, tanto en los materiales utilizados como en la operatividad del mismo. Material y Mtodos La especie cultivada fue la Eustigamatophyceae Nannochloropsis gaditana Lubin. Los fotobiorreactores se inocularon a partir de cultivos realizados en tubos de 50 L en cmara de algas. Se emple agua de mar filtrada y tratada con UV enriquecida con el medio f/2, con una concentracin de 1.5 mM de nitrato y 0.1 mM de fosfato. Para los cultivos al exterior el agua de mar se esteriliz con 10 ppm de hipoclorito sdico. La densidad celular se estim diariamente mediante el recuento de 4 rplicas en cmara hematocitomtrica Neubauer. El peso seco se obtuvo filtrando 10 mL de muestra de cultivo con filtros Whatman GF/C 1,2 m. La radiacin fotosintticamente activa (PAR 400-700 nm) se almacen cada 30 minutos con un registrador LICOR LI-1400 dotado de un sensor PAR LI-190A-50. El pH se midi en continuo con un electrodo de pH CRISON conectado a un controlador de pH CRISON pH-48, con el que se regul la inyeccin de CO2 en el sistema mediante una electrovlvula. El caudal de CO2 de 200 mL -1 fue ajustado con un medidor-totalizador digital msico Bronkhorst. Con este sistema, el pH se min mantuvo entre 7,7-8,0. La alcalinidad se determin mediante valoracin potenciomtrica con HCL 0,01 N. Los nutrientes (nitrato y fosfato) se analizaron diariamente y sus concentraciones se determinaron espectrofotomtricamente. La temperatura y la concentracin de oxigeno disuelto se registraron en continuo con intervalo de 30 minutos. Se dise un mdulo de dos circuitos tubulares horizontales de 60 m, fabricados con metacrilato trasparente de 70x64 mm de dimetro, ambos sumergidos en un bao de agua para amortiguar los cambios de temperatura. El cultivo de algas es recirculado por cada circuito con una bomba magntica, intercalndose en este un depsito para equilibrio de gases. La capacidad de los fototubos es de 190 l, 2 correspondindole una superficie de captacin de radiacin de 4,5 m . Contando con el tanque de equilibrado gaseoso, el volumen total de cada fotobiorreactor fue 322 L. Resultados y discusin Los cultivos de Nannochloropsis gaditana se llevaron a cabo en los meses de abril, mayo, junio, 6 -1 noviembre y diciembre. La densidad celular mxima alcanzada oscil entre 1.263 x 10 clulas mL (5 g -1 6 -1 -1 L ) en los meses de mayor irradiancia y temperatura, y 527 x 10 clulas mL (2.1 g L ) en los meses

mas fros. En la figura 1 se representan las curvas de crecimiento para verano e invierno. La radiacin -2 -1 PAR media para los cultivos de verano fue de 10 MJ m d , mientras que en los de invierno fue de 3 MJ -2 -1 m d . La temperatura del cultivo alcanza temperaturas elevadas tanto en verano como en invierno, teniendo mximas de 34,8 C en los cultivos de verano y mximas de 30,2 C en los cultivos de invierno. La elevada temperatura mxima de invierno se debe a la elevada captacin de energa del cultivo en das soleados, y al hecho de no haber usado el bao de refrigeracin. Las temperaturas mnimas son ms acusadas en los cultivos de invierno alcanzando mnimas de 4,9 C mientras que en verano la mnima es de 15,1 C. En los cultivos de invierno por tanto, la temperatura tarda varias horas en recuperar valores superiores a 20 C , mas adecuados para el crecimiento de esta especie (Figueroa et al 1996). Esta situacin crea una asincrona entre la temperatura ptima y las horas de mayor irradiancia, debido a lo cual no se aprovechan varias horas de luz. En este sentido, es necesario considerar la utilizacin de tcnicas que permitan en invierno evitar la prdida de calor del cultivo durante la noche. -1 -1 El consumo mximo de nitrgeno en el sistema fue de 84,14 mg L d con una tasa de incorporacin de N por unidad de biomasa producida del 20 %. La demanda de CO2 aumenta con el incremento de -1 biomasa hasta 240 mL L . Este aporte de carbono al medio incrementa la reserva de alcalinidad. Cuando el carbono inorgnico total alcanza un valor prximo a 12 mM disminuye la demanda de CO2 del cultivo, probablemente debido al mecanismo de incorporacin de bicarbonato que posee este alga (Huertas et al 1999). Durante las horas de luz la produccin de oxgeno es elevada, alcanzndose valores mximos de -1 -1 35 mg L en los cultivos de verano y 20 mg L en invierno. Durante la noche, debido a la respiracin de una biomasa densa, se consume el oxgeno, llegando a niveles de anoxia durante varias horas. De momento, no es posible precisar la influencia que esta gran fluctuacin en el nivel de oxigeno disuelto pueda tener sobre el cultivo de esta especie en este sistema. No obstante, a partir de los resultados obtenidos se puede deducir que la biomasa alcanzada con este tipo de fotobiorreactor es del orden de 12 veces superior a la conseguida con los sistemas tradicionales de produccin. La productividad volumtrica -1 -1 -1 -1 para los cultivos de verano fue de 0,13 g L d y de 0,06 g L d para los de invierno. Estos resultados -2 denotan una alta productividad en trminos de superficie fotosinttica, teniendo rendimientos de 5,8 g m -1 -2 -1 d para los cultivos de verano y 2,6 g m d para los de invierno.

1200 1000 800 600 400 200 0

12 16 20 24 28 32 0 4 8

Densidad celular (N x 10^6/mL)

Dia de cultivo
Figura 1. Crecimiento de Nannochloropsis gaditana cultivada en fotoreactores al exterior durante verano (trazo continuo) e invierno (trazo discontinuo).