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La nutricin celular comprende el conjunto de procesos mediante los cuales las clulas intercambian materia y energa con su medio. Los nutrientes se necesitan para i. Fines energticos (sobretodo en quimiotrofos) mantenimiento ii. Fines biosintticos (anabolismo, reacciones plsticas)
Medio de cultivo
2. Macronutrientes
4. Factores de crecimiento (vitaminas, bases pricas y pirimdicas,en extractos) 5. Agente solidificante (Agar 1.5%) Ajuste de pH Disolver y Esterilizar (15 lb/plg2, 15 min)
Formulacin de medios
La formulacin tiene que ver con los aspectos cualitativos y cuantitativos de los medios, es decir Cules y Cunto de cada componente medio? se agregarn al
Cules? Depender del tipo de metabolismo y necesidades nutricionales del microorganismo que se cultivar: auttrofo, hetertrofo, auxtrofo, mixtrofo
En general, la naturaleza y cantidad de los constituyentes de un medio estn determinadas por: 1. Composicin qumica de la biomasa microbiana 2. Rendimiento de crecimiento 3. Rendimiento de produccin de metabolitos 4. Disponibilidad y costo de sustratos Para calcular las cantidades a utilizar de los diversos componentes, se considerar la composicin de la biomasa del microorganismo de inters.
La frmula elemental de una bacteria es, aproximadamente C4H7O2N lo que supone que los componentes de las clulas son: Carbono que representa alrededor del 50% del peso seco, Oxgeno (32%), Nitrgeno (14%), Fsforo (3%), Azufre (aprox. 1%) adems de otros elementos traza entre los que se encuentran Fe, K, Mg, Mn, Co, Mo, Cu y Zn que no se conocen con exactitud.
En el caso de la levadura del pan (Saccharomyces cerevisiae) la frmula elemental ms concreta es: C3.72H6.11O1.95N0.61S0.017P0.035K0.056 esta composicin puede variar ligeramente en funcin de las condiciones de cultivo o de la fase de crecimiento. El conocimiento de la frmula elemental del microorganismo que se cultiva facilita la formulacin del medio de cultivo ms adecuado para el mismo.
El rendimiento de crecimiento significa que el Sustrato carbonado puede ser utilizado por los microorganismos para diferentes finalidades: 1. Biomasa 2. Energa 3. Metabolitos
El rendimiento (Y) se define como la relacin entre el PRODUCTO obtenido y el SUSTRATO consumido. Si lo que se produce es biomasa hablaremos de.. Rendimiento celular = Yx/s = X -S X= Biomasa producida [g Bm] -S= Sustrato consumido [g S] X= Biomasa S =Sustrato
Si la biomasa que se forma no es de importancia , sino que lo que importa es producir un producto del metabolismo (primario o secundario), entonces hablaremos de el rendimiento de produccin, que estar dado por:
Yp/s = p -S
p= Metabolito o Producto
S =Sustrato
Es necesario recordar la forma en que se hace la conversin de unidades Ejemplos 1. A cuantos km/h equivalen 50 m/seg? 2. A cuantos m3/s equivalen 2000 L/min? 3. Cuntos g de nitrgeno (N) hay en 20 g de biomasa (BM)? 1. 50 m X 1 km X 3600 seg = 180 km seg 1000 m 1h h 2. 2000 Lt X 1 m3 X 1 min = 0.03 m3 min 1000 Lt 60 seg seg 3. 20 g Bm X 10 g N* = 2.0 g N 100 g Bm * 10% = 10 g de N por cada 100 g de Bm EQUIVALENCIAS 1 km = 1000 m 1 h = 3600 seg 1 m3 = 1000 Lt 1 min = 60 seg 1 Kg = 1000 g
La formulacin tiene que ver con los aspectos cuantitativos de los medios, es decir debe establecer las concentraciones de cada componente a ser utilizada. Una primera aproximacin con respecto a las cantidades a utilizar de las diversas fuentes lo da el conocimiento de la composicin de biomasa del microorganismo de inters.
Composicin qumica de la biomasa bacteriana promedio C 50 % N 14 % P 3 %; S1% Tambin hay que considerar que el Sustrato (fuente de C) puede ser utilizado para: Biomasa-Energa-Metabolitos
Lo que determinar el rendimiento celular (Yx/s) o el de la produccin de metabolitos (Yp/s)
Un rendimiento (Y) se define como la relacin entre el PRODUCTO obtenido y el SUSTRATO consumido Rendimiento celular = Yx/s = X -S X= Biomasa producida [g Bm] -S= Sustrato consumido [g S] Si adems de biomasa (mos) se forma algn producto, el rendimiento de producto est dado por x= biomasa S =sustrato
Yp/s = p -S
Es necesario recordar la forma en que se hace la conversin de unidades Ejemplos 1. A cuantos km/h equivalen 50 m/seg? 2. A cuantos m3/s equivalen 2000 L/min? 3. Cuntos g de nitrgeno (N) hay en 20 g de biomasa (BM)? 1. 50 m X 1 km X 3600 seg = 180 km seg 1000 m 1h h 2. 2000 Lt X 1 m3 X 1 min = 0.03 m3 min 1000 Lt 60 seg seg 3. 20 g Bm X 10 g N* = 2.0 g N 100 g Bm * 10% = 10 g de N por cada 100 g de Bm EQUIVALENCIAS 1 km = 1000 m 1 h = 3600 seg 1 m3 = 1000 Lt 1 min = 60 seg 1 Kg = 1000 g
1. Si un medio de cultivo contiene 4.0 g/Lt de glucosa como fuente de C Cul sera la cantidad de biomasa bacteriana que se podra obtener considerando que el carbono celular representa el 50% del peso seco de la bacteria? R=3.2 g de biomasa/Lt 2. Si al hacer un cultivo bacteriano en el medio con 4.0 g/Lt de glucosa se obtiene un peso seco de 2 g/Lt de biomasa, entonces cul es el rendimiento de la produccin de biomasa? cmo se explica que el rendimiento sea menor que la unidad?. 3. Calcular el rendimiento de produccin de biomasa por gramo de carbono consumido de un cultivo que produce 2 g de clulas/litro cuando utiliza como nica fuente de carbono una disolucin de glucosa al 1.0% (p/v). R=0.2