7accion del cl en nuestro organismo

Efectos del Cloro sobre la salud

El cloro es un gas altamente reactivo. Es un elemento que se da de forma natural. Los mayores consumidores de cloro son las compaas que producen dicloruro de etileno y otros disolventes clorinados, resinas de cloruro de polivinilo (PVC), clorofluorocarbonos (CFCs) y xido de propileno. Las compaas papeleras utilizan cloro para blanquear el papel. Las plantas de tratamiento de agua y de aguas residuales utilizan cloro para reducir los niveles de microorganismos que pueden propagar enfermedades entre los humanos (desinfeccin). La exposicin al cloro puede ocurrir en el lugar de trabajo o en el medio ambiente a causa de escapes en el aire, el agua o el suelo. Las personas que utilizan leja en la colada y productos qumicos que contienen cloro no suelen estar expuestas a cloro en s. Generalmente el cloro se encuentra solamente en instalaciones industriales. El cloro entra en el cuerpo al ser respirado el aire contaminado o al ser consumido con comida o agua contaminadas. No permanece en el cuerpo, debido a su reactividad. Los efectos del cloro en la salud humana dependen de la cantidad de cloro presente, y del tiempo y la frecuencia de exposicin. Los efectos tambin dependen de la salud de la persona y de las condiciones del medio cuando la exposicin tuvo lugar. La respiracin de pequeas cantidades de cloro durante cortos periodos de tiempo afecta negativamente al sistema respiratorio humano. Los efectos van desde tos y dolor pectoral hasta retencin de agua en los pulmones. El cloro irrita la piel , los ojos y el sistema respiratorio. No es probable que estos efectos tengan lugar a niveles de cloro encontrados normalmente en la naturaleza. Los efectos en la salud humana asociados con la respiracin o el consumo de pequeas cantidades de cloro durante periodos prolongados de tiempo no son conocidos. Algunos estudios muestran que los trabajadores desarrollan efectos adversos al estar expuestos a inhalaciones repetidas de cloro, pero otros no.

Efectos ambientales del Cloro

El cloro se disuelve cuando se mezcla con el agua. Tambin puede escaparse del agua e incorporarse al aire bajo ciertas condiciones. La mayora de las emisiones de cloro al medio ambiente son al aire y a las aguas superficiales. Una vez en el aire o en el agua, el cloro reacciona con otros compuestos qumicos. Se combina con material inorgnico en el ahua para formar sales de cloro, y con materia orgnica para formar compuestos orgnicos clorinados.

Debido a su reactividad no es probable que el cloro se mueva a travs del

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8.ANLISIS DE ISOENZIMAS DE CPK EN SUERO

Inicio | Anlisis Contenidos Denominacin Definicin Estudio OBTENCIN Riesgos Valores Diagnstico Denominacin

CPK isoenzimas, Isoenzimas de Creatininfosfoquinasa, Isoenzimas de Creatininfosfoquinasa en sangre.

Definicin La creatininfosfoquinasa puede presentarse en forma de 3 isoenzimas que se diferencian en su estructura. La CPK-1 CPK-BB, es la predominante en el tejido cerebral y en el pulmn. La CPK-2 tambin llamada CPK-MB es la de origen cardiaco, y la CPK-3 CPKMM que es la de origen muscular esqueltico. Para qu se realiza este anlisis?

La aparicin de CPK elevada en el suero sugiere lesiones en el corazn en el cerebro o en los msclos esquelticos. Dependiendo del isoenzima de CPK elevado podemos diferenciar cul es el tejido afectado. La CPK-MB se eleva a las 3 a 6 horas y vuelve a la normalidad a las 12 a 48 horas tras un infarto de miocardio. Por ello se realizan mediciones secuenciales para ver la evolucin. La CPK-MB no suele aparecer elevada si el dolor torcico es por una angor (angina de pecho) un embolismo pulmonar o por una insuficiencia cardiaca congestiva. La CPK-BB aparece elevada si hay dao en el tejido cerebral o en caso de infarto pulmonar por un embolismo. La CPK-MM es la isoenzima ms abundante en la medida total de la CPK en personas sanas, si se eleva se debe a lesiones del msculo esqueltico o por ejercicio fsico muy intenso. Procedimiento de Obtencin Para realizar este anlisis No se precisa estar en ayunas. Pueden verse alterados los valores de CPK isoenzimas si se han realizado inyecciones intramusculares, traumatismos musculares, intervenciones de ciruga recientes, o ejercicio intenso o prolongado. Hay medicamentos que puede elevar el nivel de la CPK en suero: Anfotericina B, ampicilina, anestsicos, anticoagulantes, aspirina, clofibrato, dexametasona, furosemida, morfina. Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta, clnica, hospital) pero en ocasiones se realiza en el propio domicilio del paciente. Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada y en general se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. La persona encargada de tomar la muestra utilizar guantes sanitarios, una aguja (con una jeringa o tubo de extraccin). Le pondr un tortor (cinta de goma-ltex) en el brazo para que las venas retengan ms sangre y aparezcan ms visibles y accesibles. Limpiar la zona del pinchazo con un antisptico y mediante una palpacin localizar la vena apropiada y acceder a ella con la aguja. Le soltarn el tortor. Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizar una aspiracin (mediante la jeringa o mediante la aplicacin de un tubo con vaco). Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con una torunda de algodn o similar para favorecer la coagulacin y se le indicar que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas. La sangre extrada se traslada al laboratorio de anlisis en un tubo especial para bioqumica, que contiene un producto anticoagulante. En general no suelen ser necesarios ms de 10 mililitros de sangre para una batera estndar de parmetros bioqumicos.

Problemas y Posibles Riesgos 1. La obtencin mediante un pinchazo de la vena puede producir cierto dolor. 2. La posible dificultad en encontrar la vena apropiada puede dar lugar a varios pinchazos. 3. Aparicin de un hematoma (moratn o cardenal) en la zona de extraccin, suele deberse a que la vena no se ha cerrado bien tras la presin posterior y ha seguido saliendo sangre produciendo este problema. Puede aplicarse una pomada tipo Hirudoid o Trombocid en la zona. 4. Inflamacin de la vena (flebitis), a veces la vena se ve alterada, bien sea por una causa meramente fsica o por que se ha infectado. Se deber mantener la zona relajada unos das y se puede aplicar una pomada tipo Hirudoid o Trombocid en la zona. Si el problema persiste o aparece fiebre deber consultarlo con su mdico. VALORES NORMALES DE CPK EN SUERO Niveles normales de isoenzimas CPK en suero: CPK 1-MM CPK 2-MB del 0 al 100 % de la CPK del 0 al 5% de la CPK

CPK 3-BB 0 % de la CPK En estos valores puede haber muy pequeas diferencias por la tcnica o por criterios de normalidad propios de laboratorios concretos, a veces en el rango de valores y otras veces por las unidades a las que se hace referencia. VALORACIN DE RESULTADOS ANORMALES Los niveles aumentados de CPK-1 -MM en la sangre pueden indicar:

Cncer de cerebro Infarto cerebral Tratamientos de electroconvulsin Hemorragias subaracnoidea Convulsiones Infarto pulmonar

Los niveles aumentados de CPK-2 -MB en la sangre pueden indicar:

Arritmias ventriculares Isquemia o infarto cardiaco Electrocucin Tratamiento de desfibrilacin cardiaca Tras intervenciones de corazn

Los niveles aumentados de CPK-3 -BB en la sangre pueden indicar:

Convulsiones Distrofia muscular Inyecciones mltiples intramusculares Miositis Traumatismos musculares Tras una electromiografa (Electromiograma) Rabdomiolisis Tras ciruga Tras ejercicio intenso

10. CAUSAS DE HIPOFOSFATEMIA

Se pueden encontrar tres mecanismos causales de hipofosfatemia: (menor a 2,5 mg/dl) - La redistribucin del fosfato extracelular al interior celular, como ejemplo tenemos: el aumento de la secrecin de insulina, la alcalosis respiratoria aguda (por estimulacin de la gluclisis). - Disminucin de la absorcin intestinal (muy rara) - Aumento de la excrecin renal de fosfato (hiperfosfaturia), como por ejemplo el hiperparatiroidismo primario y secundario, el dficit de vitamina D, osteomalacia inducida por tumores, etc. Consecuencias de la hipofosfatemia aguda: disminucin de 2,3-DPG y por lo tanto generar hipoxia hstica, alteracin en la funcin granuloctica, debilidad, irritabilidad, parestesias, disartria, confusin, crisis convulsivas y coma, miopata, acidosis metablica, cardiomiopata, disfuncin heptica.

CAUSAS DE HIPERFOSFATEMIA (MAYOR A 4,5 MG/DL)

Los mecanismos causales de hiperfosfatemia son: - Aumento de aporte (raro) - Aumento de la absorcin: intoxicacin por vitamina D - Disminucin de la excrecin urinaria: insuficiencia renal aguda o crnica (es la causa ms comn), hipoparatiroidismo, dficit de Mg. Etc. - Paso desde el espacio intracelular: Sndrome de lisis tumoral, rabdomiolisis, hemlisis, acidosis metablica o respiratoria.

Histologia 1 Presentation Transcript 1. Introduccin a la Histologa. Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los Tejidos 2. QUE ES LA HISTOLOGIA?
o o

Estudio del Tejido Anlisis de la composicin microscpica y la respectiva funcin del material biolgico. Anatoma: estudio de la forma y la estructura de los organismos vivos organizados.

Anatoma Macroscpica: estudio de las estructuras observables a simple vista. Anatoma Microscpica : aquella que requiere auxiliares pticos.

Ao 1600: primeras investigaciones histolgicas (invento del microscopio). Marcello Malpighi es el fundador de la Histologa. Ao 1665: Hooke descubre que el tejido vegetal se constituye de pequeas cmaras (clulas). Teora Celular : La clula es el elemento fundamental del organismo al que se deben trasladar todos los procesos vitales. Las plantas y los animales son agrupaciones de estas unidades vivas potencialmente independientes.

3.

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Nace la Citologa : estudio de la clula. Las clulas se originan por divisin de otras clulas, proceso que se realiza en el ncleo. ( Teora de Virchow: omnis cellula e cellula). Tejido: agrupacin de clulas con la misma funcin. rgano: unidad funcional mayor compuesto por distintos tipos de tejido. Sistemas de rganos: varios rganos con funciones relacionadas. Sistemas difusos: grupos celulares con funciones relacionadas localizadas en varios rganos distintos. La Histologa representa el nexo de unin entre la bioqumica, la fisiologa y la gentica, por un lado y los procesos patolgicos y la clnica por el otro.

QUE ES LA HISTOLOGIA? (Continuacin) 4. Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los Tejidos (inanimados o muertos)
o

Muestra : se obtiene mediante extirpacin de pequeos fragmentos de tejido (humano o animal). Preparacin de Tejidos para Microscopa ptica: Fijacin: consiste en interrumpir los procesos de degradacin que aparecen tras la muerte celular, tratando de conservar la arquitectura

y composicin tisular ms prxima posible a como era en el organismo vivo.

o

Deshidratacin: proceso mediante el cual se elimina completamente el agua del espcimen o muestra tisular para que se pueda embeber adecuadamente el tejido en aquellos medios de inclusin que no sean hidrosolubles. Se suele realizar usando alcohol etlico en concentraciones crecientes. Aclaramiento: proceso por el cual se consigue la sustitucin del agente deshidratante por una sustancia miscible con el medio de inclusin. Usualmente se realiza con el xileno (xilol).

5.
o

Preparacin de Tejidos para Microscopa ptica: Infiltracin (Impregnacin): Proceso que tiene por objeto rellenar o infiltrar completamente la muestra histolgica con el medio que se va a usar para la imbibicin del tejido. Se realiza mediante baos sucesivos en parafina fundida.

Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los Tejidos (inanimados o muertos) Baos (para inclusin) Tiempo de procesamiento Manual Automtico
o o o

Formol 10% Etanol 70% Etanol 95%

o o o o o o o o o

Etanol 100% Etanol 100% Etanol 100% Alcohol-Xilol Xilol I Xilol II Parafina Lquida Parafina Lquida Parafina Lquida

2 1 1 1

horas 2-4 horas 2-4 horas 1-2 horas 1-2 horas 1 hora hora 1 hora 1 hora 1 hora 2 horas 30 minutos 1 hora hora 1 hora 1 hora 30 minutos 45 minutos 45 minutos hora 1 hora 1-2 horas 6.
o

Preparacin de Tejidos para Microscopa ptica: Encastramiento del tejido y confeccin de los bloques: consiste en la obtencin de un bloque slido de tejido ms medio de inclusin, mediante el enfriamiento lento a 10-15C. Se utilizan las llamadas estaciones de inclusin: dispensador de parafina lquida, placa caliente para la orientacin de la pieza y placa fria para la solidificacin del bloque. Orientacin de la pieza: Se coloca en la posicin adecuada al tipo de corte que se

desea realizar (la cara inferior del bloque ser la superficie de corte). La parte ms blanda del tejido debe cortarse primero y la ms dura al final del proceso.
o

Corte del bloque en un micrtomo de parafina con cuchilla de acero (3-8 m de grosor). Montaje: Colocar los cortes sobre portaobjetos cubiertos previamente con capa de albmina o gelatina. Coloracin: Tincin con colorantes histolgicos en su mayora en solucin acuosa (por lo que los cortes incluidos en parafina deben ser desparafinados, mediante xileno y luego rehidratados con concentraciones decrecientes de alcohol en agua). El mtodo de tincin ms usado en la Hematoxilina-eosina (HE)

Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los Tejidos (inanimados o muertos) 7.

o

Preparacin de Tejidos para Microscopa Electrnica: Fijacin: Glutaraldehdo o Tetrxido de osmio. Deshidratacin: Etanol y/o acetona en concentraciones crecientes Aclaramiento: xido de propileno (1-2 epoxipropano). Inclusin: plstico (resinas). Epoxirresinas (araldite, resina epon y resina de Spurr)

o o

Confeccin de los bloques y cortes con un ultramicrotomo con cuchilla de vidrio o diamante (20-100 nm). El corte se controla con un microscopio y se aumenta el contrasta mediante el pasaje rpido por una solucin de acetato de uranilo. No es necesario eliminar el plstico de inclusin. Montaje: Los cortes ultrafinos se montan sobre un reticulado de cobre (grilla) cubierto por una pelcula plstica de sostn delgada.

Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los Tejidos (inanimados o muertos) 8. Mtodo de Preparacin para Microscopia ptica 9. Mtodo de Preparacin para Microscopia Electrnica 10.
o

Fundamentos Qumicos de la Coloracin El fundamento de cualquier mtodo de tincin radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar de modo variable diversas sustancias coloreadas llamadas colorantes . Segn su afinidad tisular: Colorantes Bsicos: aquellos que poseen una carga global positiva (catinicos), por lo que reaccionan con los componentes aninicos de las clulas y los tejidos. Ej.: Hematoxolina , fucsina bsica, etc.

o o

Colorantes cidos: aquellos que poseen una carga global negativa (aninicos) por lo que reaccionan con los componentes catinicos de las clulas y los tejidos. Ej.: Eosina , fucsina cida, etc. Colorantes neutros: su carga global es neutra por lo que conservan la propiedad de colorear conjunta o separadamente diversas estructuras. Ej.: tincin de Giemsa. Colorantes metacromticos: colorantes bsicos que reaccionan con algunas estructuras tisulares que producen tonos de color totalmente distintos al que se espera por el colorante empleado. Ej.: azul de metileno o de toluidina en la sustancia fundamental del cartlago (azul al rojo o prpura). Colorantes indiferentes: aquellos que no poseen carcter cido, bsico o salino definido. Colorean mediante impregnacin. HISTOQUMICA Y CITOQUIMICA

11.
o

Procedimientos qumicos especficos que proporcionan informacin detallada sobre sustancias qumicas y componentes en las clulas y tejidos. Se fundamentan en:

La unin especfica a un colorante, El uso de anticuerpos marcados con un colorante fluorescente dirigidos a un componente celular en particular,

o la actividad enzimtica inherente de un elemento constitutivo de las clulas.

Mtodos basados en la reaccin de Schiff para grupos aldehdo.

Mtodo del cido perydico-Schiff (PAS) Mtodo de Feulgen.

o o o

Determinacin histoqumica de lpidos. Determinacin histoqumica de enzimas. Mtodos inmunohistoqumicos.

Clase I Histologia Presentation Transcript 1. Universidad de Carabobo Facultad de Ciencias de la Salud Escuela de Ciencias Biomdicas y Tecnolgicas Departamento de Ciencias Morfolgicas y Forenses Asignatura: Morfologa Microscpica Prof. Mayra Jimnez BIENVENIDOS
2.

Unidad I. Introduccin al estudio de la Histologa y Morfologa Celular Objetivo General : Especificar las herramientas que utiliza la histologa para el estudio ultraestructural de tejidos y de la clula como unidad morfolgica y funcional del organismo Contenido: Histologa. Concepto y aplicaciones Cientficas y clnicas. Tecnica

Histolgica. Etapas en la preparacin de tejidos para su estudio al microscopio ptico y electrnico. Histoqumica y Citoqumica Microscopa. Tipos de Microscopios y aplicacin. Microscopio ptico: partes y funcionamiento. Microscopio electrnico: de transmisin y de barrido. 3. Qu es la Histologa? Etimolgicamente: histo= tejido logos: estudio Es la rama de la biologa encargada del anlisis microscpico de la anatoma celular y tisular de los tejidos biolgicos. Marcello Malpighi es reconocido como el fundador de la Histologa Las primeras investigaciones histolgicas se hicieron en el siglo XVII gracias a la invencin del microscopio ptico por Antonio Van Leeuwenhoek 4. Qu es la Anatoma? Es el estudio de la forma y la estructura de los organismos vivos organizados Anatoma Macroscpica: estudio de las estructuras observables a simple vista Anatoma Microscpica: es aquella que requiere de auxiliares pticos Qu es la Citologa? o biologa celular es una disciplina acadmica que se encarga del estudio de las clulas en cuanto a lo que respecta a las propiedades, estructura, funciones, organelos que contienen, su interaccin con el ambiente y su ciclo vital.
5.

Clula: Unidad morfolgica y funcional de todo ser vivo. Es el elemento de menor tamao que puede considerarse vivo. Ejm: Tejido: agrupacin de clulas con la misma funcin rgano: unidad funcional mayor compuesto por distintos tipos de tejido Sistema de rganos: conjunto de rganos

con funciones relacionadas La Histologa re presenta un nexo de unin entre la bioqumica, la fisiologa, la anatoma, la gentica, la clnica y la patologa. 6.
o

Obtencin de la muestra de material humano: El material humano puede provenir de tres fuentes: Las necropsias, las biopsias y las piezas operadas. De estas, slo la primera puede darnos material normal; las dos ltimas proporcionan tejidos patolgicos. Necropsias : son las piezas que se obtienen de un cadver. Para histologa normal es necesario que se trate de un cadver fresco y que no haya sido atacado por ninguna lesin, por lo menos el rgano que se quiere estudiar.

o o o o o o

7. Biopsias : son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnstico histopatolgico. Piezas operadas : los tejidos que han sido extrados de las intervenciones quirrgicas, generalmente tumores u rganos inflamados, tambin pueden darnos material de investigacin. 8. Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos 1.- Obtencin de la muestra : mediante extirpacin de pequeos

fragmentos de tejido (humano o animal) 2.Fijacin: Su propsito es mantener la morfologa del tejido lo ms parecida posible a lo que sta tena antes de hacer la extraccin. (formaldehdo al 37%) Mtodos: Qumico -> inmersin Fsico: congelacin La formalina no preserva todos los componentes de la clula y los tejidos 9. Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos 3.- Deshidratacin: proceso por el cual se elimina completamente el agua de la muestra para que se pueda embeber adecuadamente el tejido en aquellos medios de inclusin que no sean hidrosolubles. (Alcohol etilco en concentraciones crecientes) 4.Aclaramiento: proceso por el cual se consigue la sustitucin del agente deshidratante por una sustancia miscible con el medio de inclusin. (Xilol) 5.- Infiltracin (Impregnacin) Proceso que tiene por objeto rellenar o infiltrar completamente la muestra histolgica con el medio que se va a usar para la imbibicin del tejido. (Baos sucesivos de parafina fundida) 10. Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos 6.- Encastramiento del tejido y confeccin de los bloques: consiste en la obtencin de un bloque slido de tejido ms medio de inclusin, mediante el enfriamiento lento a 1015C: El bloque slido se llama TACO 7.Orientacin de la pieza: para realizar el corte del tejido se monta el taco en el microtomo (aparato equipado con una hoja de acero) y se obtienen cortes sumamente delgados cuyo grosor para

microscopa ptica vara entre 5 10 micrmetros 1milmetro = 1000 micrmetros 11. Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos 8.- Montaje: los cortes se colocan sobre lminas portaobjetos cubiertos previamente con capa de albmina o gelatina 9.Aclaramiento: Extraccin de la parafina con xilol 10.- Rehidratacin: desplazar el xilol por agua. Alcohol con agua en concentraciones decrecientes 11.- Tincin o Coloracin: con colorantes histolgicos en su mayora en solucin acuosa 12. Reduccin de la pieza Fijacin de la muestra Introduccin en cassette de deshidratacin Deshidratacin en alcoholes sucesivos Penetracin de la parafina 56-58C Barras de Leuckart Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos 13. Fractura del taco para cortar Corte en microtomo Bateria de coloracin H&E Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos 14. 15. Correlacin Clnica: Biopsias por congelacin Evaluar de inmediato el tejido obtenido durante el acto quirrgico y el diagnstico instantneo determina el paso siguiente en la ciruga Para identificar hallazgos intraoperatorios inesperados Para saber si se ha extirpado toda la masa patolgica y si el borde de la reseccin quirrgica est libre de tejido enfermo Se congelan fragmentos de tejido usando anhdrido carbnico comprimido o un lquido fro (isopentano) a una

temp de -50C Corte del tejido congelado en un criostato (cmara refrigerada que contiene un microtomo) Montaje del corte en un portaobjetos Tincin del corte: HE, azul de metileno y PAS El proceso puede tardar 10 minutos y el resultado se comunica al cirujano inmediatamente 16. Histoqumica y Citoqumica Se ocupan de investigar la actividad qumica que tiene lugar en las clulas y los tejidos. Se fundamentan en: La unin especfica de un colorante El uso de anticuerpos marcados con un colorante fluorescente La actividad enzimtica inherente de un elemento constitutivo de las clulas Composicin qumica de las muestras histolgicas La composicin qumica de un tejido listo para una coloracin de rutina es difrente de la del tejido vivo Los componentes que perduran son molculas grandes que no se disuelven con facilidad con el fijador. Entre ellas: nucleoprotenas, protenas intracelulares del citoesqueleto, protenas extracelulares, complejos de fosfolpidos y protenas (o carbohidratos) en las membranas. 17.
o

Composicin qumica de las muestras histolgicas Muchos componentes de los tejidos desaparecen durante la preparacin de los cortes teidos con H-E Los solventes disuelven los lpidos neutros

Las macromolculas durante la fijacin de rutina son: Glucgeno, Proteoglucanos y glucosaminoglucanos Los componentes solubles, los iones y las molculas pequeas tambin desaparecen durante la preparacin de las muestras includas en parafina: glucosa, sodio, cloro y susstancias similares Estos iones y pequeas molculas solubles no constituyen elementos morfognicos hsticos sino que participan en los procesos de sntesis o en las reacciones celulares.

o o

18. Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica Fundamento: Radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar de modo variable diversas sustancias Coloreadas. Segn su afinidad tisular: Colorantes Bsicos: poseen una carga global positiva (catinicos), reaccionan con los componentes aninicos de las clulas. Ej. Hematoxilina Colorantes cidos: poseen una carga global negativa (aninicos), reaccionan con los componentes catinicos de las clulas. Ej. Eosina Colorantes neutros: su carga global es neutra. Propiedad de colorear junta o separadamente diversas estructuras. Ej. Giemsa Colorantes metacromticos: colorantes bsicos. Producen tonos de color totalmente distintos al que se espera por el colorante empleado

Colorantes Indiferentes: no poseen carcter cido, bsico o salino definido. Colorean mediante impregnacin. 19. Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica Hematoxilina-Eosina (HE): utiliza dos tipos de colorantes. La hematoxilina que es un colorante bsico, colorea los componentes cidos de la clula (ncleo) de color morado; y la eosina que es un colorante cido se une a estructuras bsicas de la clula (citoplasma) otorgndole una tonalidad rosada Tincin de Giemsa Colorante neutro Tincin Azul de Toluidina Colorante metacromtico Impregnacin con sales de plata Coloracin indiferente 20. Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica Coloracin con PAS (cido peridico-Shiff): se usa para determinar la presencia de macromolculas ricas en glcidos como glucgeno, glucoprotenas y glucosaminoglucanos. Se observa color fucsia al microscopio ptico. Coloracin con Azn: (tricrmica): se obtiene tres colores diferentes: Azul oscuro en los ncleos de la clula; rojo en el msculo, queratina y citoplasma celular, y azul claro en el mucingeno y colgeno, o sea en el tejido conjuntivo Coloracin con metales: actan impregnando a ciertos componentes celulares. Se usan para demostrar aparato de golgi, y las neurofibrillas. 21. Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica Coloracin con hematoxilina frrica: til para estudiar detalles celulares finos. Ej. Las fibras elsticas y las mitocondrias presentes en el citoplasma de ciertas clulas Tricrmico de Cajal

y Gallego: implica el uso de tres colorantes. Para demostracin diferencial y selectiva de las fibras colgenas y del msculo. La orcena y la fucsina resorcina: son colorantes para fibras elsticas. Se observan entre bordeau y castao oscuro. Carmn de Best : para tincin nuclear y deteccin de glucgeno 22.
o

Elementos celulares que presentan basofilia, es decir afinidad por los colorantes cidos y se ven de color morado al microscopio ptico Heterocromatina y nuclolos del ncleo Algunos componentes citoplasmticos Material extracelular Elementos celulares que presentan acidofilia, es decir afinidad por los colorantes bsicos y se ven de color rosado al microscopio ptico La mayora de los filamentos citoplasmticos La mayora de los componentes membranosos intracelulares La mayora de las fibras extracelulares

o o o o

o o

23.
o o

RESUMEN - Que es la Histologa. Que es la Anatoma: Anatoma Macroscpica y Anatoma Microscpica. Que es la Citologa. Clula, Tejido, rgano, Sistema. Obtencin de la

muestra de material humano: necropsia, biopsia, piezas operadas.

o

Preparacin Histolgica de los tejidos : Obtencin de la muestra, fijacin, deshidratacin, aclaramiento, impregnacin, confeccin de bloques, Cortes, Montaje, aclaramiento, rehidratacin, coloracin. Biopsias por congelacin Fundamentos de la Histoqumica y Citoqumica Composicin qumica de las muestras histolgicas Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica : colorantes bsicos, cidos, neutros, metacromticos e indiferentes. Coloracin hematoxilina-eosina, Giemsa, azul te toluidina, sales de plata, PAS, Azan, hematoxilina frrica, cajal gallego, orcena, fucsina resorcina Sustancias que presentan basofilia, es decir afinidad por los colorantes cidos y se ven de color morado al microscopio ptico Sustancias que presentan acidofilia, es decir afinidad por los colorantes bsicos y se ven de color rosado al microscopio ptico MICROSCOPA Qu es un Microscopio?

o o

24.
o

Es un Instrumento que aumenta el tamao de una imagen y permite ver mayores detalles.

EL Microscopio ms sencillo: lupa, lentes de correccin

El conocimiento detallado moderno de la arquitectura celular se basa sobre varios tipos de observacin por diferentes tipos de microscopios M. ptico compuesto Campo claro Campo oscuro Contraste de fase Fluorescencia Luz U.V. M. Electrnico Transmisin (MET) Barrido (MEB) 25. La Luz como onda En una onda electromagntica, por ejemplo, el campo elctrico cambia en intensidad de manera cclica as: Cada ciclo de la onda se repite en intervalos separados por una longitud de onda La frecuencia mide el nmero de estos ciclos que ocurren cada segundo. 26. En la luz, la longitud de onda determina el color de la luz (por ejemplo la longitud de onda correspondiente al color verde es de 550 nanmetros) EL ESPECTRO PTICO La luz blanca est compuesta de ondas de diversas frecuencias. Cuando un rayo de luz blanca pasa por un prisma se separa en sus componentes de acuerdo a la longitud de onda as:
27. d=

0.61 /An

28. MICROSCOPA AUMENTO Es la relacin entre el tamao de la imagen y el del objeto en medidas lineales El Aumento de un microscopio es: Am= A lente objetivo x A Lente ocular Ej: Ocular: 10X Objetivo: 40X Cuanto es el aumento del microscopio? PODER DE RESOLUCIN
o

Es la capacidad de producir imgenes separadas de objetos que estn muy cerca

uno de otro. Numricamente equivale a d o distancia mnima entre dos objetos distinguibles.
o o o

Ojo humano: d= 0.2 mm Depende de: Apertura numrica (An) del sistema ptico (objetivo y condensador) Longitud de onda de la luz incidente ( )

29.
o o o o o o o o o o

Microscopio ptico de Campo Claro Usa Luz Visible. D = 0.2 um.(micromtro) La luz atraviesa el objeto examinado y el objetivo capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa Utilidad : Acadmico, Diagnstico clnico (Lab. Bioanlisis, Patolgico), Investigacin. Componentes Principales: Fuente Luminosa Lente Condensadora: para enfocar el haz de luz a la altura de la muestra - Platina: sobre la que se coloca la muestra. - Lente Objetivo: para recoger la luz que ha atravesado la muestra

o o

- Lente ocular: a travs de la cual se puede examinar directamente la imagen formada por la lente objetivo

30. MICROSCOPA PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO Mecnicas

o o o o o o o

Cabezal Brazo Revolver Platina Carro Tornillos macromtrico y micromtrico Base

pticas
o o o o

Lmpara Condensador/Diafragma Objetivos Oculares

31.
o

Examen de un Preparado Histolgico con el Microscopio ptico - Los rganos son tridimensionales, mientras que los cortes histolgicos tienen slo dos dimensiones Al examinar un corte hay que reconstruir mentalmente la organizacin

o o

o o o o o o

de la estructura y sus partes constitutivas - Los artefactos son elementos que representan un error en el proceso de preparacin (partculas de polvo, fragmentos de vidrio, agregados de colorante, filamentos de gasa etc.)

32. OTROS SISTEMAS PTICOS Microscopio de Contraste de Fase: Aprovecha las pequeas diferencias en el ndice de refraccin que hay en diferentes partes de una muestra de clulas o tejidos. - Las partes oscuras corresponden a las regiones densas y las partes claras corresponde a las regiones menos densas Utilidad: permite observar las clulas en accin y estudiar los movimientos implicados en procesos como la mitosis o la migracin celular. Estudiar cortes semifinos no teidos 33.
o o

Microscopio de Campo Oscuro La lente objetivo no capta la luz directa proveniente de la fuente luminosa El principio se consigue con un condensador especfico que permite transmitir la luz de forma circular, dejando el centro oscuro. Con esto se logra que el fondo de la muestra aparezca negro y los especimenes brillantes. Utilidad: En la prctica clnica para

o o

la deteccin de cristales en la orina y la identificacin de espiroquetas

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Microscopio de Fluorescencia Aprovecha la capacidad de algunas molculas de fluorescer bajo la luz UV Utilidad: Deteccin de molculas con autofluorescencia como la vitamina A y algunos neurotransmisores (fluorescencia natural) En tcnicas de inmunocitoqumica (fluorescencia secundaria), - En la investigacin del trayecto de fibras nerviosas

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Microscopio de Luz ultravioleta (UV) Utiliza lentes de cuarzo con una fuente de luz ultravioleta. La imagen depende de la absorcin de la luz UV por las molculas de la muestra. La muestra no puede inspeccionarse directamente a travs del ocular porque la luz UV no es visible y lesiona el ojo. Utilidad: Detectar cidos nucleicos, en especial las purinas y pirimidinas. Detectar protenas que tienen ciertos aminocidos

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en la prctica clnica para evaluar el grado de ploidia en cortes de tumores

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Representa un gran adelanto respecto a la microscopa ptica ya que: La longitud de onda del haz de electrones es 2000 veces menor que la del haz de luz, por lo que aumenta la resolucin por un factor de 10 Los electrones no pueden atravesar el vidrio, por lo que deben remplazarse por bobinas o lentes electromagnticas

MICROSCOPA ELECTRNICA Existen dos tipos: MET y el MEB 37.

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Microscopio Electrnico de Transmisin Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz La fuente es un filamento de tungsteno calentado que emite electrones El haz de electrones atraviesa una serie de lentes electromagnticas que cumplen la misma funcin que las lentes cristal de un microscopio ptico La imagen final se observa en una pantalla

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fosforescente

38. Microscopio electrnico de barrido - El haz de electrones no atraviesa la muestra sino que explora (barre) su superficie. - Forma una imagen de tipo tridimensional en un tubo de rayos catdicos de alta resolucin. 39. 40.
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RESUMEN -Qu es un microscopio. -Microscopio compuesto: campo claro, campo oscuro, contraste de fase, fluorescencia, ultravioleta. -Longitud de onda, frecuencia, espectro ptico -Aumento de un microscopio, poder de resolucin -Microscopio ptico de campo claro: utilidad, componentes principales, partes mecnicas y partes pticas Examen de un preparado histolgico en un microscopio ptico Microscopio de contrates de fase: fundamento, utilidad Microscopio de campo oscuro: fundamento, utilidad

Microscopio de fluorescencia: fundamento, utilidad Microscopio de luz ultravioleta: fundamento, utilidad Microscopio Electrnico: de transmisin y de barrido