Bd Of Sanit Panam 91(l).

1981

EMPLEO DE TECNICAS DE RADIOINMUNOENSAYO EN FASE SOLIDA PARA EL DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE LA PESTE INFECCIOSA HUMANA

B. W. Hudson,2

K. Wolff* y T. Butler3

Los resultados de las pruebas de radioinmunoensayo en fase slida llevadas a cabo con sueros sanguzzeos de casos confirmados y sospechosos de peste infecciosa humana indican que estos ensayos pueden aportar valiosos beneficios al diagnstico de esa enfermedad.

Introduccin Las tcnicas de radioinmunoensayo en fase slida (RIEFS) han sido valiosas para cuantificar anticuerpos contra las bacterias (1) y los virus (2, 3). En la tcnica indirecta de radioinmunoensayo en fase slida en general se agrega un antgeno purificado directamente a esa fase. A continuacin se expone este antgeno al suero sanguneo humano de prueba y, despus de un lavado profuso, los anticuerpos combinados con el antgeno se detectan por medio de anticuerpos marcados con radioistopos especficos para la IgM o la IgG humanas. La aplicacin de estas tcnicas para determinar la presencia de anticuerpos humanos contra Yewnziz pestis ofrece varias ventajas como son el empleo de cantidades relativamente modestas de antgenos puri-

Organuatzbn Vol. 14, No. 3, 1980.

Sepublica en inglsen el BuUetti IhePan Amenkan HeaIth of

Departamento de Inmunoqtimica, Divisibn de Enfermedada Transmitidas por Vectores, Direccibn de Laboratorios, Centros para el Control de Enfermedades,Departamento de Salud. Educaci6n y Bienestar Social, P.O. Box ZO87,Fort Collins. Colorado 80522. EUA. Divisibn de Medicina Ceogrfica, Departamento de Medicina, Universidad Case Westem Reserve, Cleveland, Ohio 44106, EUA.

ficados; una sensibilidad extrema, de alrededor de 0.5pg de anticuerpos por ml(1), y la posibilidad de medir las respuestas de la IgM y de la IgG. La fraccin protenica soluble 1A de Y. pestti (4), recomendada para el diagnstico serolgico de la peste infecciosa humana (5), constituye un antgeno especfico sumamente purificado, aunque solo se puede conseguir en cantidades limitadas de fuentes no comerciales. La prueba serolgica ms sensible que en el presente se utiliza para el diagnstico de la peste infecciosa humana, o sea la hemaglutinacin pasiva (HAP) (5), algunas veces no permite detectar respuestas serolgicas en sueros sanguneos humanos obtenidos poco despus del comienzo de la enfermedad (6, 7). Inquieta particularmente la incapacidad del ensayo de la HAP de detectar los aumentos de los ttulos en sueros sanguneos, desde la etapa aguda hasta la de convalecencia, provenientes de algunos primates vacunados (8) y de ocasionales casos recurrentes de peste infecciosa humana (7). Por ltimo, la I-IAP solo con dificultad permite diferenciar las respuestas de la IgM y de la IgG humanas, y es posible que la medicin adecuada de estas respuestas sea valiosa para el diagnstico

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serolgico de la peste infecciosa del ser humano, en especial al principio de la convalecencia. Por todas estas razones hemos decidido emplear las tcnicas de RIEFS para examinar diversos sueros sanguneos humanos que fueron puestos a nuestra disposicin. Materiales Sueros La mayor parte de las muestras de sueros se obtuvo en Viet Nam, de casos confirmados de peste infecciosa humana (7). Estas muestras comprendieron sueros obtenidos en las etapas aguda y de convalecencia de 14 pacientes, y los de otros cuatro enfermos convalecientes. Ocho sueros ms se obtuvieron en Estados Unidos, de pacientes con peste infecciosa humana confirmada. Incluyeron una muestra de la etapa aguda y dos de la convalecencia de un paciente, y cinco muestras obtenidas de otros cinco convalecientes. Como testigos negativos se emplearon los siguientes sueros, todos obtenidos en Estados Unidos: tres sueros de convalecientes sospechosos de haber sufrido peste infecciosa humana, que posteriormente se reconoci como tularemia; siete sueros de convalecientes sospechosos y sin confirmacin de haber sufrido peste infecciosa humana, y tres sueros de parientes de enfermos, que estuvieron en contacto con ellos, sospechosos sin confirmacin de haber contrado esta enfermedad. Antgeno Se prepar la fraccin protenica 1A de la cepa A 1122 de Y. pestis empleando los mtodos de Baker (4). Esta preparacin result homognea al examinarla mediante electroforesis de geles en discos de acrilamida con laurilsulfato de sodio y mtodos

(LSS) (9) y no tuvo reactividad cruzada al emplearla en el ensayo de la HAP con sueros hiperinmunes de Yer.szitiu pseudotuberculosti y Yersiniu enterocolitica (5).

Radioinmunoensayo

en fme

slida

La tcnica que se utiliz fue una adaptacin de la de Trent et al. (10). Se emplearon lminas de microtitulacin de 96 pocillos, tratadas para realizar cultivos de tejidos (Linbro Scientifk Co., Hamdem, Conn., EVA), y en cada pocillo se coloc la fraccin 1A (0.8pg) en 50~1 de solucin salina amortiguada con fosfato (SAF) a un pH de 7.4, que contena 0.1% de azida sdica, 2mM deMgClpy lmMdeCaCl,.Estaslminas con el antgeno se dejaron secar durante la noche a temperatura ambiente. Al da siguiente se agregaron 200plde suero normal deconejoallO% enSAF(SAF-SNC) acada pocillo y se incubaron las lminas durante 45 minutos a 37C. A continuacin las lminas se lavaron tres veces con SAF. Las muestras de suero que se deban someter a ensayo se diluyeron al 1: 100 en SAF-SNC yen cada uno de cuatro de los pocillos se aadieron 50~1 de cada muestra. Para realizar las determinaciones de IgM las lminas se incubaron a continuacin durante cinco horas a 37OC y 12 horas a 4C, en tanto que para determinar la subclase IgG se incubaron durante una hora a37C. Despusdeesto todaslaslminas se lavaron tres veces con SAF. Los antisueros caprinos especficos para las cadenas pesadas de la IgM y la IgG humanas se obtuvieron de Antibodies, Inc., deDavis, California, EUA. Estosantisueros haban sido purificados por el fabricante mediante el procedimiento de columnas de afinidad. Despus de su purificacin no se

4 El usode marcasde fbrica sirve solamentede identificacin y noconstituyerespaldoalgunodelSeMciodeSaludPblicaodel Departamento deSalud, Educaciny AsistenciaSocialde EstadosUr& dos.

Hudson et al.

PESTE INFECCIOSA

HUMANA

pudo observar que tuvieran reacciones cruzadas al ensayarlos mediante inmunodifusin radial, inmunoelectroforesis y las pruebas de Ochterlon.5 Las fracciones de antisueros ricas en IgG se prepararon por precipitacin con sulfato de amonio (II) y las concentraciones de protenas se determinaron mediante una modificacin del mtodo de Folin( 12). Acto seguido se aplic yodo radiactivo a estas fracciones de IgG con lz51 (Amersham Searle), utilizando el mtodo de la coramina T (3). Las antiglobulinas se marcaron con 1,000microcures de lz51por cada 1OOpg de protenas en volmenes de un ml y se separaron del yodo libre en columnas de Sephadex G-25. Las cantidades resultantes, de 5 a 6 ml, de solucin de cada globulina yodada se diluyeron en volmenes iguales de suero normal de conejo (SNC). En seguida, estas soluciones matrices se volvieron a diluir en SNC para hacer el RIEFS (1:2paralaIgM, 1:4paralaIgG). Encada pocillo de la correspondiente lmina de microtitulacin se colocaron 50~1de la solucin de trabajo de antiglobulina lz51. Para efectuar las determinaciones de la IgM las lminas se incubaron durante cinco horas a 37C y para la IgG se incubaron dos horas a 37OC. Acto seguido, las lminas se lavaron tres veces con SAF y se cubrieron con una pelcula de material plstico; los pocillos se recortaron y retiraron de las lminas, se colocaron en ampollas para centelleo de 20 ml y se sometieron a cuantificacin en un contador Gama-310, de Beckman. Las desviaciones medias y normales de las cuatro determinaciones se emplearon como medidas de la fijacin de antiglobulina lesI en cada suero. Hemuglutinacinpasivu (HAP)

zados que recomienda el Comit de Expertos en Peste, de la Organizacin Mundial de la Salud (3). Resultados En el cuadro 1 se resumen los resultados del RIEFS obtenidos con las diversas clases de sueros ensayados. En los sueros de convalecientes de peste infecciosa confirmada el promedio de fijacin de los reactivos IgM e IgG antihumanas marcadas con lz51 fue entre dos y seis veces mayor que el obtenido en los ensayos que se realizaron con sueros testigo negativos de pacientes sospechosos, sin confirmacin, de haber sufridola peste. Sin embargo, los intervalos estadsticos de losvaloresquedaronenpartesobrepuestos. En el cuadro 1, suponiendo una distribucin normal de los valores de fijacin del 1*51,se calcula la variancia de cada grupo de determinaciones y loslmites de confianza de 99 %. Se encontr quelos lmites superiores de confianza de la fijacin del lz51en el RIEFS que se obtuvieron utilizando los sueros testigos negativos (IgM, 1,959 recuentos por minuto [RPM]; IgG, 4,464 RPM) eran menores que los lmites de confianza inferiores encontrados con sueros de convalecientes de peste infecciosa confirmada (IgM, 2,790 RPM; IgG, 11,857 RPM). Por lo tanto, los lmites superiores de confianza obtenidos en los ensayos en que se usaron los sueros testigos negativos parecen haber proporcionado criterios razonables para considerar que los sueros eran positivos a la prueba RIEFS. A continuacin se clasificaron todos los sueros de pacientes con peste confirmada segn sus resultados positivos o negativos al RIEFS y la HAP, considerando como resultados positivos IgM>l,959 RPM,IgG>4,464 RPM, y una titulacin de la HAP igualo superior a 1: 16. El resultado de esta clasificacin se muestra en el cuadro 2. Los resultados de la HAP fueron positivos en ocho de los 15 sueros de casos agudos ensayados, en tanto que los del RIEFS fueron positivos en

En el ensayo de HAP se utilizaron la fraccin purificada 1A y los mtodos normali5 Los detalles de estaspruebassepueden obtener del fabricante.

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CUADRO 1 -Resultados del radioinmunoensayo sueros sanguneos obtenidos de casos sospechosos

de fase slida y confirmados

(RIEFS) especfico para la IgM en de peste infecciosa humana.

Resultados del RIEFS en recuentos de a51 por minuto Resultados con 13 sueros testigos de sospechosos, no confirmados, y de parientes en contacto con los enfermos

Resultados con 15 sueros positivos de casos agudos de peste confirmada

Resultados del ensayo de IgM, en Tecuentos por minuto:

Resultados con 25 sueros positivos de convalecientes de peste confirmada

Intervalo estadstico Media Desviacin estndar Lmites de confianza de 99%

Resultados del ensayo de IgG, en recuentos POT minuto:

SSO-4,881 2,420 181 1,9532.886

1,122-8,359 3,570 302 2,790-4,349

599.4,256 1,500 178 1,041s1,959

Intervalo estadstico Media Desviacin estndar Lmites de confianza de 99%

2,094~29,274 6,383 951 3,929-8,837

2,468-35,849 19,574 2,991 11,857-27,290

993.5,303 2,895 608 1,326-4,464

aLa media por minuto y la desviacinestndar conjunta de los recuentosse calcularon a partir de las desviacionesestandar de euatm determntacionesefectuadasen cada suero. Los lmites de confianza de 99% secalcularon utilizando la desviacinestndar conjunta y la distribucin tpica normal.

CUADRO Z-Comparacin cualitativa de los resultados obtenidos mediante el radioinmunoensayo de fase slida (RIEFS) y el ensayo de la hemaglutinacin pasiva (HAP) en sueros de enfermos agudos y convalecientes de 25 casos de peste infecciosa humana confirmada. Resultados de la hemaglutinacin pasiva (HAP) Casos agudos (15 muestras) Resultados del RIEFS Negativo (IgM-, IgG-) HAP4 3 0 0 HAP+ 1 1 2 4 Casos convalecientes (25 muestras) HAP0 0 2 0 HAP+ 0 1 4 18

Positivo (IgM + , IgG-) Positivo (IgM - , IgC + ) Positivo (IgM + , IgG + ) Total de positivos del RIEFS

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Hudson et al.

PESTE INFECCIOSA

HUMANA

9 La muestra de este caso se obtuvo en Estados Unidos, se confirm en el terreno bacteriolgico y se hicieron estudios serolgicos durante tres meses despus del comienzo de la enfermedad. Ningn suero tuvo una titulacin importante de HAP. En un suero obtenido 30 das despus del comienzo de la enfermedad se observ una titulacin de 1: 8 en la prueba de HAP. Los datos correspondientes a estos cinco casos aparecen en el cuadro 4. Todos ellos proporcionaron resultados significativos en el RIEFS. El caso dos es particularmente interesante, ya que el par de sueros obtenido provena de uno de los dos casos de peste infecciosa recurrente en que se observ una disminucin en la titulacin de la HAP. Estos dos casos se han expuesto en otra publicacin (7). Los datos recogidos indican que, en comparacin con el ensayo de HAP, algunos sueros de convalecientes pueden dar resultados excepcionalmente altos en el RIEFS . Los datos de la HAP y el RIEFS de todos los sueros ensayados se muestran en la figura 1. En general, las concentraciones de IgM e IgG en los sueros parecieron guardar una relacin ms 0 menos clara con las titu-

10 de estos 15 sueros. Enlas pruebas realizadas con sueros de convalecientes, 23 de las 25 muestras fueron positivas en el ensayo de la HPA, y las 25 muestras resultaron positivas en el RIEFS . Lossuerosseensayaroncuatrovecespara obtener una cuantificacin de la fijacin media de yodo radiactivo, y se utiliz la prueba de Student para comparar los valores de los sueros de casos agudos y de convalecientes. Se consider que cuando los valores medios mostraban diferencias de 1%) que se tom como valor significativo, estaban aumentadas las concentraciones de IgM o IgG. Tambin se analizaron los datos de los 15 casos en que se pudo disponer de sueros de pacientes agudos y convalecientes (cuadro 3). Solamente un par de sueros no tuvo un aumento importante en las concentraciones de IgM o IgG. En ambos sueros se observaron concentraciones elevadas de IgM e IgG, pero un aumento modesto, sin importancia estadstica, de ambas concentraciones. En cuatro de los 15 pares de sueros no se obtuvieron ttulos de HAP. El suero de otro caso tambin fue interesante, aunque ya no se pudo disponer de sueros de casos agudos.

CUADRO

3-Resultados

del RIEFS en 15 pares de sueros

de casos agudos

y convalecientes.a

IgM, recuentos por minuto Cambios en las cifras de anticuerpos IgM o IgG Sin cambio significativo en IgM o IgG Aumento significativo en IgM; sin cambio significativo en IgG Sin cambio significativo en IgM; aumento significativo en IgG Aumento significativo en IgM: aumento significativo en IgG No. de pares de sueros RPM media inicial RPM media tina1 RPM diferencia media

IgG, recuentos por minuto RPM media inicial RPM media final RPM diferencia media

4,672

5,745

1,073

29,274

31,486

2,212

1,794

3,190

1,396

2,795

3,547

752

3,251

3,064

-187

6,393

21,046

14,653

1,869

4,355

2,486

4,234

17,273

13,039

Lar pares de suerossehan clasificado segnhayan tenido aumentossignificativos o no significativos en la fra\cin 1A de Y paru y cn los anticuerpos IgM e IgG. determinados por la prueba de Student con un grado de significado del 1%.

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CUADRO 4-Datos humana.

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del HAP y el RIEFS de cinco casos confirmados

de peste infecciosa

Resultados del RIEFSb Das entre el comienzo de la enfermedad y la obtencin del suero 2 17 33
3 8 2

IgMc Recuentos por Desviacin minuto estndar

3,301 8,275 6.778 282 564

WC Recuentos Dewiacibn Por minuto estndar

5,538 24,787 26,599 8,109 29,453 3,872 5.114 388 5,720 4.206 555 3,573

Caso No.

Tipo de suero Agudo Convaleciente Convaleciente Agudo Convaleciente Agudo Convaleciente Agudo Convaleciente Convaleciente

Titulacin de HAP 1:16 1:32 1:32 1:256 1:64 1:16 1:32 51:8 1:16 1:8

194 91 126 149 212 163 209 44

1,209 1,122
2,359 2,972

549 413 915 1,784

685

10 1 14
30

4
5

1,652 1,225
756

3,014
6,493 12,624

a Fktoscasa se seleccionaronde acuerdo con su respuma baja o reducida al efectuarseel ensayooriginal de HAP. bLas resultadosdel RIEFSsuperioresal lmite de confianza de 99% aparecenen cursivasen los casarsin confirmacin (vaseel texto). Lc6 RPM y la desviacibnestndarde cada suerosecalcularon a partir de la desviaci6nestndarde cada cuatro determinaciones.

laciones de la HAP. En el RIEFS se observ que siete de los 40 sueros tenan concentraciones anarmalmente elevadas de IgM o IgG. Los valores de IgM e IgG de estos sueros se muestran como estrellas abiertos en la figura mencionada. Estos siete sueros se obtuvieron de convalecientes; cuatro de ellos se tomaron de tres de los cinco casos que se presentan en el cuadro 4. Los datos sobre la IgG ob tenidos en el RIEFS de seis de estos siete sueros parecen tener una distribucin diferente a la de los datos de los sueros restantes. La regresin estadstica de los seis sueros se expresa por la lnea de trazo interrumpido. Si se excluyen los resultados de estos siete sueros, el anlisis de los datos correspondientes a los 33 sueros restantes, de enfermos agudos y convalecientes, muestra una correlacin entre los ttulos obtenidos en la HAP y las concentraciones de IgM e IgG (con coeficientes de correla-

cin0.658paralaIgMy0.894paralaIgG). Los datos sobre IgG del RIEFS y los de la HAP estn anms estrechamente correlacionados que los de la IgM y esas mismas pruebas. El anlisis de los datos sobre IgG y HAP de los siete sueros anormales da un coeficiente de correlacin de 0.745. Si se excluye de esta muestra el nico suero que tuvo cifras elevadas de IgM y normales de IgG, los datos de los seis sueros restantes arrojan un coeficiente de correlacin de 0.984.

Discusin Con frecuencia se han sealado las dificultades existentes para utilizar el ensayo de la HAP en el diagnstico serolgicc de la peste infecciosa. As, Marshall et al. (Q han hecho notar que en 35 de 69 pacientes viet-

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PESTE INFECCIOSA

HUMANA

ll

FIGURA l-Diagrama de dispersihi en que se comparan los datos obtenidos, mediante la HAP y el RIEFS, de casos agudos y convaleclentes de peste infecciosa conflrmada.a

namitas, de quienes se obtuvieron, en cada caso, dos sueros, no se observ un aumento importante en la titulacin. Adems, 50 de 71 muestras de un solo suero de pacientes 10,000 con peste comprobada bacteriolgicamente tuvieron ttulos negativos. Las muestras IA) IgM de suero utilizadas en estos estudios se to8 maron al principio de la convalecencia y los autores advierten que en esta etapa es po* I sible que se retarde la respuesta de antil cuerpos sricos. Este retraso se puede joo 5,( 0 complicar con disminuciones reales de los . O /ttulos en poblaciones que ya antes haban alcanzado ciertas cifras, En dos casos de peste infecciosa recurrente estudiados por Butler (7) en Viet Nam se observaron verdaderas reducciones de los ttulos de HAP. 01 , , , , , , , , , , t Se han notificado resultados semejantes en 9 11 113 5 7 3 primates vacunados expuestos a bacterias vivas de la peste (8). Obviamente, este tipo de resultados, a pesar de su escasa frecuenY cia, puede causar dificultades en el diag30,000nstico, especialmente en los individuos que han sido vacunados. Es probable que algunas de estas dificul20,000 tades se puedan evitar utilizando las tcnicas del RIEFS . Las muestras del suero de un paciente con peste recurrente mostraron aumentos sumamente significativos en las 10,000 concentraciones de IgG al someterlas a prueba mediante el RIEFS, y otros cuatro casos, cuyas muestras resultaron negativas OJ 7 , , , , , , , , , , al ensayo de HAP o no tuvieron aumentos 9 5 7 Il L 13 23 significativos en la titulacin, se pudieron Titulacin de la HAP (-Lcgp) confirmar por el RIEFS (cuadro 4). o Sueros de casos agudos Una consideracin distinta es la que se Sueros de convalecientes * 7 sueros de convalecientes con cifras desprende de los datos obtenidos al analizar anormalmente elevadas de IgM o IgG 13 muestras de suero de casos sospechosos, no confirmados, de peste infecciosa huma A) Concentracionesde IgM determinadas por el RIEFS. comparadas con titulaciones de la HAP: B) Concentraciones de IgC na. Entre estas 13 muestras, los resultados determinadas por el RIFZS, comparadas con titulaciones de HA&. Las doslineas horizontales representanlos ISmites superiores de dos sueros de convalecientes fueron ms de confianza de 99% en los datos obtenidos por medio del RI!ZFS altos que el lmite superior de confianza del en los suerosde enfermos sospechosos, confirmacin. de haber sin 99% correspondiente al grupo. Uno de essufrido de peste infecciosa, y de parientes que estuvieron en contacto con ellos (vkinse el texto, pg. 7 y el cuadro 1). Las dos tos sueros se obtuvo de un paciente del que lineas diagonalescontinuas indican los ajustesde la regresibnlinese haba sospechado, de acuerdo con al por mnimos cuadrados correspondientes a 39 muestras de sueros. La lnea de trazo intenunpido es la lnea de regresinde pruebas epidemiolgicas que se tomaron seissuerosde convalecientesque tuvieron valores de fijacin extrapor suficientes, que contrajo la peste infecordinariamente altos en el RIEFS (vanse el texto, pg. 9 y el cuadro 4). ciosa de conejos de Nuevo Mxico, EUA.

1
1

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Los ensayos serolgicos (HAP) y bacteriolgicos resultaron negativos en relacin con esta enfermedad, pero se encontr una titulacin moderada, de 1: 128, ala tularemia. Este suero dio cifras de 4,256 RPM de IgM en el RIEFS y resultados negativos para la IgG. Los resultados bacteriolgicos y serolgicos fueron asimismo negativos en el segundo caso sospechoso, que corresponda a un enfermo de California, EUA. El suero de este paciente produjo resultados negativos parala IgMenelRIEFS, perodiocifrasmoderadamente positivas de IgG, de 5,303 RPM en el mismo tipo de ensayo. Naturalmente, esta investigacin inicial no proporciona bases para definir con precisin los criterios quese deben aplicar al RIEFS para diagnosticar la peste infecciosa humana, pero pone de manifiesto que el primer caso mencionado sin confirmacin puede haber sido diganosticado equivocadamente. La posibilidad de que el diagnstico serolgico de la peste infecciosa humana se pueda mejorar mediante la aplicacin apropiada de las tcnicas del RIEFS es de importancia obvia para los interesados en la lucha contra esta enfermedad. Adems, la conservacin de los escasos antgenos y muestras de suero sanguneo disponibles es importante para los laboratorios que se ocupan del diagnstico de la peste. Para estudiar el contenido de IgM e IgG de cada muestra de suero se necesit un total de 6.4

pgdelafraccinantignicalAy4pldesuero sanguneo. Aunque el costo de los equipos puede hacer que el empleo del RIEFS quede limitado a los laboratorios de referencia mejor provistos, es tambin probable que la posibilidad de conservar los antgenos y las muestras de suero sea una ventaja para esos laboratorios.

Resumen Se han empleado tcnicas de radioinmunoensayo en fase slida (RIEFS) para estudiar las concentraciones de los anticuerpos IgM e IgG contra la fraccin purificada 1A de Yersinia pestti en varios sueros sanguneos humanos. Los resultados se han comparado con los datos obtenidos al utilizar el ensayo normalizado de hemaglutinacin pasiva (HAP) que recomienda el Comit de Expertos en Peste de la Organizacin Mundial de la Salud. Estos resultados indican que el empleo del RIEFS puede ayudar a que se conserve la fraccin antignica lA, que no es posible obtener en el comercio. Adems, es aparente que algunos casos de peste infecciosa humana, que no muestran titulaciones significativas de HAP ni aumentos en estas titulaciones, se pueden diagnosticar mediante el uso apropiado del RIEFS. n

REFERENCIAS
(1) Zollinger, W. D., J. M. Dahymple y M. S. Artenstein. Analysis of parameters affecting the solid-phase radioimmunoassay quantitation of antibody to meningococcal antigens. J Immunol 117:1788-1798, 1976. Rosenthal, J. D., K. Hayashi y A. L. Notkins. Comparison of direct and indirect solidphase micro-radioimmunoassays for the detection of vira1 antigens and antiviral antibody. Appl Microbio1 25:567-573, 1973. Purcell, R. H., D. C. Wang, H. J. Aher y P. V. Holland. Microiiter solid:phase radroimmunoassay for Hepatitis B antigen. Appl Microbio1 26~478-484, 1973. Baker. E. E., H. Sommer, L. E. Foster, E. Meyer y K. F. Meyer. Studies on immunization against plague: I. The isolation and characterization of the solubIe anti-

(3)

(2)

(4)

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et al.

PESTE INFECCIOSA HUMANA

13

(5)

(6)

(7) (8)

pestti. J Immunol gen of Pasteurella 68:131-145, 1952. Organizacin Mundial de la Salud. Comit de Expertos de la OMS en Peste. OMS, Serie de Informes Tcnicos 447. Ginebra, 1970, pg. 24-27. Marshall, J. D., Jr., F. L. Gibson, T. C. Dung y D. V. Quy. Early serological non-response in human plague infections. Bull WHO 37:495-497, 1967. Butler, T. y B. W. Hudson. The serological response to Yersinia pestti infection. Bull WHO 5539-42, 1977.

McNeill, D.y K. F. Meyer. Pasteurelkz pestis antibody patterns in sera of plagueconvalescent and vaccinated persons determined by immunoelectrophoresis and passive hemagglutination. J Immunol
94:778-784, 1965.

acterization of the antigenic subunits of the envelope protein of Yersinia pestis. J Bacteriol 117:48-55, 1974. (10) Trent, D. W., C. L. Harvey, A. Qureshi y D. LeStourgeon. Solid-phase radioimmunoassay for antibodies to flavivirus structural and nonstructural proteins. Znfect Immun 13:1325-1333, 1976. (II) Herbert, G. A. Ammonium sulfate fractionation of sera: moyse, hamster, guinea pig, monkey, chimpanzee, swine, chicken. and cattle. Appl Microbio1 27389-393, 1974. (12) Damm, H. C.. P. K. Besch, D. Couri y A. J. Goldwin. Determination of protein with Folin phenol reagent. En: H. C. Damm, et al. (Eds.) Methods and Referentes in Biochemtitq and Biophysics. Cleveland, World Publishing Co., 1966, pp. 19-21.

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Bennett, L. G. y T. G. Tournabene.

Char-

The use of solid-phase radioimmunoassay techniques for serodiagnosis of human plague infection (Summary)
Solid-phase radioimmunoassay (SPRIA) techniques were used to analyze the levels of IgM and IgG antibody to purified Yersinia pestis fraction 1A in various human sera. The results were compared with data obtained by using the standard passive hemagglutination (PHA) test recommended by the World Health Organization Expert Committee on Plague. These results suggest that use of SPRIA might help conserve the commercially unobtainable fraction 1A antigen. In addition, it appears that certain human plague cases that fail to show significant PHA titers or fail to exhibit increases in PHA titers can be diagnosed by suitable use of SPRIA.

Emprgo da tcnica de radio-imunoensaio em fase slida para o diagnstico serolgico da peste infecciosa humana (Resumo)
Tem-se empregado tcnicas de radioimunoensaio em fase slida (RIEFS) para estudar as concentraces dos anticorpos IgM e IgG contra a frac@0 purificada 1A de YersinZa pestis em vrios soros sangiineos humanos. Os resultados tm sido comparados com os dados obtidos ao usar o ensaio normalizado de hemaglutina@o passiva (HAP) recomendado pelo Comit de Peritos em Peste, da Organizaco Mundial da Sade. Estes resultados indicam que o emprgo do RIEFS pode ajudar a conservar a fracco antignica lA, que no se pode conseguir em estabelecimentos comerciais. Alm disso, parece que alguns casos de peste infecciosa humana que no mostram titulaGes significativas de HAP nem aumentos de estas titulaces, se podem diagnosticar por meio do emprgo apropriado do RIEFS .

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Utilisation de techniques diagnostic srologique

de radio-immunotests phase solide pour le de la peste infectieuse humaine (Rsum)

diale de la Sant. Ces rsultats montrent que lutilisation du radio-immunotest peut aider % conserver la fraction antigene lA, impossible trouver sur le march. En outre, il est clair que certains cas de peste infectieuse ne prsentant pas de taux de HAP significatifs ni daugmentation de ces taw, peuvent tre diagnostiqus par lutiliiation adquate du radio-immunotest phase solide.

Des techniques de radio-immunotests a phase solide ont t utilises pour tudier les concentrations des anticorps IgM et IgG centre la fraction purifie 1A de Yersinia pestis dans plusieurs srums de sang humain. Les rsultats ont t compars avec les donnes obtenues en utilisant le test normalis dhmagglutination passive (HAP) recommand par le Comit dExperts de la Peste de IOrganisation mon-

CONGRESO SOBRE ENFERMEDADES TRANSMISION SEXUAL

I

DE

Del 15 al 21 de noviembre de 1981 se llevar a cabo en San Juan: Puerto Rico, el 1 Congreso Mundial sobre Enfermedades de Transmisin Sexual, ger Congreso Latinoamericano de ETS. El mismo est patrocinado por los Centros para el Control de Enfermedades, el Servicio de Salud Pblica Regin II y el Instituto Nacional de Alergia y Enfermedades Infecciosas de Estados Unidos de Amrica; la Organizacin Panamericana de la Salud y la Organizacin Mundial de la Salud; la Unin Internacional contra las Enfermedades Venreas y las Treponematosis; la Unin Latinoamericana contra las Enfermedades Venreas; la Federacin Internacional de Planificacin de la Familia; la Asociacin Americana de Enfermedades Venreas; la Asociacin Americana de Salud Social; el Departamento de Salud de Puerto Rico y la Escuela de Ciencias Mdicas de la Universidad de Puerto Rico. El programa del Congreso comprende los temas siguientes: Investigacin bsica; Nuevos desarrollos en los aspectos clnicos de las ETS; Epidemiologa, control y educacin en ETS; Aspectos tico-legales que afectan al manejo y prevencin de las ETS; Adiestramiento y actualizacin en ETS. Entre las actividades planificadas figuran: reseas generales de temas seleccionados, presentacin de investigaciones originales, talleres, exhibiciones, grupos pequeos de discusin sobre tpicos escogidos y demostraciones de laboratorio. Los idiomas del Congreso sern ingls, espaol y francs. La inscripcin estar abierta hasta el 1 de septiembre de 1981. Para informes ms amplios, dirigirse a: 1st STD World Congress, Call Box STD, Caparra Heights Statron. San Juan, Puerto Rico 00922.