Gayana Bot.

64(1): 93-97, 2007

ISSN 0016-5301

DESARROLLO DEL GAMETOFITO Y ESPOROFITO JOVEN DE PTERIS CHILENSIS DESV. (PTERIDACEAE-PTERIDOPHYTA) GAMETOPHYTE AND YOUNG SPOROPHYTE DEVELOPMENT OF PTERIS CHILENSIS DESV. (PTERIDACEAE-PTERIDOPHYTA)
Luis Letelier1 & Patricio Peailillo2
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Departamento de Biologa, Facultad de Ciencias, Universidad de La Serena, Casilla 599, La Serena, Chile. lealg79@exalumnos.utalca.cl 2 Instituto de Biologa Vegetal y Biotecnologa, Universidad de Talca, Casilla 747, Talca, Chile.

RESUMEN El cultivo ex situ de Pteris chilensis Desv. a partir de esporas es presentado. La germinacin de las esporas ocurre a los 10-12 das y el patrn de germinacin es del tipo Vittaria. Un gametfito filamentoso de 3-4 clulas es obtenido a los 2324 das, logrando su desarrollo adulto entre los 60 a 95 das. Este se caracteriza por ser cordiforme y con alas simtricas. Los arquegonios se forman antes que los anteridios. Finalmente, la primera fronde aparece a los 115 das de sembradas las esporas. Las esporas se cultivaron en agar con medio nutritivo de Thompson, en cmara de cultivo con un fotoperodo de 12 horas luz (1.500 lux) y una temperatura promedio de 25C. PALABRAS CLAVES: Helechos, morfognesis, Chile, Regin del Maule. ABSTRACT The ex situ culture by spores of Pteris chilensis Desv. is presented. The germination of spores occurred after 10-12 days, having the pattern of germination as Vittaria type. A filamentous gametophyte of 3-4 cells is formed after 23-24 days; reaching the mature developing between 60-95 days. The cordiform gametophyte shows two symmetrical wings. The archegonia appear before the antheridia. Finally, the first frond is formed after 115 days of sowing. The spores are cultured in agar on Thompson nutritive medium in a culture chamber at a photoperiod of 12 hours light (1,500 lux) and a mean temperature of 25C. KEYWORDS: Ferns, Morphogenesis, Chile, Maule Region.

INTRODUCCION El gnero Pteris cuenta con aproximadamente 200 especies, de las cuales 55 se ubican en Amrica Tropical (Mendoza et al . 1997a). Crecen en altitudes de 0 a 2000 m snm, se encuentran en sitios abiertos, orillas de caminos, claros de bosques, bosques de galera, vegetacin secundaria y matorrales entre otros (Tryon & Tryon 1982). En Chile crecen 3 especies: P . berteroana C.Agardh, P. chilensis Phil. y P . semiadnata Phil., siendo las dos primeras en-

dmicas de nuestro pas (Rodrguez 1995). Pteris chilensis es un helecho endmico de Chile que crece desde la provincia de Petorca hasta la de Osorno, encontrndose adems en el Archipilago de Juan Fernndez (Rodrguez 1995). Es un helecho higrfilo que prefiere para su desarrollo las laderas hmedas o las orillas de esteros o arroyos cubiertos de bosque o matorral tupido, donde hay humedad abundante la mayor parte del ao, preferentemente en el litoral, escaso en el interior (Looser 1955, Gunckel 1984). Segn Baeza et al. (1999) es considerado como una especie fuera de

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peligro para Chile continental, y s lo en el caso de su distribucin insular como vulnerable; sin embargo, para Looser (1955) es muy escaso en Chile central. En la Regin del Maule es frecuente encontrarlo asociado al bosque maulino (Nothofagus glauca (Phil.) Krasser y N. alessandrii Espinosa) y al bosque pantanoso de canelo-mirtceas (Peailillo com.pers.), formaciones que han sufrido un fuerte deterioro antropognico (San Martn & Donoso 1995). Por el hermoso aspecto algunas especies del gnero Pteris se cultivan como ornamentales (Gunckel 1984, Hoshizaki & Moran 2002); segn Looser (1955) debiera intentarse cultivar Pteris chilensis, que es una planta de gran belleza. Taxonmicamente, esta especie delimita al grupo Pteris chilensis caracterizado por una pinna basal monopinnada o ms compleja; la pinna basal as como la lmina gradualmente reducidas hacia el pice; y una venacin libre (Tryon & Tryon 1982). Al mismo grupo pertenece la especie P. berteroana (Tryon & Tryon 1982, Mendoza et al. 1997a). La morfologa del esporfito de los helechos chilenos es bien conocida, no as la ontogenia y morfologa de la fase haploide (Rodrguez, 1973), existiendo nicamente las contribuciones realizadas por Rodrguez (1973), Prez-Garca e t a l . (1995, 1996a, 1996b) y Mendoza et al. (1997b). La fase sexual de algunas pocas especies del gnero Pteris es conocida por los trabajos de Farlow (1874), Goebel (1930), Steil (1933), Mehra (1938), Nayar & Kaur (1971) y Mendoza et al . (1997a). Unicamente este ltimo estudio trata a Pteris berteroana, una de las 55 especies de Amrica tropical del gnero. Los objetivos de este trabajo son dar a conocer el desarrollo del gametfito y esporfito joven de Pteris chilensis y entregar una metodologa para su propagacin ex situ mediante cultivo de esporas bajo condiciones de laboratorio.

cin ubicada en el sector El Corte, Regin del Maule, Prov. de Cauquenes, Carretera Cauquenes Pelluhue (3549 Lat. S - 7232 Long. W, y 90 m snm). Para ello se seleccionaron frondes frtiles, con soros maduros, guardando las pinnas en bolsas de papel debidamente rotuladas y selladas, dejndolas secar a temperatura ambiente, propiciando as la apertura de los esporangios y la liberacin de las esporas. Adems, como respaldo se herboriz un ejemplar en el Herbario de la Universidad de Talca (N de Herbario - 2792). La separacin de fragmentos de frondes y esporangios se realizo por medio de un juego de tamices de 200, 125 y 85 m de dimetro. Las esporas limpias se llevaron a potes plsticos previamente esterilizados con luz UV y se guardaron en un refrigerador a 5C hasta el momento de ser utilizadas. Las esporas se sembraron en 6 placas petri con agar y medio nutritivo de Thompson (Klekowski 1969, Prez-Garca e t a l . 1995, 1996a, 1996b, Mendoza et al. 1997a y 1997b) a pH 5,5. Las placas petri fueron envueltas con resinite (plstico alusa comercial), y para evitar su contaminacin y deshidratacin se colocaron dentro de una cmara de cultivo Biotronette Mark III marca LAB-LINE, con un fotoperodo de 12 horas de luz (1.500 lux) y una temperatura ambiente promedio de 25C. Se hicieron observaciones de los gametfitos desde la germinacin de la espora hasta la obtencin del esporfito. Adems, se estudiaron las esporas antes de su germinacin, describiendo la forma, tamao y ornamentacin de la exina. Las fotomicrografas fueron tomadas de material vivo, fijado en gelatina glicerinada (Montenegro 1985), con un microscopio ptico marca Nikon modelo OPTIPHOT de cmara incluida y pelcula Kodak TMAX-100.

RESULTADOS Las esporas son triletas, con un notorio cngulo ecuatorial y una ornamentacin verrugosarugulada, tal como lo sealaran Heusser (1971) y Villagrn (1980). Las dimensiones de las esporas son 35-42 x 35-59 m de dimetro polar (n = 4) y ecuatorial (n = 20), respectivamente, lo cual est en el rango citado para la familia Pteridaceae por Nayar & Kaur (1971) (Fig.1A-E).

MATERIALES Y METODOS Durante el mes de diciembre de 2004 se recolectaron esporas de P. chilensis en individuos que crecen en el sotobosque de hualo y ruil (Nothofagus glauca y N. alessandrii, respectivamente), pobla-

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FIGURA 1: Morfologa de las esporas de Pteris chilensis. A) Espora en vista ecuatorial. B) Espora en vista polar, polo proximal. C) Espora en vista polar, polo distal. D) Espora mostrando detalle de la ornamentacin de la exina, vista ecuatorial. E) Espora mostrando detalle de la ornamentacin de la exina, vista polar. FIGURE 1: Morphology of Pteris chilensis spores. A) Spore in equatorial view. B) Spore in polar view, proximal pole. C) Spore in polar view, distal pole. D) Spore showing detail of the exine ornamentation, equatorial view. E) Spore showing detail of the exine ornamentation, polar view.

FIGURA 2: Etapas en el desarrollo del gametfito de Pteris chilensis. A-B) Esporas en germinacin (10-12 das). C) Gametfito, inicio fase filamentosa (23-24 das). D) Gametfito adulto, vista abaxial. E) Gametfito adulto, arquegonio (60-70 das). F) Gametfito adulto, anteridio (85-95 das). G) Gametfito adulto, zona meristemtica. H) Esporfito joven (250 das). FIGURE 2: Stages in the development of Pteris chilensis gametophyte. A-B) Germination of spores (10-20 days). C) Initial of filamentous phase of the gametophyte (23-24 days). D) Adult gametophyte, abaxial view. E) Adult gametophyte, archegonia (60-70 days). F) Adult gametophyte, antheridium (85-95 days). G) Adult gametophyte, meristematic zone. H) Young sporophyte (250 days).

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La germinacin de las esporas ocurri entre los 10 a 12 das de sembradas, apareciendo primero la clula rizoidal que es hialina larga y sin cloroplastos. Posteriormente apareci la primera clula protlica con abundantes cloroplastos, conservando la cubierta de la espora (Fig. 2A y B). Este tipo de germinacin corresponde al tipo Vittaria de acuerdo a Nayar & Kaur (1971). La fase filamentosa aparece entre los 23 a 24 das, inicindose al dividirse la clula protlica transversalmente, formando un filamento uniseriado de 4-5 clulas (Fig. 2C). Las clulas protlicas presentan abundantes cloroplastos uniformemente distribuidos. La fase adulta se form entre los 60 a 95 das, obtenindose un gametfito cordiforme, sin presencia de pelos en la superficie de las alas, sus 2 alas son simtricas anchas que se elevan dando al protalo un aspecto infundibuliforme. Las clulas protlicas mostraron abundantes cloroplastos (Fig. 2D). Los arquegonios se formaron entre 60 a 80 das y los anteridios entre 70 a 90 das (Fig. 2E y F, respectivamente). Los arquegonios se ubican en la escotadura del gametfito y bajo la zona meristemtica del mismo (Fig. 2G), en cambio, los anteridios se localizan en la zona rizoidal del gametfito. La aparicin de la primera fronde ocurre al cabo de 115 das de sembradas las esporas, y un esporfito con 3 a 4 frondes se obtiene al cabo de 250 das (Fig. 2H). DISCUSION Una vez sembradas las esporas de Pteris chilensis germinan fcilmente, en pocos das, concordando con el tiempo de germinacin de otras Pteridaceae (Nayar & Kaur 1971, Mendoza et al. 1997a). En cuanto al patrn de germinacin tipo Vittaria de Pteris chilensis es un carcter compartido con muchas otras especies del gnero (Farlow 1874, Goebel 1930, Steil 1933, Mehra 1938, Mendoza et al . 1997a) y de otros gneros de la familia Pteridaceae (Nayar & Kaur 1971); y desde el punto de vista evolutivo es un carcter avanzado que presentan distintos grupos de helechos homospricos (Nayar & Kaur 1971). La mayora de las especies estudiadas muestran un protalo que crece rpido alcanzando su madurez entre los 3 a 6 meses (Nayar & Kaur 1971, Mendoza et al. 1997a), siendo este proceso an ms rpido para P. chilensis (2-3 meses).

El tiempo de aparicin de los gametangios, anteridios y arquegonios, concuerda con lo descrito para Pteris berteroana (Mendoza et al. 1997a), apareciendo primero los arquegonios y despus los anteridios. Rodrguez (1973) sobre 6 especies de Blechnum chilenos, muestra que primero se desarrollan los rganos sexuales masculinos seguidos de los rganos sexuales femeninos; sin embargo, PrezGarca et al. (1996a) seala para B. chilense una aparicin anticipada de los arquegonios. El aspecto cordiforme del protalo y la presencia de dos alas simtricas de Pteris chilensis es otro rasgo compartido con P. berteroana y otras especies del gnero, tales como P. multifida y P. tremula. Sin embargo, al lado de las especies de protalos con alas simtricas existen otros con alas asimtricas como Pteris comans, P. grandifolia y P. longifolia (Atkinson 1973). Un protalo cordiforme con alas simtricas es producto de la divisin de una clula meristemtica de posicin apical, en cambio, un protalo con alas asimtricas lo es de la divisin de una clula meristemtica de posicin lateral (Nayar & Kaur 1971). En la duracin temporal de las diversas etapas del desarrollo del gametfito hay una clara concordancia en el rango de das entre Pteris chilensis y P. berteroana, excepto por la aparicin ms temprana, aproximadamente 1 mes de la primera fronde del esporfito en P. chilensis. Finalmente, las condiciones de cultivo propuestas aqu representan una buena alternativa para la propagacin de Pteris chilensis ex situ a partir de esporas.

AGRADECIMIENTOS A la Dra. Iris Pereira del Instituto de Biologa Vegetal y Biotecnologa y al Dr. Jaime Tapia del Instituto de Qumica de Recursos Naturales de la Universidad de Talca, por el apoyo prestado en esta investigacin.

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Recibido: 08.08.06 Aceptado: 05.01.07

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