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Cmo cortar y pegar el ADN? Tijeras moleculares: enzimas de restriccin

En 1975 Daniel Nathans y Hamilton O. Smith descubrieron un tipo de protenas las enzimas endonucleasas o enzimas de restriccin- que actan como tijeras moleculares, cortando la doble cadena de ADN a travs del esqueleto de fosfatos sin daar las bases. El descubrimiento de estas enzimas condujo a dichos microbilogos al Nobel en 1978 y dio origen a la ingeniera gentica. Las enzimas de restriccin son producidas por bacterias como mtodo de defensa contra virus y degradan el ADN extrao. A su vez, el propio genoma bacteriano est protegido contra sus enzimas de restriccin mediante metilaciones (es decir, el agregado de un grupo metilo [-C H3)]) en un tomo especfico de ciertos nucletidos.

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Estas molculas son indispensables para la ingeniera gentica, ya que producen fragmentos que se pueden unir entre s fcilmente (con la ayuda de un pegamento molecular: la enzima ligasa). Las enzimas de restriccin cortan dejando extremos cohesivos o romos. Los extremos cohesivos son generados cuando la enzima corta las dos hebras asimtricamente, dejando los extremos de cada hebra de simple cadena complementarios entre s. Por otro lado, los extremos romos son generados cuando la enzima corta las dos hebras por el mismo lugar, generando dos extremos doble cadena.

Figura 1. Enzimas de restriccin. Este tipo de endonucleasas puede dejar dos tipos de extremos. En el primer caso, el corte genera nuclotidos de simple cadena llamados extremos cohesivos. Estos extremos se pueden unir por medio de otra enzima, la ADN ligasa. En el segundo caso, se generan extremos doble cadena (extremos romos). Estos extremos tambin pueden ser unidos con la ayuda de una enzima ligasa pero, como no los extremos no son complementarios, la unin ser ms inespecfica. Las enzimas de restriccin permiten cortar el genoma de cualquier organismo en pequeos fragmentos llamados fragmentos de restriccin. La coleccin de miles o millones de estos fragmentos se llama biblioteca gnica.

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