ANALISS INSTRUMENTAL

OCTUBRE-2011

BREVE HISTORIA DE LA TCNICA

Fraunhofer cre un sistema ptico, que mediante uso de prismas y rendija (slit), permiti detectar en el espectro de la luz solar las lneas de absorcin que llevan su nombre. El conocimiento de que cada elemento qumico posee un espectro de emisin de lneas caracterstica se debe a Bunsen y Kirchhoff (1859), que pueden considerarse los fundadores del anlisis espectral y los primeros que construyeron un equipo capaz de ser utilizado prcticamente.

El desarrollo de sistemas de deteccin fotoelctrica permiti en los aos 40 la sustitucin de los equipos de deteccin fotogrfica, poco eficientes, y la generalizacin de esta tcnica espectroscpica.

Radiacin electromagntica: es la propagacin de energa a travs del espacio sin soporte de materia, es decir, a travs de ondas producidas por la oscilacin o aceleracin de una carga elctrica (dualidad onda-partcula).
Naturaleza ondulatoria: caracterizada por su frecuencia () o longitud de onda (). = nmero de ondas que pasan por un punto en la unidad de tiempo. = distancia que hay ente dos puntos iguales de la onda, mximos, mnimos, etc.

La radiacin electromagntica se puede ordenar en un espectro que se extiende desde ondas de frecuencias muy elevada (longitudes de onda pequeas; rayos gamma) hasta frecuencias muy bajas (longitudes de onda altas; ondas de radio). La luz UV-visible es slo una pequea parte del espectro electromagntico, visible (780-380nm); UV (380-200nm).

Esta radiacin puede ser emitida por sustancias bajo condiciones de gran excitacin, como por ejemplo las altas temperaturas o descargas elctricas. La radiacin electromagntica al incidir sobre la materia puede sufrir los siguientes procesos:

1. Absorcin 2. Transmisin 3. Reflexin 4. Refraccin 5. Dispersin

Muchos compuestos absorben luz ultravioleta (UV) o visible (Vis.). En el siguiente diagrama se muestra un haz de radiacin monocromtico de poder radiante (P0) dirigido a una solucin de muestra. Se efecta la absorcin del haz y al salir de la muestra tiene un poder radiante (P).
La cantidad de radiacin absorbida puede ser medida en distintas formas: Transmitancia, T = P / P0 % Transmitancia, %T = 100 T Absorbancia: A = log 10 P0 / P A = log 10 1 / T A = log 10 100 / %T

A = 2 - log10 %T

Es til recordar la ecuacin, A = 2 - log10 %T, porque permite calcular fcilmente la absorbancia a partir de los datos de porcentaje de transmitancia. La relacin entre absorbancia y transmitancia se ilustra en el diagrama siguiente:

As, si toda la luz pasa a travs de una solucin sin absorcin, entonces la absorbancia es cero, y el por ciento de transmitancia es 100%. Si toda la luz es absorbida, entonces el porciento de transmitancia es cero, y la absorcin es infinita.

A=bc

Donde: A es absorbancia, adimensional, puesto que A = log10 P0 / P, y es la absortividad molar con unidades de L mol-1 cm-1 b es la longitud del paso ptico de la muestra; que es, el espesor de la celda en que la muestra esta contenida y la expresaremos en centmetros. c es la concentracin del compuesto en solucin, expresada en mol L-1

Por q no usar otra ecuacin?????

Para empezar, pensemos sobre las ecuaciones... A=bc %T = 100 P/P0 = e -bc Ahora, suponga que tenemos una solucin de sulfato de cobre (que aparece azul porque tiene una absorcin mxima en 600 nm). Si analizamos la forma en la cual cambia la intensidad de la luz (poder radiante) cuando pasa a travs de una celda de un centmetro de espesor, observaremos reduccin, cada 0,2 cm segn el diagrama de abajo. La Ley de Lambert - Beer dice que la fraccin de la luz absorbida por cada capa de solucin es la misma. Para nuestro ejemplo, supondremos que esta fraccin es de 0,5 para cada "capa" de 0,2 cm y obtendremos los datos siguientes:

El grfico de este comportamiento corresponde a la siguiente forma, exponencial:

La expresin A = bc nos dice que la absorbancia depende de la cantidad total de compuesto en el paso ptico de la luz a travs de la celda. Si graficamos la absorbancia contra concentracin, obtenemos una lnea recta que pasa a travs del origen (0,0).

Para empezar despejmosla de A = bc: = A / bc

: como la cantidad de luz absorbida por unidad de concentracin, o la extincin causada por un mol de solucin, teniendo en cuenta la concentracin expresada en moles/L, lo que le explica el nombre con que tambin se la conoce, coeficiente de extincin molar.

La absortividad molar es una constante para una sustancia particular, as si la concentracin de la solucin es reducida a la mitad, de igual manera se afectar la absorbancia, que es exactamente lo que usted supondra

Refirmonos a un compuesto con un valor muy alto de absortividad molar, digamos 100 000 L mol-1 cm-1, que est en una celda, con un paso ptico de 1 cm y la lectura de absorbencia es de 1. =1/1c Por lo tanto, c = 1 / 100 000 = 1 X 10-5 mol L-1

Ahora, estudiemos un compuesto con un valor muy bajo de , por decir 20 L mol-1 cm-1 que est en solucin en un paso ptico de 1 cm y da una absorbencia de 1. =1/1c Por lo tanto, c = 1 / 20 = 0,05 mol L-1

La respuesta es ahora evidente; un compuesto con una absortividad molar alta es muy eficaz absorbiendo luz (de la longitud de onda apropiada), y por tanto los compuestos con una absortividad molar alta pueden ser fcilmente identificados.

Probablemente usted piensa que el valor ms alto es el correcto, porque usted ha visto que las soluciones de sulfato de cobre tienen normalmente un bello color azul brillante. Sin embargo, el valor de la absortividad es 20 L mol-1 cm-1. El color azul brillante que se observa es debido a que la concentracin de la solucin es muy grande.

El -caroteno es un compuesto orgnico que se encuentra en vegetales y es responsable del color de las zanahorias. Se encuentra en concentraciones sumamente bajas. Usted no debe sorprenderse que la absortividad molar del -caroteno es 100 000 L mol-1 cm-1 !.

Para que la radiacin electromagntica incidente, interaccione con la materia debe de tener una del mismo tamao o menor que las dimensiones del cuerpo irradiado. Es por ello que la radiacin de la regin del ultravioleta cercano y la region visible (200-800) nos permite obtener informacin de las transiciones electrnicas de las molculas.

Se basa en el anlisis de la cantidad de radiacin electromagntica (en el rango de longitudes de onda del ultravioleta y visible) que puede absorber o transmitir una muestra en funcin de la cantidad de sustancia presente.

Cuando un fotn UV-Visible de energa adecuada incide en una especie absorbente, un electrn es promovido desde su estado fundamental a un estado electrnico excitado. En absorcin UV-Visible, pueden observarse las distintas transiciones electrnicas: Transiciones * <150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo en hidrocarburos que nicamente poseen enlaces C-H o C-C. Transiciones * entre 150-200 nm . Correspondientes a hidrocarburos que poseen tomos con pares de electrones no compartidos (electrones de no enlace). perteneciendo stas a la regin espectral UV Lejano. Transiciones * y * entre 200-700 nm. La mayora de las aplicaciones de espectroscopia UV-Visible estn basadas en transiciones que ocurren en esta zona. Se requiere que las especies participantes aporten un sistema de electrones (grupos cromforos: compuestos con insaturaciones, sistemas aromticos multicclicos, etc.). correspondiendo a la regin UV Lejano y Prximo, mientras que las n * son considerablemente menores, correspondiendo a la regin visible del espectro. En espectroscopia UV-Vis se irradia con luz de energa conocida suficiente como para provocar transiciones electrnicas, es decir promover un electrn desde un orbital de baja energa a uno vacante de alta energa.

Cada sustancia tiene un espectro de absorcin caracterstico que depender de la configuracin electrnica de la molcula, tomo o in y de los posibles trnsitos electrnicos que se puedan producir con la radiacin que incide sobre ella.

Fuente de luz: suele ser una lmpara que emite una luz (por incandescencia de un filamento) policromtica, es decir que contiene distintas longitudes de onda con distintas intensidades, I0. Sistema ptico: a travs de filtros, lentes y redes de difraccin se focaliza el haz de luz y se selecciona una longitud de onda fija. Compartimiento muestra: es donde se coloca la muestra, con un espesor conocido, normalmente disuelta y en una cubeta de 1cm de paso ptico, sobre la que se hace incidir el haz de luz monocromtica Sistema ptico: recibe la luz transmitida por la muestra, la focaliza y selecciona por longitudes de onda. Detector: recibe la seal de la intensidad de la luz transmitida a cada longitud de onda y la transforma en seal elctrica que un ordenador pueda procesar.

Fuentes de UV radiacin. Las lmparas de deuterio e hidrgeno emiten radiacin en el rango 160 nm a 375 nm. Es necesario usar ventanas y celdas de cuarzo, porque el vidrio absorbe radiacin de longitud de onda menor que 350 nm.
Fuentes de radiacin visible. La lmpara de filamento de tungsteno se emplea comnmente como una fuente de luz visible. Este tipo de lmpara es usada en el rango de longitud de onda de 350 nm a 2500 nm. La energa emitida por una lmpara de filamento de tungsteno es proporcional a cuatro veces la potencia del voltaje de operacin. Esto significa que para que la energa de salida de la fuente sea estable, es necesario que el voltaje de lmpara sea verdaderamente estable.

Las lmparas de tungsteno/halgeno contienen una pequea cantidad de yodo en la coraza de cuarzo, que tambin contiene el filamento de tungsteno. El yodo reacciona con el tungsteno gaseoso, formado por sublimacin, produciendo el compuesto voltil WI2. Cuando las molculas de WI2 golpean el filamento descompuesto, vuelven a depositar tungsteno sobre en el filamento. Las lmparas de tungsteno/halgeno son muy eficientes y la emisin cubre muy bien la regin ultravioleta y visible. Por ello son utilizadas en muchos espectrofotmetros modernos.

Una rendija de entrada. Una lente colimadora. Un dispositivo de dispersin (normalmente un prisma o una rejilla). Una lente de enfoque. Una rendija de salida.

Los recipientes para la muestra y la solucin de referencia deben ser transparentes a la radiacin que pasar a travs de ellas. Para espectroscopa en la regin ultravioleta se requieren de cuarzo o slice fundida. Estas celdas tambin son transparentes en la regin visible. Aunque, en ella, pueden utilizarse vidrios de silicato para la fabricacin de celdas transparentes entre 350 nm y 2 000 nm.

El tubo fotomultiplicador es el detector comnmente utilizado en espectroscopia UV - Vis.

El disolvente escogido debe disolver la muestra y debe de ser compatible con los materiales de las celdas.

El disolvente tambin debe ser relativamente transparente en la regin espectral de inters.

Para evitar una pobre resolucin y dificultades en la interpretacin de los espectros, un disolvente no debe ser utilizado para mediciones cerca o debajo de su longitud ultravioleta de corte, esto es, la longitud de onda en la cual la absorbencia del disolvente solo se aproxima a una unidad de absorbencia. La curva de absorbancia de un disolvente tal como se suministra, no debe de tener picos de impurezas extraas en la regin de inters. Por lo que se recomienda par anlisis con un lmite de deteccin bajo, utilizar disolventes grado espectroscpico.

Seleccione la longitud de onda adecuada para realizar el anlisis. Prepare estndares de diferentes concentraciones, dentro del rango lineal. Lea absorbencia de los estndares a la longitud de onda seleccionada. Construya un grfico absorbencia en funcin de la concentracin. Determine la absorbencia de la muestra problema. Auxiliado con algn programa como Lotus 123, Excel, etc., realice una regresin lineal para calcular la ecuacin de la recta. Calcule la concentracin de la muestra problema con los datos obtenidos de la ecuacin de la recta. En caso de haber realizado dilucin, calcule la concentracin real de la muestra.

Verifique el espectrofotmetro una vez a la semana, utilizando el material

de referencia de xido de holmio para verificar la escala de longitud de onda. En caso de alguna desviacin de los parmetros revisados con el material de referencia, solicite el servicio del proveedor para su revisin. Antes de encender el espectrofotmetro verifique que el compartimento de muestras est vaco. Recuerde que el equipo es de doble haz por lo que el ajuste a cero se realiza colocando en la celda de atrs y en la del frente la solucin de referencia. Tome las celdas siempre de la parte esmerilada para evitar dejar manchas de grasa de las manos por donde atraviesa la luz. Mantenga las celdas limpias, despus de usarlas se deben limpiar con metanol y dejarlas secar.

Seque las celdas con un pauelo desechable suave humedecido con metanol, si se encuentran muy sucias emplee jabn lquido al 20% v en agua destilada y lmpielas con un cotonete, despus enjuague abundantemente para eliminar totalmente el detergente y enjuague con agua deionizada, al final con metanol. Procure colocar las celdas siempre hacia el mismo lado. Generalmente traen unas letras en la parte superior, stas pueden tomarse como referencia para mantener siempre la misma posicin. Nunca sacuda las celdas para eliminar los restos de lquido, mejor permita que escurran sobre un papel absorbente. Cuando se analicen substancias voltiles utilice las celdas con tapa. Nunca introduzca las celdas en el portamuestras del espectrofotmetro con restos de lquido en la parte externa. Las celdas deben llenarse a de su capacidad, el volumen equivale a 3 mL