UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS CTEDRA DE HISTOLOGA Y EMBRIOLOGA

MICROSCOPIA

Microscopio: El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son

demasiado pequeos para ser vistos a simple vista.

Principios Fsicos del Microscopio de Luz

Refraccin: desviacin que sufre la luz al pasar el lmite entre dos medios transparentes y de diferente densidad, tales como el aire y el cristal de una lente.

Aumento: relacin entre el tamao aparente y el tamao real de un objeto, logrado con un sistema ptico. Aumento= Tamao aparente/ Tamao real; las unidades de medida se cancelan

Poder de Resolucin: capacidad de un sistema ptico de discernir como objetos independientes aquellos objetos que estn separados pero muy prximos entre s.

TIPOS DE MICROSCOPIO

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO: El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace as visible contra el fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin cerrada.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE: El microscopio de contraste de fase permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas

MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA: La imagen en el microscopio de luz ultravioleta depende de la absorcin de esa luz por las molculas de la muestra. La muestra no se puede observar directamente a travs del ocular

porque la luz ultravioleta puede daar la retina. El mtodo sirve para detectar cidos nucleicos, protenas que contienen determinados aminocidos.

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA: El microscopio de fluorescencia es una variacin del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiacin electromagntica emitida por las molculas que han absorbido la excitacin primaria y re-emitido una luz con mayor longitud de onda.

ptico Microscopio

Luz Variables

M.E. Transmisin Electrnico M.E. Barrido

MICROSCOPIO PTICO: Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticas. Tambin se le conoce como microscopio de luz, microscopio fotnico (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro.

Parte ptica El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador.

Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen el aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador

Parte mecnica Pie o base Brazo Platina, subplatina, tornillo de centrado

Tubo Tornillo macro y micromtrico Revolver

Unidades de medida
1 m= 1metro 1 mm= 1milmetro 1 m= 1 micrmetro 1 nm= 1 nanmetro 1= 1 unidad Armstrong 1 m= 1.000 mm=1.000.000 m=1.000.000.000 nm =10.000.000.000 1 mm= 1.000 m = 1.000.000 nm = 10.000.000 1 m= 1.000 nm = 10.000 1nm= 10

MICROSCOPIO ELECTRNICO: Un microscopio electrnico es aqul que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos.

Un microscopio electrnico, funciona con un haz de electrones generados por un can electrnico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnticas (todo ello al alto vaco ya que los electrones son absorbidos por el aire). Los electrones atraviesan la muestra (debidamente deshidratada) y la amplificacin se produce por un conjunto de lentes magnticas que forman una imagen sobre una placa fotogrfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscopios electrnicos slo se pueden ver en blanco y negro, puesto que no utilizan la luz, pero se le pueden dar colores en el ordenador. Como se puede apreciar, su funcionamiento es semejan

MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN: Un microscopio electrnico de transmisin (TEM, por sus siglas en ingls, o MET, en espaol) es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. Lo caracterstico de este microscopio es el uso de una muestra ultra fina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra. Debido a que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz visible, pueden mostrar estructuras mucho ms pequeas.

MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO: El Microscopio electrnico de barrido o SEM (Scanning Electron Microscopy), es aquel que utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen. Tiene una gran profundidad de campo, la cual permite que se enfoque a la vez una gran parte de la muestra. Tambin produce imgenes de alta resolucin, que significa que caractersticas espacialmente cercanas en la muestra pueden ser examinadas a una alta magnificacin. La preparacin de las muestras es relativamente fcil pues la mayora de SEMs slo requieren que estas sean conductoras.

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS CTEDRA DE HISTOLOGA Y EMBRIOLOGA METODOS HISTOLGICOS MTODOS HISTOLGICOS

Los mtodos o tcnicas histolgicas se puede definir como: la serie de procedimientos especiales a los que se somete el material que se va a estudiar bajo el microscopio (Histolgicamente)

Pueden ser: DIRECTOS (En vivo) INDIRECTOS (Postmorten) COLORACIN

MTODOS DIRECTOS: Estudio donde se emplean procedimientos que no afectan la biologa celular, O permiten observar los Cambios que sufre ante Determinados Procedimientos.

METODOS INDIRECTOS: Procedimientos que requieren mayor tiempo para poderlos ejecutar, aveces requieren de una fijacin previa. Son procedimientos mediatos o postmorten.

Entre estos procedimientos contamos...

.- CULTIVOS CELULARES Se cultivan clulas fuera del organismo que les dio origen. Requiere un medio apropiado: asptico (sin agentes nocivos), temperatura, pH, humedad, nutrientes, etc. Ej: HeLa, linfocitos, etc.

.- AUTORRADIOGRAFIA Tcnica por la cual un objeto radiactivo produce una imagen de s mismo sobre una pelcula fotogrfica. La imagen se denomina autorradiografa

.- CENTRIFUGACIN - ULTRACENTRIFUGACIN Se obtienen clulas o componentes subcelulares especficos de acuerdo a su gradiente de sedimentacin Ej.: glbulos rojos, glbulos blancos; mitocondrias, retculo endoplasmtico, etc.

.- INJERTOS O TRANSPLANTES Homo-injertos: se realizan en la misma especie Auto-transplantes ( el mismo individuo) Alo-injertos (diferentes individuos) Isotransplante Hetero-injertos o xeno-injertos: se efectan entre especies diferentes

METODO DE COLORACIN Se busca contrastar componentes celulares o extracelulares a travs de sustancias cromgenas.

.- TEORAS DE LA COLORACIN Fsica Qumica Fsico qumica

CLASIFICACIN DE LOS COLORANTES Clasificacin por su origen Naturales Vegetales: hematoxilina, azafrn, orcena. Animales: carmn (cochinilla)

Artificiales Pigmentos rojo rutenio, verde brillante, azul de Prusia. Derivados de la anilina (destilacin de la hulla)

Procesamiento Histolgico (Fases o procesos) 1.-Toma de la muestra 2.-Fijacin 3.-Repicado 4.-Inclusin de la muestra 5.-Corte al micrtomo 6.-Coloracin 7.-Montaje

1.-Toma de la muestra Identificacin Especie Raza Nmero Etc. Tamao: Microscopia ptica: 0,5 1 cm Microscopia electrnica: 0,1 0,2 cm

2.-Fijacin Principio de la fijacin: evitar los cambios post-morten de los tejidos Caractersticas de un buen fijador .-buena conservacin de estructuras. .-rpida penetracin. .-fcil adquisicin y preparacin. .-bajo costo.

Tipos de fijadores Simples .-Formol al 10% .-Alcohol - Etlico - Metlico .-Acido actico .-Gluteraldeido .-Osmio Compuestos .-Bouin: formol, acido actico, acido prrico .-Zenker .-carnoy Se lava la muestra

3.-Repicado Picar la muestra al tamao deseado

4.-Inclusin de la muestra Lavado Deshidratacin en alcoholes crecientes 50 100% Aclaramiento (xilol) Inclusin en parafina Confeccin de los bloques

5.-Corte al micrtomo Enfriamiento de los bloques Cortar de 3 a 6 micras Bao de maria (agua con gelatina) Pescado (bao Mara) Estufa a 60C por 1 hora

6.-Coloracin Desparafinacion (xilol) Hidratacin (alcoholes decrecientes 100-50%) Coloracin nuclear (hematoxilina) Lavado (agua corriente) Coloracin citoplasmtica (eosina) Lavado (agua corriente) Deshidratacin (alcoholes crecientes 50-100%) Aclaramiento (XILOL)

7.-Montaje

OTRAS COLORACIONES .-Para tejido conjuntivo .-Fibras reticulares .-Impregnaciones argnticas y ureas .-clulas cromafines .-Hongos .-Bacterias

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS CTEDRA DE HISTOLOGA Y EMBRIOLOGA Composicin de la materia viviente Caractersticas fsicas y qumicas. Propiedades biolgicas o fisiolgicas
Protoplasma: Sustancia viva, que forma a vegetales y animales. Clula: es la mnima expresin de protoplasma que posee existencia independiente Fisicoqumica del protoplasma : Se encuentra en Estado (sistema ) coloidal Coloide: pseudo-soluciones o dispersiones que no atraviesan ciertas membranas como ej: pergamino Pueden ser atravesadas por iones y molculas que forman soluciones verdaderas`.

Soluciones coloidales:
Formadas por dos fases: .-Fase dispersa (micelas y molculas con igual carga elctrica, y tamao 1-100 m) .-Fase dispersante o de dispersin: agua que ocupa el espacio entre las molculas

Tienen grados variables de viscosidad. Fluda: soles Poco fluda (semi-slida): geles (Estados reversibles)

Protoplasma: coloide .-Macromolculas (lipoprotenas, albmina, gelatina, etc. .-Micelas (pequeas) .-Tiene cargas del mismo signo, por ello se repelen .-Coloides lifilos (no tienden a sedimentar: albmina, protoplasma) .-C. Lifobos ( sedimentan fcilmente) .-C. Hidrfilos .-C. Hidrfobos.

FLOCULACIN: Hidrfobo: + carga contraria= precipitacin de las micelas Si las micelas tienden a confluir, disminuye capa solvatacin de las partculas es suspensin, se forman colonias de partculas suspendidas en el medio. COACERVADOS: Es un estado intermedio entre floculacin y solucin: coacervacin Si este estado intermedio origina partculas en suspensin ordenadas linealmente se denominan: TACTOIDES

Propiedades de las soluciones coloidales

Tixotropa: cambio en estado gel / sol por efecto mecnico Efecto Tyndall: se observa partculas en suspensin al incidir rayo de luz. Movimiento browniano: sig-sag. En estado gel no se observa.

Composicin qumica
Principales .-Oxgeno (mayor al 60 %) .-Carbono (alrededor 20 %) .-Hidrgeno (alrededor del 10 %) .-Nitrgeno (mayor a un 3 %) .-Otros: Calcio (alrededor 2 %), Fsforo (mayor 1 %) Cantidades pequeas .-Potasio (0,35 %) .-Azfre (0,25 % .-Sodio ( 0,16 %)

.-Cloro ( 0,14%) .-Magnesio (0,05 %) .-Hierro (0,004%) Rastros Yodo, cobalto, cobre, bromo, manganeso, flor El agua es el componente inorgnico ms importante Evolucin Al principio, se sintetizaron muchas molculas orgnicas complejas, entre ellas las protenas, los cidos nucleicos, los lpidos y los carbohidratos. Entonces las molculas prebiticas originaron coacervados. Sistemas dispersos Si se mezcla un coloide hidroflico de carga negativa (aninico) con otro de carga positiva (catinico), se produce una neutralizacin de cargas y se separa del agua un aglomerado que se llama coacervado. El fenmeno se llama coacervacin

Propiedades Fisiolgicas o Biolgicas 1. Irritabilidad 2. Conductividad 3. Contractilidad 4. Absorcin 5. Secrecin 6. Excrecin 7. Respiracin 8. Crecimiento 9. Reproduccin

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Morfologa y composicin celular

Clula

Clasificacin de los seres vivos de acuerdo al nmero de clulas que lo conforman Protozoarios: los mas simples formados por UNA SOLA CLULA. Metazoarios: organismos (superiores) formados por mltiples clulas

Clasificacin de las clulas atendiendo a la Complejidad estructural (desarrollo de la envoltura nuclear) Procariotas: carecen envoltura nuclear, ADN circular Eucariotas: desarrollaron una envoltura alrededor del material gentico

Protozoarios procariotas No poseen una envoltura nuclear por lo que el material gentico, es decir, su DNA es nico, circular y se encuentra en el citoplasma (nucleoide) Pueden medir entre 1 y 3 m.

Clulas Procariota: carece de envoltura nuclear (ej.: bacterias) Eucariota: posee envoltura nuclear

Morfologa celular La forma celular depende De la especialidad (funcin) Del contacto y presiones de clulas vecinas

Pueden ser en forma de:

Estrella

Cubica y cilndrica

Pera

Huso fusiforme

copa Piramidal

Planas o escamosas

Tamao celular Vara entre especies Dentro de una misma especie En general oscila entre 10 m y 60 m Macroscpicas: huevos de aves Microscpicas:eritrocito de carnero 4-5 m

Tamao y nmero celular El tamao del individuo depende del NMERO DE CLULAS y no del tamao de ellas

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Composicin celular Membrana plasmtica

La membrana celular, membrana plasmtica o plasmalema, es una bicapa de fosfolipidos en las que hay protenas adosadas en l. El modelo actual de la membrana plasmtica se llama mosaico fluido y su nombre se debe a que la mezcla de lpidos y protenas es un mosaico y lo de fluido significa que los fosfolipidos tienen movimiento y que no son slidos ni tampoco lquidos.

Estructura Es una estructura laminar formada por fsfolpidos (con cabeza hidroflica y cola hidrofbica) y protenas que engloban a las clulas, define sus lmites y contribuye a mantener el equilibrio entre el interior (medio intracelular) y el exterior (medio extracelular) de stas.

Funcin La funcin bsica de la membrana plasmtica es mantener el medio intracelular diferenciado del entorno. Glucocalix : compuesto casi siempre con cadenas de carbohidratos que recubre la superficie celular

Propiedades Entre las propiedades de la membrana plasmtica tenemos: 1. Permeabilidad: Se refiere a que permite el paso de ciertos compuestos a travs de su superficie con el fin de que estos formen parte de la sustancia celular. 2. Selectividad: La selectividad indica que la membrana permite el paso de ciertas sustancias que la rodean e impide el paso de otras. 3. Pinocitosis: Se denomina as a la ingestin de lquidos, que son almacenados en vesculas y luego pasados al citoplasma, por parte de la membrana celular.

Permeabilidad selectiva La permeabilidad selectiva es una propiedad de la membrana plasmtica que permite el paso de slo ciertas partculas a travs de ella. De esta forma, pueden entrar a la clula aquellas partculas que necesite la misma y se evita que ingresen las que no le sean tiles. De la misma forma, la clula puede eliminar las partculas que ha generado como desecho. As se regula la entrada y salida de sustancias a travs de la membrana y se logra el correcto funcionamiento de la clula.

Microscopia electrnica Baja resolucin: lnea densa Alta resolucin: aspecto trilaminar .- Dos lminas densas (2,5 nm) .-Una lmina clara (3-3,5 nm) .- (8- 10 nm)

Bicapa lipidica Hace imposible el paso de sustancias hidrofilicas, por ejemplo los iones. Al contrario, deja pasar pequeas molculas polares sin carga como la urea, el agua, y apolares como el oxigeno y el dixido de carbono. Las que no pasan por la membrana pasan por protenas.

Canales inicos Deja el paso de iones .Bombas: para el paso en contra de la gradiente de iones. Transportadores: para el paso de molculas medianas como la glucosa y los aminocidos.

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Composicin celular Citoplasma

Fundamental, Hialoplasma o citosol (amorfo) Figurado: se define con forma particular

CITOPLASMA AMORFO Ectoplasma: Estado Gel, Posee pocas organelas Endoplasma: Estado Sol, Asiento de mayor parte de componentes formes o figurados

CITOPLASMA FIGURADO Organelas u organitos: se consideran rganos internos, metablicamente activos, que realizan funciones escenciales especficas. (Citoesqueleto) Inclusiones: estructuras transitorias, no indispensables para el funcionamiento celular. Generalmente son sustancias de almacenamiento bien sea nutritivas, pigmentos o cristales.

ORGANELAS U ORGANITOS Membranosos .-Mitocondrias .-retculo endoplasmtico .-aparato de golgi .-lisosomas .-peroxisomas .-vesculas

No membranosos .-Ribosomas libres, polirribosomas (polisomas) .-Centriolos: centro celular .-Flagelos .-Cilios .-Citoesqueleto

ORGANELAS U ORGANITOS MEMBRANOSOS

.- Mitocondrias De forma alargada Son las nicas capaz de miltiplicarse por ellas mismas Microscopio de luz Granulos o filamentos Microscopio electrnico .-Dos membranas -Membrana mitocondrial externa: lisa, composicin similar a la membrana plasmtica -Membrana mitocondrial interna: presenta crestas hacia la matriz. Su cara interna posee corpsculos elementales. .-Dos compartimientos -Intermambranas -Matrix mitocondrial

Funciones mitocondriales Ciclo de krebs Fosforilacin oxidativa Cadena de electrones Formacin de atp -oxidacin de cidos grasos Almacena calcio

Apoptosis: Muerte celular programada

.- Retculo endoplasmtico Sistema de cisternas, sacos y vesculas membranosas Se extiende en todo el citoplasma, hasta la membrana nuclear externa Sistema de membranas que cuando poseen estructuras redondeadas adosadas a la cara externa se denomina retculo endoplasmtico rugoso ( rer), por la presencia de ribosomas Est bien desarrollado en clulas productoras de protenas como enzimas y otras secreciones: pncreas, clulas principales del estmago, clulas de paneth (intestino), plasmticas (producen anticuerpos), etc.

Retculo endoplasmtico liso Sistema de tbulos, muy abundante en clulas productoras de hormonas esteroideas como las clulas ovricas, C. Intersticiales del testculo, clulas de Sertoli, etc. Tambin est asociado su desarrollo a clulas con metabolismo no solo lipdico sino tambin de carbohidratos. RE funciones Sntesis de esteroides (ovarios, testculo, corteza adrenal) Destoxificacin (Hgado) Metabolismo de glcidos (Hgado) Msculo estriado: almacn de Ca. (ret. Sarcoplasmtico) Sntesis de triglicridos y otros lpidos Sntesis proteica.

.- Aparato de golgi

Funciones Sntesis de mucopolisacridos y glucoproteinas Empaca secreciones Restaurador de membranas Origina el acrosoma (espermatozoides) Puede originar lisosomas primarios

.-Sistema de vesculas

.-Lisosomas Sacos suicidas Contiene enzimas hidrolticas Asociado a digestin intracelular (macrfagos, glbulos blancos, hepatocitos, tubo contorneado proximal del rin) Digestin celular Heterofagia: pinocitosis, endocitosis, fagocitosis. Autofagia Microautofagia (protenas, glucgeno) Macroautofagis: mitocondrias, retculo endoplasmtico

Sistema inmunolgico se asocia con complejo mayor de histocompatibilidad, presentacin de antgenos. Lisosomas primarios (recin formado) Lisosomas secundarios: heterofagia y autofagia. Cuerpos multivesiculares y cuerpos residuales.

.- Peroxisomas Contenido homogneo finamente granular Origen: RER Catabolismo cidos grasos Producen enzimas como urato-oxidasas y amino-oxidasas asociadas a produccin H2O2 Catalasas (metabolismo H2O2)

ORGANELAS U ORGANITOS NO MEMBRANOSOS

.- Polisomas y Ribosomas Formados por dos subunidades: 40s y 60s Sntesis de proteinas para consumo interno (celular) 60 % RNAr y 40 % proteinas

.- Citoesqueleto FILAMENTOS o DELGADOS o INTERMEDIOS o GRUESOS MICROTBULOS

Citoesqueleto filamentos Delgados o finos (microfilamentos) o ACTINA Intermedios 7 nm de dimetro

o 10 nm de dimetro o Citoqueratinas o Vimentina o Desmina o Neurofilamentos Filamento acdico glial

Citoesqueleto: microtbulos Huecos de 25 nm de dimetro Subunidades de tubulina y (dmero) Protenas asociadas o Dineina o Cinesina o Protena Agregacin microtbulos (PAM)

.- Centriolo Bastoncillos o grnulos cercanos al ncleo y Golgi ME: par de cilindros ubicados perpendiculares entre si Asociados junto a microtbulos con la divisin celular (Huso acromtico)

.- Cilios y flagelos AXONEMA: disposicin de nueve dupletas de microtbulos alrededor de un par central Cilios: son cortos y numerosos en comparacin a flagelos; cubiertos por la membrana celular. Movimiento Flagelo posee axonema, pero es mas largo que cilios. Asociados a motilidad celular

Cilos

Flagelos

INCLUSIONES

Alimentos almacenados

Proteinceos, clcicos

Pigmentos o Endgenos Melanina Hemosiderina Pigmentos biliares o Exgenos Carotenos Carbn Slice Asbesto Cristales o o o Protenas Uratos Clcicos