Practica 1: Identificación de aminoácidos

Nombre de alumnos: Cota Valdez, N.; Flores Montoya, A.; López Armenta, M.; Ortega Ruelas, F.; Ruiz
Lugo, M. Docente: Dra. Castro Ochoa Lelie Denise
Instituto Tecnológico de los Mochis, Materia: Bioquímica del Nitrógeno y Regeneración Genética,
Grupo: T20

Resumen. Un aminoácido es una pequeña molécula orgánica que contiene, al menos, un grupo amino (-
NH2), de naturaleza básica, y un grupo carboxilo (-COOH), de carácter ácido. Todas las reacciones para
identificar aminoácidos y proteínas están basadas en la presencia de grupos químicos, en los enlaces o en
sus propiedades físico-químicas. Esta práctica se realizó con el objetivo de identificar por medio de
reacciones de coloración diferentes tipos de aminoácidos, utilizando Ninhidrina, reactivo de Millon y
HNO3 junto a NAOH al 40%, de los cuales obtuvimos seis resultados positivos.

La síntesis de proteínas incluye 20

Introducción
Un aminoácido es una pequeña molécula
orgánica que contiene, al menos, un grupo
amino (-NH2), de naturaleza básica, y un
grupo carboxilo (-COOH), de carácter
ácido. Aunque los seres vivos sintetizan
para distintos propósitos tipos diversos de
aminoácidos, sin duda los más importantes
son los que forman parte de las proteínas,
todos los cuales pertenecen a la clase de los
-aminoácidos. Éstos se caracterizan por
presentar los grupos ácido y amino unidos
al mismo átomo de carbono (que se
denomina carbono ). Además, a este
carbono  se une, como tercer sustituyente,
un átomo de hidrógeno y, como cuarto
sustituyente, un grupo adicional al cual se
le denomina cadena lateral del aminoácido
que identifica y da propiedades
características a cada uno de los
aminoácidos (De Paz, 2016).
Al ser los cuatro sustituyentes del carbono
 distintos y adoptar una disposición
tetraédrica en torno a él, los -aminoácidos
presentan isomería óptica, de modo que la
imagen especular de un aminoácido no es
idéntica al original. Así, dependiendo de la
disposición espacial de los cuatro
sustituyentes, los aminoácidos pueden ser D
o L. Todos los aminoácidos que aparecen
en las proteínas son L (Odeon, 2015).
instrucciones que corresponden a la orden
de incorporación de uno de entre 20
aminoácidos posibles. Estos 20
aminoácidos (todos ellos  y L) se conocen
como aminoácidos codificados
genéticamente o proteinogénicos. Algunas
proteínas contienen otros aminoácidos,
normalmente en baja proporción, que son
siempre resultado de alteraciones químicas
(a menudo catalizadas por enzimas) que
sufren los aminoácidos codificados
genéticamente después de su incorporación
a la proteína en el ribosoma. Estas
modificaciones se denominan
postraduccionales, pues tienen lugar
después de la “traducción” a proteína de la
información genética contenida en el RNA
mensajero (Odeon, 2015).
Todas las reacciones para identificar
aminoácidos y proteínas están basadas en la
presencia de grupos químicos, en los
enlaces o en sus propiedades físico-
químicas. Las reacciones de reconocimiento
pueden dividirse en dos grupos
independientes:
Reacciones de precipitación y reacciones
coloreadas, en estas últimas encontramos
la reacción de Biuret, de la Ninhidrina, del
Ácido Píerico, la Xantoproteíca, la Millon,
por mencionar algunas. Estas reacciones
permiten identificar a ciertos grupos de
aminoácidos de acuerdo a los grupos
funcionales que contengan (Linder, 2017).
Esta práctica se realizó con el objetivo de
identificar por medio de reacciones de
coloración diferentes tipos de aminoácidos.
Materiales y Métodos
Tomamos con una pipeta 1 ml de clara de
huevo la cual previamente fue diluida con
agua destilada en un vaso de precipitado,
adicionándola en el tubo de ensayo
etiquetado como A1. Después agregamos la
misma cantidad de aminoácidos en su tubo
de ensayo correspondiente tal como se
muestra en la tabla 1. Posterior a esto
añadimos 1 ml de Ninhidrina a cada
muestra y sumergimos en agua caliente
hasta obtener reacción.
Después de eso, tomamos 1 ml de clara de
huevo sin diluir y la agregamos al tubo de
ensayo B1, posteriormente tomamos la
misma cantidad de aminoácidos y los
adicionamos a su tubo de ensayo
correspondiente como se muestra en la
tabla 2. Una vez esto, mezclamos con 1 ml
de Millon y de igual forma sumergimos en
agua caliente hasta obtener reacción.
Por último, adicionamos 1 ml de clara de
huevo sin diluir en el tubo de ensayo C1 y
agregamos la misma cantidad de
aminoácidos en su tubo de ensayo
correspondiente tal como se muestra en la
tabla 3. Posterior a esto combinamos con 1
ml de HNO3 y calentamos a baño maría
hasta obtener reacción. Una vez obtenida la
reacción alcalizamos nuestras muestras con
NAOH al 40% y observamos los resultados.
Resultados y discusión
A) REACCIÓN DE NINHIDRINA
Para la prueba de Ninhidrina en una
primera etapa de la reacción, el aminoácido
se oxida, descarboxilándose y liberando
amoníaco, mientras que una de las
moléculas de ninhidrina de reduce a
hidrindantina. En el segundo paso de la
reacción, la hidrindantina formada con una
segunda molécula de ninhidrina, reaccionan
con el amoníaco formando un complejo de
color púrpura.
En este experimento la muestra que en este
caso es la clara de huevo diluida reacciono
de forma que se pudo observar un color
violeta dando un resultado positivo la
muestra contiene al menos un grupo amino.
Al ser un color violeta se puede suponer
que se trata de un aminoácido cuyo grupo (-
NH2) es primario.
También se realizó esta misma prueba para
los siguientes aminoácidos; tirosina,
arginina, triptófano y cisteína. La tirosina
reacciono con el reactivo de la ninhidrina
dando como resultado un color azul-violeta,
ya que en su estructura la tirosina tiene un
grupo carboxilo libre y un grupo amino por
otro lado, la arginina no reacciono con la
ninhidrina por lo que se puede asegurar que
no se agregó la cantidad suficiente de
reactivo de ninhidrina ya que, este
aminoácido debe de reaccionar de manera
positiva con la ninhidrina ya que tiene el
grupo carboxilo libre y amino, en el caso
del triptófano se pudo observar un color
violeta lo que nos indica que la reacción fue
positiva y por último se observó que la
cisteína reacciono de forma positiva dando
un color violeta cristalino.
Los resultados obtenidos con esta prueba se
muestran en la tabla 1 y en la Ilustración 1
se puede observar los colores que se
obtuvieron tanto para la muestra y para las
muestras problemas que este caso son los
distintos aminoácidos.
Tabla 1. Resultados obtenidos para la prueba de Ninhidrina.
A) Ninhidrina Color Resultado
Clara de
A1
huevo diluida
Violeta Positivo
A2 Tirosina Azul-Violeta Positivo
A3 Arginina * Cristalino* Negativo*
Violeta-
A4 Triptófano Positivo
Cristalino
Violeta-
A5 Cisteína
Cristalino
Positivo
Ilustración 1. Reacción de la Ninhidrina con diferentes
aminoácidos

B) REACCIÓN DE MILLON
Ilustración 2. Reacción de la Millon con clara de huevo y
La reacción de millón es debida a la diferentes aminoácidos.
presencia del grupo hidroxifenílico
(C6H4OH) en la molécula proteica.
Cualquier compuesto fenólico no sustituido
en la posición 3,5 como la tirosina, fenol y
timol, dan positiva la reacción. (Vázquez- Con la información anterior se puede inferir
Jorge, y otros, 2014) que ninguna de las soluciones problema
manejadas tendría la reacción esperada con
En una primera instancia se procede a la el reactivo de millón. De las soluciones de
nitración del anillo fenólico con el ácido la tabla 2, la glicina, arginina y cisteína se
nítrico del reactivo. La tirosina nitrada mantienen transparentes por la falta de un
forma complejos con los iones mercurio Hg grupo fenol en su estructura, mientras que
(I) y Hg (II) del reactivo produciendo un la clara de huevo y el triptófano obtienen
precipitado rojo o una solución roja, ambos una coloración amarilla como se puede ver
resultados positivos. (Universidad Nacional en la ilustración 2.
de la Patagonia San Juan Bosco, s.f.)
La explicación de la coloración amarilla
Tabla 2. Resultados obtenidos para la prueba de Millón. que existe en la clara de huevo y el
B) Millon Color Resultadotriptófano ocurre por la reacción
Clara de Amarillo con
B1 Positivoxantoproteica que ocurre acompañada a la
huevo precipitado de Millon, esto debido a que el reactivo de
B2 Glicina Transparente NegativoMillon es también poseedor de ácido
B3 Arginina Transparente Negativonítrico, es decir que ocurrirá dentro de esta
B4 Triptófano Amarillo Negativola identificación de grupos bencénicos
B5 Cisteína Transparente Negativo
como los tiene el triptófano y la albúmina C4 Triptófano Naranja Rojo +
(Proteína principal de la clara de huevo). Transparent
Transparent
C5 Cisteína
e
e con -
De acuerdo con (Ruiz Hidalgo, 2010) la precipitado
reacción del reactivo de Millon se le tiene
que agregar una solución de NaOH para
reaccionar completamente, es por esto por
lo que la albumina se mostró únicamente
amarillo sin cambiar al rojo esperado, sin
embargo, el precipitado visible se puede
considerar como la reacción de la albumina
con el reactivo de Millon, es decir con los
grupos fenólicos que se encuentran en la
proteína, como lo es el aminoácido tirosina.
C) REACCIÓN XANTOPROTEICA
La reacción xantoproteica es una reacción
que reconoce los aminoácidos que poseen
el grupo bencénico (tirosina, fenilalanina,
triptófano). Las proteínas que tienen en su
composición estos aminoácidos también
darán la reacción. La positividad se
reconoce por la aparición de un color
amarillo o verde debido a la formación de
nitrocompuestos (Vázquez-Jorge, y otros,
2014).
Como se pudo observar en la Tabla 3 e
Ilustración 3 los aminoácidos que
reaccionaron fueron únicamente los
aromáticos como es el caso de la tirosina y
el triptófano que reaccionaron con colores Ilustración 3. Reacción xantoproteica
amarillos esto debido a que los aminoácidos con clara de huevo y diferentes
se nitran dando este color característico. aminoácidos (sin alcalinizar).

Sin embargo, con la adición de álcali, el

residuo se vuelve naranja debido a la
formación de una sal de la forma
tautomérica del compuesto nitro (Passen,
2018). Es por eso por lo que al alcalinizar la
solución que contenía tirosina y triptófano
resultaron de colores naranja para el caso de
la tirosina y rojo para el triptófano.
Cuando se agregó NaOH al tubo C5
Tabla 3. Resultados obtenidos de la reacción xantoproteica. perteneciente al aminoácido cisteína se
C) HNO3 Color
Resultadpuede observar como una nube en la
+ NAOH Sin
al 40% alcalinizada Ilustración 4, debido a que ésta es uno de
alcalinizar
Clara de los aminoácidos más hidrofóbicos,
C1 Blanquizco Blanquizco
huevo pertenece al grupo de los aminoácidos
Amarillo polares sin carga y, como otros
C2 Tirosina Naranja
claro
Transparent Transparent
aminoácidos, puede ser degradada por
C3 Arginina
e e

Ilustración 4. Reacción xantoproteica

con clara de huevo y diferentes
aminoácidos (alcalinizada).
hidrólisis alcalina a elevadas temperaturas
(Puig, 2019).
Y por último se pudo ver (Tabla 3) que la
clara de huevo no reaccionó siendo que es
rica en proteínas las cuales están formadas
de aminoácidos entre ellos el triptófano, la
fenilalanina y la tirosina, esto debido a que
la clara de huevo estaba muy diluida por lo
que estos componentes se encontraban en
muy pequeñas cantidades impidiendo que
se distinga con una coloración la reacción
de estos.
Bibliografía

De Paz, C. (2016). Propiedades físicas y químicas de los aminoácidos. Obtenido de Química:

https://www.fullquimica.com/2016/02/propiedades-fisicas-y-quimicas-de-los.html

Linder. (2017). Aminoácidos y Proteínas . Obtenido de http://www.geocities.ws/todolostrabajossallo/orgaII_4.pdf

Odeon, A. (2015). Laboratorio de bioquimica propiedades de los aminoácidos. Obtenido de

https://www.academia.edu/37644756/Propiedades_de_aminoácidos_solubilidad_y_proteínas

Passen, M. (17 de Julio de 2018). Prueba Xantoproteica: Definición, Principio, Procedimiento, Resultado, Usos.
Obtenido de MicroBiio: https://microbiio.info/prueba-xantoproteica/

Puig, R. P. (31 de Agosto de 2019). Cisteína: características, estructura, funciones, biosíntesis. Obtenido de Lifeder:
https://www.lifeder.com/cisteina/

Ruiz Hidalgo, J. (Febrero de 2010). Estudio sobre la desnaturalización de proteínas y determinación de algunas
propiedades de las proteínas con segundo de bachillerato. Obtenido de Inovación y experiencias
educativas: https://archivos.csif.es/archivos/andalucia/ensenanza/revistas/csicsif/revista/pdf/Numero_27/
JAVIER_RUIZ_2.pdf

Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco. (s.f.). PROTEÍNAS, PÉPTIDOS Y AMINOÁCIDOS. Obtenido
de Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco:
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/farmacognosia/wp-content/uploads/2017/03/TP3-_PROTE%C3%8DNAS-
PEP-AA-2017.pdf

Vázquez-Jorge, Y., Guerra-Molina, L., Quintana-Tamayo, J., Ramírez-Arzuaga, J., Fernando-Ballestero, R., &
Vázquez-Jorge, Y. (2014). Caracterización físicoquímica y contenido de proteínas de extractos fluidos del
ostión de mangle (Crassostrearizophorae). Revista Cubana de Química, 66-74.