Sistema Cerrado

Equilibrio •Mayor desorden

•Menor capacidad para

realizar un trabajo útil

•No apto para sistemas

biológicos (muy
organizados)

JGP
 Sistema Abierto
(Sistema Biológico)

Impide el
Equilibrio

Materia Materia
 Sistema Biológico
•Intercambio de energía y materia
•Eficiente
•Capacidad de perpetuarse
•Altamente Organizado (funcional y estructuralmente)
•Posee mecanismos de regulación
•Isobárico
•Isotérmico

Por lo tanto no pude usar el calor como mecanismo de

transferencia de energía, por lo que recurre al trabajo
para este fin (catalizadores).
(catalizadores).
 ENZIMAS
CATALIZADORES BIOLÓGICOS
GLUCOSA + ATP hexoquinasa GLUCOSA 6P + ADP

EFICIENTES
AUMENTAN 106- 1012 VECES LA VELOCIDAD DE LA REACCIÓN.

NATURALEZA QUÍMICA
MAYORITARIAMENTE PROTEICA Mr: 12,000 - >1 x 106
Mr:
COFACTOR
IONES INORGANICOS: Fe2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+
COMPLEJOS ORGANICOS: COENZIMAS
GRUPO PROSTETICO
COENZIMA O IÓN METALLICO UNIDO COVALENTEMENTE A
LA ENZIMA
(halo)enzima = coenzima + apoenzima
 Clasificación de las enzimas
Nomenclatura: sufijo “asa”
Nº Clase Tipo reacción catalizada
1 Oxidoreductasas Transferencia de electrones
2 Transferasas Reacciones transferencia de grupos
3 Hidrolasas Reacciones de hidrólisis
4 Liasas Adición de grupos a dobles enlaces, o
formación dobles enlaces por eliminación de
grupos

5 Isomerasas Transferencia de grupos dentro de

moléculas dando formas isoméricas

6 Ligasas Formación enlaces C-C, C-S, C-O y C-N

mediante reacciones de condensación
acopladas a rotura de ATP
 Ej: ATP glucosa fosfotransferasa (Hexoquinasa)
D-glucosa → ADP + D-
ATP + D- D-glucosa
glucosa--6-fosfato
E.C. 2.7.1.1
REGULABLES
•Concentración de sustrato
•Acción de efectores
•pH y temperatura
•Modificación covalente
•Variación en la cantidad de enzima que se sintetiza
SUSTRATO
Molecula fijada en el sitio activo y sobre la que actúa la enzima

SITIO (CENTO) ACTIVO

Confines de una bolsa de la enzima donde tiene lugar una
reacción catalizada enzimáticamente
SITIO ACTIVO
•Porción relativamente pequeña
•Entidad tridimensional
•Sustrato se une a enzima por fuerzas débiles
•Sitios activos hendiduras
•Especificidad depende de disposición
exactamente definida de átomos del sitio
activo
•Para ello la enzima debe disponer de grupos
funcionales que permitan establecer
interacciones iónicas, puente hidrógeno, etc
etc..,
además de situarse en posiciones precisas
durante el estado de transición
transición..

•Grupos catalíticos específicos que contribuyen

con la catálisis:
catálisis:
Ácidos:: Glu
Ácidos Glu,, Asp
Básicos:: Lys,
Básicos Lys, Arg
Cys
Tyr,, Ser
Tyr
NO ALTERAN LA CONSTANTE DE
EQUILIBRIO DE LA REACCIÓN

K1
S P Keq = P = K1
S K2
K2
DISMINUYEN LA ENERGIA DE ACTIVACIÓN
Cada enzima que cataliza la reacción S→P,
cataliza también la reacción contraria P→S; la
acción enzimática radica en acelerar las
transformaciones mutuas de S y P (hasta
alcanzar el estado de equilibrio);
equilibrio); la enzima no es
utilizada en éste proceso, y no altera el equilibrio
de la reacción
reacción..
E. Fischer (1894) – Modelo “Llave
“Llave--Cerradura”

D. Koshland (1958) – Modelo del “Ajuste Inducido”

CINETICA

- Corresponde al estudio de las velocidades de

reacción y la forma en que cambian en
respuesta a cambios en los parámetros
experimentales..
experimentales
CINETICA
- Efecto de la concentración de sustrato sobre la
velocidad inicial de una reacción catalizada por
una enzima (manteniendo constante la [E])

•Velocidad inicial (Vo): número de moles de

producto que se forma por unidad de tiempo,
medidos antes de que se haya formado
suficiente producto para que permitir que ocurra
la reacción contraria (la [S] es generalmente
mucho mayor que la [E])

La Vo es siempre proporcional a la
concentración de enzima
enzima..
CURVA DE SATURACIÓN
 Ecuación de Michaelis-
Michaelis-Menten

Michaelis y Menten (1913)

1913) propusieron un modelo simple que explica
las características cinéticas de enzimas sencillas (no sujetas a
regulación), considerando:
considerando:

E + S ⇔ ES → E + P
Necesitamos una expresión que relacione la velocidad de catálisis con
las concentraciones de sustrato y enzima y las velocidades de las
etapas individuales.
individuales.
V = k3 [ES]
ES]
k1[E][S
V de formación de ES = k1[ ][S]
k3)[ES]
V de destrucción de ES = (k2 + k3)[ES]

Condiciones de estado estacionario

estacionario:: Las concentraciones de los
intermediarios permanecen invariables, mientras que las
concentraciones de los materiales de partida y de los productos van
cambiando ⇒ las v de formación y destrucción del complejo ES son
iguales
k1[E][S
k1[ ][S] = (k2 k3)[ES]
(k2 + k3)[ES]
[ES]
ES] = [E][S
][S]/ (k
(k2
2 + k3)/ k1(*)

Como:
Km = (k2 + k3)/ k1

Sustituyendo (*):
[ES] = [E][S
][S]/Km
/Km (**)
 Como:
[E] = [Et] - [ES]
ES]

Sustituyendo [E]:
[ES]
ES] = ([
([Et] - [ES]
ES])[S]/Km
/Km

Reagrupando:
[ES]
ES] = [Et] [S]/Km/1
/Km/1 + [S]/Km
/Km

O bien:
[ES]
ES] = [Et] [S]/[S] + Km
Km

Sustituyendo (**):
k3[Et] [S]/[S] + Km
V = k3[ Km

Como:
k3[Et]
Vmax = k3[

Sustituyendo se obtiene la ecuación de Michaelis-

Michaelis-Menten
Menten::

V = Vmax [S]/ Km + [S]

A baja [S], Km >> [S] ⇒ [S] ≅ 0 entonces
entonces,,
V = Vmax [S]/ Km
Km
dado que Km y Vmax son constantes ⇒ V ≅ K [S]

A alta [S], [S] >> Km

Km ⇒ Km ≅ 0 entonces,
V = Vmax

Cuando V = ½ Vmax
Vmax::
Vmax/2 = Vmax [S]/ Km
Vmax/2 Km + [S] /: Vmax
½ = [S]/Km
/Km + [S]
Km = [S]
CINETICA ENZIMATICA
ECUACION DE LINEWEAVER-BURK
1/V = Km / Vmax x 1/ [S]] + 1/ Vmax
 •Los valores de Km pueden variar considerablemente de una enzima a otra o
en una misma enzima con distintos sustratos.
sustratos.
• El valor de Km se utiliza (aunque no siempre correctamente;
correctamente; sólo si k3 <<
k2) para evaluar la afinidad de una enzima frente a su sustrato
sustrato..

Km = (k2 + k3)/ k1
(Kd = [E][S
en caso de que k3 << k2, ⇒ Km = k2/ k1 ⇒ Kd del complejo ES (Kd ][S]/[ES]
ES])
en estas condiciones Km es una medida de la estabilidad del complejo ES:
Km alta ⇒ unión débil
Km baja ⇒ unión fuerte

•En condiciones de saturación de la enzima, cuando la mayor parte de ella se

encuentra en la forma EP, es útil definir una constante de velocidad mas
general denominada kcat (es equivalente a k3) o número de recambio
recambio;; éste
corresponde al número de moléculas de sustrato convertidas en producto
por unidad de tiempo por una molécula de enzima cuando ésta está
totalmente saturada de sustrato
•Cuando [S] << Km se utiliza otro parámetro cinético para evaluar la
eficiencia catalítica,
catalítica, correspondiente a kcat/Km
Reacciones con múltiples sustratos
Reacciones con múltiples sustratos
Ej: acetil-
acetil-CoA carboxilasa:
INHIBICION ENZIMATICA
 INHIBICION ENZIMATICA
•Reversible (unión no covalente del inhibidor factible de
revertirse)
•Irreversible (unión covalente del inhibidor a la enzima,
incapacitándola)

Inhibición reversible:
a) competitiva
b) no competitiva
c) mixta
1a) Inhibición competitiva
 •Tanto el sustrato como el inhibidor pueden ajustarse al sitio activo
(competición)
•El sustrato puede procesarse por la enzima, mientras que el inhibidor no
•El inhibidor competitivo aumenta la Km aparente
A altas concentraciones de sustrato se minimiza la probabilidad de
que se fije una molecula del inhibidor ⇒ Vmax normal

Ej.:
Ej.: terapeútica en ingestión accidental de metanol
1b) Inhibición no competitiva

Se fija a un sitio distinto del que se fija el sustrato ⇒ nulo efecto sobre Km

La enzima se inactiva cuando está fijado el inhibidor, tanto si el

sustrato está o no está presente ⇒ disminución de Vmax aparente

Ej
Ej.:
.: bloqueo reversible de grupos –SH por acción de uniones con Cu o Hg
 1c) Inhibición mixta
La unión del inhibidor a la enzima puede modificar tanto el
Km como la Vmax

El inhibidor (que no tiene porqué parecerse al sustrato)

no se une al sitio activo aunque tiene efecto competitivo
competitivo..
La unión de uno y otro no son excluyentes
excluyentes.. El resultado
final depende de cual de los dos prevalezca
prevalezca..
 2) Inhibición irreversible
•Se combina el inhibidor con un grupo de la enzima, que es esencial para su
actividad o la destruyen (enlace covalente)
•Son, por lo general, sustancias tóxicas, naturales o sintéticas
•Reaccionan con un grupo funcional del sitio activo para bloquear el sitio
activo del sustrato o para dejarlo catalíticamente inactivo
•Gran utilidad para realizar estudios de mecanismos de reacción
enzimática
•Ej.: a) diisopropil fluorofosfato (DFP) (reacciona rápida e irreversiblemente con
los grupos hidroxilos de serina
serina))

Penicilina inactiva irreversiblemente a

la enzima clave en la síntesis de la
pared celular bacteriana, al unirse
covalentemente con una Ser del sitio
catalítico
Influencia de la temperatura sobre la velocidad de
reacción enzimática
Tº óptima
Influencia del pH sobre la velocidad de reacción enzimática
 Estrategias catalíticas
Ejemplo de mecanismos de reacción enzimático específico: serina proteasas
(quimotripsina)
Serina proteasas:
proteasas:
•Catalizan la hidrólisis de los enlaces peptídicos (o éster) en polipéptidos y
proteínas
•La mayoría, tienen estructuras tridimensionales semejantes y relación
evolutiva evidente
En el sitio activo siempre existe un residuo de aspartato (Asp102), un
residuo de histidina (His57) y un residuo de serina (Ser195) ⇒ triada
catalítica
•La quimotripsina cataliza la hidrólisis de enlaces peptídicos o éster
en 2 etapas distintas (cinética de hidrólisis del acetato de p-
nitrofenilo)

a) acilación:
acilación: combinación del acetato de p-nitrofenilo con quimotripsina para
formar el complejo enzima
enzima--sustrato (unión covalente), liberándose p-
nitrofenol (etapa rápida)
b) desacilación
desacilación:: hidrólisis del intermediario acetil-
acetil-enzima, regenerándose la
enzima libre (estado estacionario;
estacionario; etapa más lenta)
•cuando se emplean grandes cantidades de enzima, se produce una explosión
rápida inicial del producto p-nitrofenol, seguida por la formación del producto
a una velocidad mucho mas lenta, en régimen de estado estacionario
 REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Es esencial para el flujo ordenado del metabolismo
Mecanismos de regulación enzimática
•Control a nivel de sustrato
•Interacción directa de los sustratos y los productos de cada reacción
catalizada enzimáticamente con la propia enzima

•Control por retroacción

a) Retroacción negativa (retroinhibición

retroinhibición)):
Un aumento de la concentración del producto E ⇒
descenso en la velocidad de producción por del
primer paso de la línea metabólica ⇒ eficiente
regulación de rutas metabólicas complejas
b) Retroacción mediante activación o inhibición en patrones metabólicos más
complicados::
complicados

Para controlar las rutas de manera que G y N se mantengan en
equilibrio:: las concentraciones elevadas de G podrían inhibir la enzima C
equilibrio
→ D y/o activar la enzima C → K (a la inversa de N)
N);; también tanto G como
N pudieran inhibir la enzima A → B para establecer una regulación global
 Enzimas alostéricas
•Control de las rutas producidas por moléculas procedentes de un lugar
alejado de la línea de montaje, que no se parecen a los sustratos ni a los
productos directos de las enzimas a regular (alostérico ⇒ “otra estructura”)

•Funcionan a través de la unión reversible, no covalente, de un metabolito

regulador denominado modulador .

•En las enzimas alostéricas heterotrópicas el sitio de fijación del sustrato y el

sitio(s) de fijación del modulador se encuentran en subunidades diferentes,
la subunidad catalítica (C) y la reguladora (R)(R);; la fijación del modulador
positivo (M) a su sitio específico en la subunidad R (sitio regulador o
alostérico)) ⇒ cambio conformacional en ambas subunidades ⇒ activación
alostérico
de la subunidad C ⇒ fijación del sustrato con mayor afinidad
•En las enzimas alostéricas homotrópicas el propio sustrato es a menudo un
activador, siendo entonces el sitio activo y el sitio regulador el mismo

•El sitio regulador (alostérico) es específico para su modulador

modulador;; las enzimas
con varios moduladores tienen generalmente diferentes sitios de fijación
específicos

•Son mayores y más complejos que las enzimas sencillas, poseyendo la

mayoría 2 o más cadenas polipeptídicas o subunidades

•Presentan propiedades cinéticas diferentes;

diferentes; dan lugar a una curva de
saturación sigmoídea cuando se representa Vo frente a [S]. En vez de Km se
utiliza el símbolo K0.5 o [S]0.5, para representar la concentración de sustrato
que da la mitad de la Vmax
(+): activador (0) : control (-): inhibidor
•El comportamiento sigmoideo es generalmente reflejo de interacciones
cooperativas entre múltiples subunidades proteicas;
proteicas; la fijación de una
molécula de sustrato a un sitio de fijación altera la conformación de la enzima
facilitando mucho la fijación de otras moléculas de sustrato.
sustrato.
•Para evaluar la cinética sigmoide de la saturación, se utiliza la gráfica de la
ecuación de Hill, que escrita de manera lineal es:
es:

log V/Vmax
V/Vmax –Vi = n log[S] – log K
(y =m x + b)

•n corresponde al coeficiente de
Hill, que es una medida del grado
de cooperatividad
cooperatividad::
•n = 1 ⇒ la unión del ligando no
es cooperativa (cinética de
Michaelis--Menten
Michaelis Menten))
•n > 1 ⇒ hay una cooperatividad
positiva en la unión del ligando,
donde la unión de una molécula
de ligando facilita la unión de
otras
•n < 1 ⇒ cooperatividad negativa,
donde la unión de una molécula
de ligando dificulta la unión de
otras
Modelo concertado (fig
(fig.. a) Modelo secuencial (fig.
(fig. b):
b):
 Modificaciones covalentes
•Se modula la actividad por modificación covalente de la molécula enzimática

•Grupos modificadores
modificadores:: fosfato
fosfato,, adenosina monofosfato (AMP), uridina
monofosfato (UMP), adenosina difosfato ribosa, metilo
•Los grupos se unen covalentemente y se eliminan de la enzima reguladora
por otras enzimas (proceso reversible
reversible))
•Ej.:
Ej.: regulación por modificación covalente (fosforilación) de la glucógeno
fosforilasa,, que cataliza la siguiente reacción:
fosforilasa reacción:
 Activación por escisión proteolítica
•Se parte de un precursor inactivo de la enzima denominado zimógeno (o
proenzimas);; éstos pasan a ser catalíticamente activos cuando sufren la
proenzimas)
ruptura
•Muchas enzimas proteolíticas (proteasas) del estómago (pepsinógeno →
pepsina) y del páncreas (quimotripsinógeno → quimotripsina
quimotripsina;; tripsinógeno
→ tripsina
tripsina;; proelastasa → elastasa) resultan así activadas

•La rotura específica produce cambios conformacionales que hace asequible

el sitio activo de la enzima

•Tipo de activación irreversible ⇒ se requieren otros mecanismos para

inactivarlas (proteínas inhibidoras que se fijan fuertemente al sitio activo de la
enzima ej.: α1-antiproteinasa, inhibidor de tripsina pancreático, etc.
enzima;; ej.: etc.)

•Otros ejemplos de activación de zimógenos:

zimógenos: hormonas, tejido conjuntivo y
sistema de coagulación sanguínea

BQ Javier Grandón