PRÁCTICA NO.

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PREPARACIÓN DE MATERIAL DE LABORATORIO

OBJETIVO:
Aprender las técnicas para la preparación del material de laboratorio usado en microbiología para su posterior
esterilización.

FUNDAMENTO TEÓRICO
En microbiología es necesario manejar para su práctica el menor número de variables posibles, entre las
variables que se pueden controlar se encuentra el material utilizado dentro del laboratorio, el material de
vidrio e instrumental que se utilizan deben estar limpios, seco y libre de cualquier tipo de contaminantes.
Otro paso importante es el enjuague del material, éste debe ser suficiente y adecuado usando para ello agua
destilada con la finalidad de eliminar residuos de las soluciones detergentes, las cuales se ha demostrado que
pueden inhibir el crecimiento de los microorganismos o bien alterar el pH de algunas reacciones.
Una vez realizado estos pasos se deberá esterilizar todo el material, sí como protegerlo adecuadamente para
que se mantengan estériles hasta su uso.

MATERIALES:

 Cajas de Petri  Tubos de ensayo de 20 ml con rosca

 Pipetas de 1 ml  Vaso de presipitados de 500 ml
 pipetas de 5 ml  Espatula
 pipetas de 10 ml  Algodón
 puntas para micropipeta  3 Papel manila /estrasa / kraft
 Matraz Erlenmeyer de 1000 ml  Manta de cielo 1 metro
 Matraces erlenmeyer de 300 ml  Tijeras
 Tubos de ensaye de 16 x 150 con rosca  Regla escolar
 Tubos de ensaye de 16 x 150 sin rosca

METODOLOGÍA:

1.-LAVADO: Lavar con agua y jabón todo el material de cristal.Enjuagar con abundante agua de la llave y
finalizar con un enjuague de agua destilada. Cuando el material de laboratorio tenga partículas incrustadas es
necesario utilizar HCl concentrado o mezcla crómica, durante 10-15 minutos y lavar. Tratar estos desechos
adecuadamente. Enjuagar con agua destilada todo el material y dejarlo secar.

2.-PREPARACIÓN DEL MATERIAL

a) Cajas de Petri :La manera de envolver las cajas se describe a continuación:

1. Se corta papel dextrasa, de tamaño adecuado para el

número de cajas que se deseen envolver y se colocan
las cajas en el centro del papel.
2. Los bordes de los costados se unen al centro
cubriendo las cajas que se envuelven.
3. En la parte superior se unen los bordes de ambos lados y esta unión se dobla a la mitad.
4. Se hace un segundo doblez, quedando recargado éste sobre las cajas. (fig.1) FIG.1
5. Al papel se le presiona a los costados quedando al relieve el volumen de las cajas envueltas en el papel.
6. Se doblan las puntas del papel de cada una de las esquinas al centro.
7. Se le dá vuelta al material, quedando el doblez hacia abajo.
8. Las puntas salientes del papel en los lados de las cajas se doblan hacia arriba y al centro de las cajas y se les
asegura con cinta adhesiva.

b) Pipetas: Una vez limpias y secas con un clip se le introduce en la boquilla de succión un pedazo de algodón,
de forma de que el algodón entre suavemente y sin romperse con la presión del clip

1. Se corta una tira de papel dextrasa de aproximadamente 3 cm de

ancho y 35 cm de largo.
2. Se dobla el extremo inferior aproximadamente 2 cm.
3. Se coloca la pipeta con la punta a la mitad del doblez anterior y
con un ángulo de aproximadamente 25 – 30 grados de inclinación
con respecto a la posición del papel dextrasa. (fig.2)

4. Se le hace un segundo doblez, tapando la punta de la pipeta con la porción de papel que sobresale a la
FIG.2
punta de la pipeta.
5. Se le hace un tercer doblez a la punta de la pipeta que queda en el ángulo de inclinación, de manera que
cubra completamente la punta de la pipeta.
6. Se dá vuelta a la pipeta procurando que el papel vaya envolviéndola en forma de espiral.
7. Verificar que el enrollado no quede flojo, en caso de estarlo, reafirmar el papel con respecto a la forma de
la pipeta.
8. En la parte superior, doblar hacia abajo el papel sobresaliente.
9. Cubrir con cinta adhesiva dicho doblez.

c) Elaboración de los gorros Para tener una base para el cálculo del gorro, tenemos que
aproximadamente con un pliego de papel dextrasa de tamaño carta, se obtiene un gorro
adecuado para tapar un matraz de 500 ml. Los pasos principales para la elaboración de ellos es
la siguiente:

1. Se corta el papel dextrasa en forma de rectángulo, del tamaño según se necesita.

2. Se dobla el papel a la mitad con respecto a la parte larga del mismo.
3. Se doblan las puntas superiores, uniéndolas por el centro. FIG.3

4. De la parte inferior se dobla hacia arriba al borde de la hoja que queda encima, hasta la altura de las puntas
unidas y se le da media vuelta al papel.
5. Se doblan las puntas de los lados, hasta la altura donde sobre sale el doblez del inciso no. 4.
6. De la parte inferior se dobla hacia arriba, el borde sobresaliente de la hoja hasta el doblez interior. se le da
media vuelta al papel obteniéndose de esta manera el gorro. (fig.3)

d) Espátulas. Envolver la espátula con papel y colocarla en un bote.

e) Elaboración de tapones de algodón Los tapones son utilizados en los diferentes tamaños de tubos y
matraces, por lo que el procedimiento presentado es una forma generalizada. Como base para la elaboración:
con una tira de algodón de (15 – 20 cm de largo, 3 cm de ancho y un grosor de 0.5 cm) aproximadamente, y
con una gasa de 10 x 10 cm, se obtiene un tapón adecuado para un matraz de 500 ml.

Los principales pasos para la elaboración de tapones de algodón se describen a continuación:

1. Se corta una tira de algodón, de largo adecuado a las necesidades (ya sea para los tubos de ensayo o para
el matraz de 500 ml).
2. Con una pinza de disección se prensa uno de los extremos.
3. Se enrolla el algodón en la pinza, de una manera que quede firme el enrollado.
4. Por otro lado, se corta el cuadro de gasa adecuado al tamaño requerido y se
coloca en la boca (en el del matraz o de los tubos de ensayo según sea el caso),
procurando centrarlo.

5. Con la pinza y el algodón enrollado en ella, la gasa se presiona hacia adentro del
FIG.4
matraz, de manera que entre uniformemente por todos lados a la boca de este, dejando a flote la punta
superior del algodón. La pinza es sacada del algodón dando una vuelta en sentido contrario al enrollado
para que afloje, y jalando hacia arriba presionando el algodón para que no salga de la boca del matraz o de
los tubos de ensayo.
6. Hasta este paso, deben quedar cuatro puntas de la gasa colgado a los lados de la boca del matraz: dos de
las puntas que se encuentran opuestamente, se amarran entre si formando un lazo.
7. Luego se amarran las otras dos puntas restantes, obteniéndose de esta manera el tapón de algodón. (fig.4)

f) Puntas para micropipeta. 1.-Envolver en papel las puntas para micropipeta.

g)Tubos de ensaye: 1.-Colocar los tubos en un vaso de precipitados y cubrirlos con papel Kraft (esta envoltura
protege los algodones.

NOTA: Todo el material debe ser identificado con su correspondiente etiqueta antes de ser esterilizado.

REGISTRO DE RESULTADOS

Mostrar evidencia de cada uno de los proceso practicados. Incluir observaciones como :medidas del papel ,
dificultadades que se presentaron y los errores que cometió durante el desarrollo de esta práctica, así como las
consecuencias de estos en el desarrollo de la siguiente práctica de laboratorio.

CUESTIONARIO:

1.-¿Porqué es importante lavar previamente todos los materias antes de esterilizarlos?

2.¿Qué características de un material se necesita concocer para elegir el método adecuado de esterilización?
3.-¿Qué tipo de contaminantes microbianos se encuentran con mayor frecuencia en las cajas de Petri?
4¿Cuáles son las recomendaciones para guardar el material esteril?

REFERENCIAS:
Velasco Lezama R. ,Tapia Aguilar R.,2014.Curso Práctico de Microbiología, México, UAM.
https://itescam.edu.mx/principal/docentes/formatos/f3051a7c1a20d76b2013aaf7c7bf6fa0.pdf

PRÁCTICA NO. 4
ESTERILIZACIUÓN POR CALOR HÚMEDO

OBJETIVO:
 Conocer y practicar el correcto uso del autoclave.

FUNDAMENTO TEÓRICO:

El término esterilización es absoluto y comprende los mecanismos físicos o químicos que conducen a la
eliminación de todo tipo de microorganismos, incluyendo su capacidad de reproducción; esto se consigue con
agentes químicos a concentraciones adecuadas o con métodos físicos como el calor húmedo, calor seco,
radiaciones ionizantes, no ionizantes, vibraciones sónicas y microondas. El método depende del tipo de
material. El método más utilizado es el calor húmedo y requiere de un equipo llamado autoclave, este consiste
en: una cámara cuyo fondo es un depósito para agua destilada que se calentará por medio de una resistencia
eléctrica o una fuente externa de calor y que genera vapor. La cámara se cierra herméticamente por medio de
una tapa en la cual se encuentran el termómetro, el manómetro y una válvula de seguridad que regula la
presión evitando accidentes. En la parte inferior y exterior de la cámara existe un dispositivo que mide el nivel
de agua destilada, así como una llave de salida de agua y un termostato. El material a esterilizar se coloca en
una canastilla ubicada sobre el depósito de agua.

MATERIALES:
Autoclave Tina pequeña
Agua destilada Materiales preparados en la práctica anterior
Lienzo de tela

METODOLOGÍA:

Colocación del material en el autoclave:

 Introducir al autoclave un solo tipo de material, es decir solo cristalería o solo medios de cultivo o
disoluciones.
 No se debe esterilizar al mismo tiempo material ya utilizado con material recién lavado y envuelto.
 Colocar el material de manera espaciada sin sobrecargar la canastilla para que la circulación del vapor sea
adecuada.

Esterilización Por Calor Húmedo

1. Llenar el autoclave con agua destilada hasta el nivel marcado.

2. Conectar el autoclave
3. Colocar en el contenedor de aluminio el material por esterilizar
4. Cerrar y atornillar la tapa el autoclave girardo todas las llaves de forma encontrada.
5. Dejar la válvula de seguridad abierta. colocar el termostato al máximo de calentamiento.
6. Una vez que salga el vapor por la vávula de seguridad, esperar al menos 5 minutos para permitir que todo
el aire del interior sea expulsado, posteriormente cerrar la vávula (aproximadamente de 90°C)
7. Cuando la presión sea de 1 atm o una temperatura de 121ºC, disminuir la intensidad de calentamiento
para mantener constante las condiciones requeridas. NUNCA DEJAR DE OBSERVAR EL AUTOCLAVE.
8. Al finalizar el tiempo de esterilización apagar el autoclave bajando el termostato apagado /desc. y
desconectarlo.
9. Posteriormente abrir la válvula de seguridad, permitir que el vapor remanente salga libremente.
10. Cuando la temperatura disminuya a 70 °C, abrir la tapa. Utilizar guantes de carnaza o asbesto, las llaves
deben aflojarse de la misma forma en que se apretaron, es decir, de forma encontrada.
11. AL ABRIR, COLOCARSE A UN LADO DEL AUTOCLAVE NUNCA DE FRENTE PARA EVITAR QUEMADURAS.
12. Asegurarse que la tapa del autoclave se encuentre completamente abierta.
13. Sacar cuidadosamente la canastilla y esperar a que se enfrié.
14. Guardar el material ya frío en un lugar asignado por el docente

REGISTRO DE RESULTADOS
Realizar un dibujo con las partes del autoclave. Mencionar las consideraciones que se den tomar en cuenta
para un buen funcionamiento del autoclave, así como las recomendaciones descritas por el docente.

CUESTIONARIO

1. Defina estos conceptos: Esteril, desinfectante, germicida, microbiostático, antiséptico

2. ¿Por qué es importante vigilar en todo momento la temperatura y presión del autoclave?
3. Describa los métodos físicos y químicos para la esterilización y en qué casos se utiliza cada uno de ellos.
4. ¿Qué es la cinta testigo, cuáles son los sensores químicos, su composición y el fundamento?

REFERENCIAS
Castillo Castillo J, et al., (s/f), Introducción al Análisis Bacteriológico.México, UNAM
Lara Colli C., (2004), Manual de prácticas de microbiología, México, ITSSY.