Practica No. 9 Analisis de funciones organicas Ensayos preliminares 9. IPARTE : ensayos generales. 1. Constantes Fisicas 2. Preliminares, 2.1 Ignicién. 2.2 Indicadores: rojo congo, papel indicador,12S04,Na(OH). 2.3 Insaturacion activa: Br2/CCI4, KMnO4 (Baeyer) 2.4 Aromaticidad: ama y friedel crafts 2.5 FeCl3 Analisis elemental C,H,O,N.S,X Clasificacién por solubilidad. pw 9.1 Objetivos © Conocer algunas pruebas sencillas de laboratorio en las que cualitativo elemental orginico. © Identificar a través de reacciones especificas, los elementos mas comunes que constituyen a los elementos mas comunes que constituyen a los compuestos orgénicos. © Adiestrarse en el manejo de pequefias cantidades de sustancias que requiere este tipo de trabajo analitico. se basa el anilisis, 9.2 Fundamento Te6rico En la identificacién de una sustancia orgénica desconocida de llevan a cabo las siguientes pruebas para obtener informacién sobre esta y asi poder Wegar a la identificaci6n. 9.2.1 Estado fisico Debe anotarse si la sustancia orgénica el liquida o solida. Esta informacion es usada para consultar tablas de compuestos las cuales es gran niimero de libros estan divididas en esta base. 9.2.2 Pureza del compuesto — En el caso de que Ja sustancia sei na destilacién simple sobre una iones. Si las diferencias en los Ph indices de refraccién no difiere si ese valor es 6L8.5 Temas de Consulta: L. Solucién saturada y sobresaturada, Solventes para cristalizacién y recristalizacién. 2. 3. Introduccién a la cristalizacién. 4. Formacién de nitcleos y crecimiento de cristales. 5. Usos de la acetanilida y sus derivados. 6. Usos de la aspirina, 8.6Preguntas: hay entre la estructura molecular y la cristalizacién de una 1. Qué relaci sustancia? Ia obtencién de derivados halogenados, 2. Mediante reacciones explique sulfonados y nitrados en posicién para que dé la anilina, mediante la protec del grupo amino idas: Nylon 6, Nylon 66 y Nylon 6,10. Tipos de poli » Cristalinidad de las amidas y su aplicacién 5. En Ja purificacion de un sélido por recristalizacién en un disolvente, qué es aconsejable, enfriar Ia solucién répida o lentamente? Expliquese Cui es el requisito més importante para la cristalizacion de la cafia de aziicar? 6. 7. De qué factores depende la rata e cristalizacion de cafia? 7 gratia: © BREWSTER, R. Q,, C. A. WANDER y _ Curso prictico de quimica orgéntea Wiley, S.A., México, 1973, DURST, H, DUPONT. GOKEL, Editorial Reverté S.A, 1985.Muchos tipos de compuestos tienen olores earacteristicos. No es posible deseribir los lores de una maneta precisa, pero se pueden relacionar los olores de a compuestos. En general los esteres tiene olores agradables; los mereaptanos, isonitrilos y las pentametilendiaminas tienen olores desagradables. Dentro de los que tienen olores caracteristicos tenemos también los fenoles, las aminas, los écidos. El benzaldehido, el nitrobenceno y el benzonitrilo tienen olores a almendras amargas; sin embargo, cl olor es mas pronunciado en los compuestos de bajo peso molecular. 9.2.4 Color La gran mayoria de los compuestos or colores definidos debido a la presencia -g4nicos sin incoloros; sin embargo, muchos tiene ‘de grupos cromoforos en la molécula, Los nitro compuestos son generalmente amarillos, los nitroso compuestos generalmente son fazules o verdes cuando estén fundidos o en solucién; los azo compuestos y mucho derivados del trifenilmetano son altamente coloreados lo mismo que los compuestos con estructura quinofdea. Muchos fenoles y arilaminas desarrollan color durante el almacenamiento debido a oxidacion: en otros compuestos el color se deba a impurezas que desaparecen 0 disminuyen al purificar el compuesto. Asi, el fenol que es incoloro, presenta una coloracién rojiza; és incolora pero pronto adquiere un color rojo oscuro. 9.2.5. Forma cristalina. Las muestras solidas se examinan al microscopio para determinar si la sustan: homogénea ono; para un anélisis més amplio puede usarse un microscopio con polarizador. Las diferencias en Ia apariencia cristalina pueden deberse a que la sustancia ee una mezela o presenta polimorfismo; sin embargo, hay que tener en cuenta el hecho de que varias sustancias tienen cristales similares. 9.2.6 Ensayo de ignicién ‘Muchas cosas acerca de una su la anilina recién destilada es istancia pueden saberse por este ensayo: si la sustancia es Tiquida, eoloque 5 a 10 gotas en un erisol de porcelana, acerque la Hama del mechero y determine la inflamabilidad y la naturaleza de ta lama; luego caliente con llama pequeita y de vez-en cuando aplique la lama ditectamente sobre la sustancia, de manera {que entre en ignicién antes de que se volatilice, Si el compuesto es sélido coloque unos pocos cristalites en un erisol de porcelana y Caliente con llama pequeia; observe si funde y de qué forma, si lenta o ripidamente; note si se desprenden gases 0 vapores (tenga cuidado porque algunos de estos gases pueden ser nocivos) y determine se son dcidos 0 basicos, usando un papel tornasol humedecido. Si el compuesto se carboniza, caliente fuertemente hasta que el residuo sea casi blanco o no deje residuo. Si permanece residuo, deje enftiar, luego disuélvalo eon una gota de agua y ensaye esta Solucién con papel tornasol; después afiada una gota de HCI 10%, observe si se desprenden gases. Si esto ocutre, se determina el metal presenta haciendo un andlisis cualitativo inorgdnico al resi My tied ‘Muchos liquidos arden con llama caracteristica, que ¢ compuesto. Asi los hidrocarburos arométicos dan | hollin, debido a su alto contenido de carbono. Los hi ticos dan Ham: amarilla pero con menos hollin, Si el contenido de 0} Hlama se vuelve azul con el caso de los alcohol con llama fuliginosa; los poli halogenados no ent aplica directamente a la sustancia, y uliginosa con bastanteLos azucares arden con olor a quemado. Sila sustancia explota o es inflamable, es un dato que sirve para trabajar con precaucién en los ensayos futuros del compuesto, . ear Si queda un residuo permanente casi blanco indica presencia de metales, si se trata de mmetales alcalinos estos de encontraran en estado de carbonato que da reacci6n alcalina al tomasol y desprenden CO2 en el HC; si son alealinotérreos se encontraran como Oxidos que también dan reaccién alcalina, y si hay oxigenos anféteros dardn reaccién acida al torasol. El mercurio y el atsénico no dejan residuo. Si esta presente el hierro 0 elcromo, el residuo puede ser coloreado, Panela quemada y las proteinas con olor eacho © cuerno 9.3 Ensayo con indicadores 9.3.1 Papel indicsdor universal Con este ensayo puede determinarse cl pH aproximado de la sustancia; para esto coloque 10 mg de la sustancia en un vidrio de reloj y agréguele 0,5c.c. de agua; ensaye esta solucién con papel indicador universal y compare con la tabla patron, Para los s6lidos se aconseja también colocar un cristal sobre el papel y agregar una gota de agua, observar la reaccién en los bordes de la gota, 9.3.2 Ensayo con tornasol Se realiza en caso que no tenga indicador universal Se hace lo mismo que el ensayo anterior pero usando papel tornasol rojo 0 azul con los cuales se determina si la sustancia es de caricter acido, basico o neutro, Coloque 10mg de compuesto en una tapa de porcelana y afiada dos gotas de solucién indicadora de Rojo Congo. Un color azul indica un pH menor de 4,8, si el color es rojizo indica un pH mayor a 4,8. 9.4 Accidn de Acidos y bases 9.4.1 Con bicarbonato de sodio Puede comprobarse la presencia de un acido 0 de compuestos que hidrolicen para dar acidos mas fuertes que el carbénico. De la siguiente manera: disuelva unos 50 a 100 mg de sustancia en 1 c.c. de agua y aflada unas gotas de solucién saturada de bicarbonato de sodio; el desprendimiento de un gas (burbujas) indica la presencia de un acido. Si la sustancia es insoluble en agua se disuelve en 1 c.c. de alcohol y se aftade un volumen igual de agua, antes de afladir el bicarbonato. 9.4.2 Con acido sulfirrico concentrado Coloque unos 100mg de la sustancia en un tubo de ensayo seco y agregue I c.c. de acido sulfirico concentrado, agite y observe la reaccién si la sustancia se disuelve 0 no, si hay desprendimiento de gases con o sin efervescencia, si hay desprendimiento de calor 0 cambio color. Caliente con cuidado (de preferencia es una viteina y protegiendo la cara); muchos dcidos desprenden gases con efervescencia como el formico y el oxélico y sin efervescencia como el acético, benzoico, etc. Otros compuestes se carbonizan como los carbohidratos y algunos hidroxidcidos (citrico y tartarico), Algunos compuestos de diferentes tipos dan coloraciones en frio o en caliente. Algunas se dan a continuacién: ‘Compuesto colar Indeno Rely a-pinemo rojo) Fluoreno Azul (Calentado por dos minutos) 1 L wy" COGGGOGCOMN Wh bh \ y \ OOO \Fluoranteno Verde azuloso Verde en caliente Antraceno Trifenil carbinol ‘Amarillo brillante Timol ~_[ Rojo en caliente Fenolftaleina Rojo. Naranja rojizo. Benzhiddrol Floroglucinol ‘Amarillo verdoso Pirogalol Violeta claro. ‘a:nitro naftaleno Rojo sangre, Carbazol ‘Amarillo Piperonal ‘Amarillo Benzalcetona Naranja rojiz ‘Amarillo fuerte Benzalacetofenona Fluorenona Rojo violeta Fenatraquinona Verde oscuro ‘Acido Bencilico Rojo ‘Acido galico Purpura eb caliente ‘Acido cinamico Verde, rojo oscuro en caliente ‘Azo compuesto ‘Amarillo o rojo Tirosina Rojo en caliente Tabla 9.1 9.4.3 Con hidroxido de sodio agitacion. Coloraciones Trate de 200mg se sustancia con 2 c.c. de NaOH al 10% y agite la mezela; observe lo que sucede; si en fiio no hay reaccién o caml apreciable, caliente la mezcla con Consideraciones Los dcidos, los fenoles y las oximas se disuelven en frio. Los cloruros de acido y los anhidridos de acido se disuelven al calentar y agitar la mezcla, Las quininas y los polihidroxifenoles dan una coloracién negra. Los aldehidos pueden resinificarse al calentatlos. Los nitrofenoles dan soluciones rojas 0 amarillas. El amoniaco, que se reconoce con un papel tornasol humedecido, es puesto en libertad 1 partir de diferentes tipos de compuestos: en fio, de las sales de amoniaco; por calentamiento moderado, cle las amidas, imidas y uretanos; por ebullicién durante algunos minutos, de los nitrilos. Los derivados de la piridina, desprenden el olor de ésta al ser calentados por élcali 9.4.4 Ensayo de cal sodada : Mezele unos decigramos de la sustancia con un gramo de cal sodada, colbquela en un tubo de ensayo seco, agregue una cantidad igual de cal sodada encima de esta mezcla; Caliente fuertemente, colocando un papel tornasol rojo humedecido con agua, en la boca del tubo, sin tocarlo o una varilla humedecida con reactivo de Nessler. Si hay desprendimiento de amoniaco el papel tornasol virard a azul 0 al reactivo de Nessler tomara una coloracién marrén © Consideraciones ee Este método es itil para Ia investigecion eualitativa del nitrégeno y se basa <4 la oes propiedad que posees os hidréxidos alcalinos s6lidos y mej a cal (mezela de NaOH y CaO) de formar nani Jose caie oa n con eiertas sustancias orgdnieas nitrogenadas, Este método descrito no sirve para sustancias que como en los grupos nitroso y nitro, Pero si ant cain ZENO Uni mils inacido oxalico, es posible obtener resultados positivos. En lugar de papel tornasol rojo 0 de reactivo de Nessler, puede usarse, para detectar el amoniaco, un papel de filtro impregnado con unas gotas de solucién de sulfato de cobre al 10% el amoniaco reacciona con los iones cobre en el papel y desarrolla un color azul. 9.4.5 Ensayo de Insaturacién activa Para reconocer los compuestos no saturados se realizan el ensayo con bromo en CCI4 y el ensayo de permanganato de potasio y se comparan los resultados de acuerdo a la (tabla 9.1). 9.4.6 Ensayo con bromo CCl4 El bromo puede formar compuestos de adicién con casi todos los compuestos insaturados. También puede reaccionar sustituyendo hidrogeno por bromo en compuestos que son ficilmente bromados pero en este caso hay desprendimiento de acido bromhidrico. Reacciones generales: 7 |e 1 f cho + or om CH s0, Cg HyCH2(CgH4CHa)n.2 + CgH,CH” + HSO 4 HCH,” + HO, Puesto que Ia reaccién del formaldehido con el niicleo aromatico y ta posterior polimerizacién son inhibidas por grupos sustituyentes que atraen electrones, solo se Obtiene reaccién positiva cuando el niicleo no esta desactivado por sustituyentes tales ‘como: -Cl, -SO3H, -COOH, -CH2N (+), -(R)3. ee Los compuestos que contiene el anillo bencénico dan colores rojos; los q anillos polinucleares dan complejos verdes, azules o pirpt * Procedimiento Prepare una soluci6n de 30 mg. Del compuesto a ensayar en ‘aromitico (hexano, ciclohexano 0 CCI4), en otro tubo de er 12804 concentrado y aitadale una gota de formalina (rom ? reactivo agréguele 1 0 2 gotas de la solucién del compuest color de la capa superior cuando afiada el compuesto y desDebe hacerse un ensayo en blanco, con el solvente, con el objeto de comprobar si contiene impurezas aromaticas. © Consideraciones En el ensayo puede sustituirse el formaldehido por unos pocos mitigramos de trioxano. Algunos colores caracteristicos obtenidos en este ensayo son 6: benceno, tolueno y butilbenceno dan color rojo; sec-butilbenceno da rosado; terbutilbenceno y mestileno. dan anaranjado; difenil y tri-fenil benceno dan azul o verde-azul; haluros de arilo dan rosado 0 pirpura; naftil éter da pirpura, algunos cicloalcanos y sus derivados halogenados no dan color o dan amarillo palido y muchos de ellos precipitan. Con el tiempo, la mayoria de los compuestos que dan el ensayo positivo, el color cambia a intermedios entre gris y el negro. 9.5.3 Ensayo del cloruro férrico, La mayorla de los fenoles, enoles, Acidos hifroxamicos, Acidos sulfinicos, hidroxidcidos, algunas oximas 0 compuestos enolizables, en los que la estructura endlica esta presente al menos en un 50 % del compuesto, reaccionan con cloruro férrico para producir complejos coloreados. muchos © Procedimiento = Solucién acuasa: disuelva 30-50 mg del compuesto en 1 ml de agua o una mezela agua-alcohol y afiada 3 gotas de cloruro ferrico 2,5% en agua, Note cualquier cambio en el color o la formacién de un precipitado. » Solucién no acuosa: disuelya 30 mg del compuesto en | ml de cloroformo y afiada I (© 2 gotas de FeCI3 en cloroformo con piridina. Note Ia formacién de un color © precipitado. = Reactivo: disuelva | gr de cloruro piridina y filtre la mezcla. férrico anhidro en 100m| de cloroformo y 8 ml de © Consideraciones Muchos fenoles producen coloraciones rojas, azules, pirpuras 0 verdes, Soloway y Wilen han mostrado que el uso de solventes anhidros (cloroformo) y una base débil (piridina) hace el ensayo mucho mas sensible y ayuda a detectar un gran numero de fenoles que dan resultado negativo con solvente acuoso. La piridina acta como un aceptor de protones que incrementa la concentracién del ion fenolato. Muchos nitro fenoles, hidroquinona, acidos meta y pata hidroxibenzoico y sus esteres no dan coloraciones. i! Los enoles usualmente producen coloraciones rojas violeta. Los dcidos hidroxamicos iro férrico para producir coloraciones azul-rojizas, violetas 0 lestos organicos pueden ser convertidos en Acidos férrico — acido hidroxamico puede ser usada en su reaccionan con cloru purpura, Puesto que muchos compu hidroxémicos Ia reaceién del cloruro deteccién. 9.6 Clasificacién de sustancias organic: 9.6.1 Generalidades Una solucién es una mezela hom molecular, de lo anterior se deduce q El proceso de disolucién de una sifuerzas que actian sobre los iones y moléculas de Ia sustancia. En consecuencia si una sustancia se disuelve en otras las fuerza. 9.6.2 Solubilidad en agua: En general cuatro tipos de compuestos son solubles en agua, los electrolitos, os Acidos, icas se las bases, y los compuestos polares. En cuanto a los electrolitos, las especies i hidratan debido a interacciones ion-dipolo entre las moléculas de agua y los iones. El numero de acidos y bases que pueden ser jonizados por el agua es limitado, y la mayoria se disuelve por la formacién de puentes de hidrogeno. Las sustancias no iénicas no se disuelven en agua, a menos que sean capaces de formar puentes de hidrogeno; esto se logra cuando un étomo de hidrogeno se encuentra entre dos atomos fuertemente clectronegativos, y para propésitos pricticos solo el fldor, oxigeno y nitrégeno lo forman. Por consiguiente, los hidrocarburos, los derivados halogenados ¥ Ios tioles son muy poco solubles en agua Un grupo polar capaz de formar puentes de hidrogeno con el agua, puede hacer que una molécula hidrocarbonada sea soluble en agua, si la parte hidrocarbonada de la molécula no excede de 4 0 5 dtomos de carbono en cadena normal, o de 5 a6 atomos de carbono en cadena ramificada. Si mas de un grupo polar esta presente en la molécula, la relacion de dtomos de carbono es ustalmente de 3 a 4 4tomos de carbono por grupo polar. 9.6.3. Solubilidad en éter: En general las sustancias no polares y ligeramente polares se disuelven en éter. El que un compuesto polar sea o no soluble en éter, depende de {a influencia de los grupos polares con respecto a la de los grupos no polares presentes. El general los compuesto que tengan un solo grupo polar por molécula se disolverdn, a menos que sean altamente polares, como los Acidos sulfénicos. La solubilidad en éter no es un criterio Gnico para clasificar las sustancias por solubilidad. 9.6.4 Solubilidad en acido clorhidrico diluido: La mayoria de las sustancias solubles en agua y solubles en acido clorhidrico diluido tiene un atomo de nitrégeno bésico. Las aminas aliféticas son mucho mas basicas que las arométicas, dos 0 mas grupos arilos sobre el nitrégeno pueden cambiar las idolas insolubles en el acido. Este mismo propiedades de la amina por extensién, haci efecto se observa en moléculas como la difenilamina y la mayoria de los nitro y polihaloarilaminas. 9.6.5 Solubilidad en hidrdxido de sod Los compuestos que son insolubles en agua, pero que son capaces de donar un protén a una base diluida, pueden formar productos solubles en agua. Asi se considera como acido los siguientes compuestos: aquellos en que el protén es removido de un grupo hidroxilo, como los dcidos sulfénicos , sulfinicos y carboxilicos; fenoles, oximas, enoles, Acidos hidroxdmicos y las formas “aci” de los nitro comy n secundarios. El protén es removido de un 4tomo de azufre, como los tio!El concepto de acidez es relativo, y un compuesto es acido 0 biisico en comparacién con otro. Los acidos orginicos se consideran dcidos débiles, pero dentro de ellos pueden ‘comparar entre menos 0 mas débiles en comparacién con el acide carbénico. La solubilidad en bicarbonato dice que la sustancia es un acido relativamente fuerte, 9.6.7 Solubilidad en acido sulfirico concentrado: Este acido es un donador de protones muy efectivo, y es capaz de protonar hasta la base mas débil. Tres tipos de compuestos son solubles en este acido, los que contiene igeno excepto los diariléteres y los perfluoro compuestos que contiene oxigeno, los alquenos y los alquinos, los hidrocarburos aromiticos que son ficilmente sulfonados, tales como los isémeros meta di sustituidos, los trialcohil-sustituidos y los que tienen. tres © mas anillos aromaticos. Un compuesto que reaccione con el acido sulfirico concentrado, se considera soluble aunque el producto de Ia reaccién sea insoluble. Para simplificar la clasificacién y la identificacién de los compuestos organicos por solubilidad se establecen nueve grupos de acuerdo con su comportamiento ante seis solventes, se aprecian en el siguiente esquema:9.7 Diagrama de clasificacién por solubilidad an - Searcy | ee 2 — Ga) — 10 ele setle NaHCO3 20% (1.1) « COMPUESTOS DEL GRUPO $2: Son compuestos que: Contienen solamente C, H, O: acidos dibésicos y polibasicos, _acidos hidroxilicos, _polihidrioxi _fenoles, polihidrioxi alcoholes. Contienen metales: sales de dcidos y fenoles, compuestos metélicos varios. Contiene nitrégeno: sales aminadas de Acidos organicos, aminodcidos, sales de amonio, amidas, aminas, aminoaleoholes, semicarbacidas, semicarbazoles, ureas. Contienen —_halégenos: _—_cidos halogenados, aldehidos 0 aleoholes halogenados, haluros de acido. mle Contiene Nos H2S0+ concentrodo aot: (Graoo m4) a (Gevomt) Grup AZ (=m) si —(Gawoie Ko Contiene azufre: acids sulfénicos, mereaptanos, acidos sulfinicos. Contienen Ny halégenos: sales de amina de dcidos halogenados. Contienen N y S$: acidos amino disulfinicos, acidos _ciano-sulfonicos, Acidos_nitro-sulfénicos, bisulfatos de bases débiles. come, Fenckea, suse,Contienen N: —aminas, — amidas, aminoheterociclicos, nitvilos, nitroparafinas, oximas. Contienen —halégenos: _ compuestos halogenados de la primera division anterior Contienen mareaptoacidos, joacidos, _hidroxicompuestos con azufie, heterociclicos, Contienen Ny hal6genos: am halogenadas, amidas-y _nitrilos halogenados. Contienen Ny S: compuestos amino heteroctelicos del azutie * COMPUESTOS GRUPO Aminas (diaril y triaril _aminas), aminoacids, hidracinas aril sustitutitas, N-dialquilaminas, compuestos anfoteros como aminofenoles, aminotiofenoles, aminosul fonamidas. © COMPUESTOS GRUPO Al: Contienen C, H, O: acidos y anhidridos (generalmente de — 10. carbonos © menos y forman soluciones coloidales jabonosas). Contienen N: aminodcids, nitroacidos, cianoacidos, acidos carboxilicos con N heterociclicos, polinitrofenoles. Contiene halégenos: haloacidos, poli- halo-fenoles. Contienen S: acidos sulfénicos, acidos sulfinicos: Contienen Ny fcidos aminosulfonicos, nitrotiofenoles, sulfato de bases débiles. ° COMPUESTOS GRUPO Contienen C, H, O: dcido: peso. molecular y forma anhidridos, fenoles, esteres fendlicos, enoles. aminodcidos, Contienen nitrofenoles, amidas, _aminofenoles, compuestos anféteros, _cianofenoles, imidas, N-monoalquilaminas arométicas, —hidroxilaminas, N= sustituidas, oximas, _ nitroparafinas, hidrocarburos trinitroaromaticos, ureidos, Contiene halogenos: halofenoles. Contienen $: mercaptanos (tioles), tiofenoles. Contiene N y halégenos: hidrocarburos arométicos —polinitro _halogenados, fenoles sustituidos. Contienen N y S: amino sulfonamidas, dcidos amino sulfénicos, aminotiofenoles, sulfonamidas, tioamidas. © COMPUESTOS GRUPO M: Contienen N: anilidas y_ toluidinas, amidas, nitroarilaminas, nitrohidrocarburos, aminofenoles, azo, hidrazoy azoxi_compuestos, diy triarilaminas, dinitro fenilhidracinas, nitratos, nitrilos. Contienen mereaptanos, — N- dialquilsulfonamidas, sulfatos, sulfonatos, sulfuros, disulfuros, sulfatos, tioesteres, derivados de la tiourea Contienen N y S: sulfonamidas. Contiene Ny hal6genos: aminas, amidas, nitrilos, nitro halogenados.* COMPUESTOS GRUPO I: Hidrocarburos, derivados halogenados de los hidrocarburos, diaril éteres. 98 Bibliograia SQ eE “ ¢ SHIRENERR. L., Fuson R.C., Curtin D.Y., “The systematic identification of “Organic compouds” a laboratory manual. Fith edition copyright 1964, Jhon Wiley, NY,, pagina 26. © Cheronis D.N. and entrikin J.B. “semimicro Qualitative Organic Analysis” The systematic identification of organic compouds. 2" edition, 1957 interscience Publisher. Inc. N.Y., London, pagina 30 y paginas 159-163. © Rosen M.J. Anal Chem. 27.111 (1955) © Soloway S. and Wilwn S.11 Anal.Chem 24, 979 (1952) ari i