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Nota  de  aplicación

productos  farmaceuticos

Rápido,  Fácil  y  Confiable
Mediciones  de  muestras  líquidas
Uso  de  transmisión  FTIR
Comparación  del  módulo  DialPath  y  una  celda  líquida  
tradicional  para  la  cuantificación  de  simeticona  
utilizando  el  Agilent  Cary  630  FTIR

Autores
Fabián  Zieschang
wesam  alwan
Agilent  Technologies,  Inc.

Introducción
La  espectroscopia  infrarroja  por  transformada  de  Fourier  (FTIR)  es  una  técnica  comúnmente  utilizada  en  la  
industria  farmacéutica,  donde  juega  un  papel  importante  en  el  control  de  calidad  de  los  productos  farmacéuticos  
finales.  Sin  embargo,  lograr  mediciones  exactas  y  precisas  de  muestras  farmacéuticas  líquidas  suele  ser  difícil  mediante  
FTIR  de  transmisión  si  se  utilizan  celdas  de  flujo  o  desmontables.  Existen  varios  desafíos  que  hacen  que  el  uso  de  
estas  celdas  para  el  análisis  de  líquidos  sea  complicado,  propenso  a  errores  y  lento:

–  Las  celdas  son  frágiles  y  los  espaciadores  y  las  ventanas  pueden  ser  difíciles  de  ensamblar

–  El  diseño  de  la  celda  hace  que  sea  difícil  lograr  una  longitud  de  trayectoria  reproducible

–  Las  células  tienden  a  filtrarse

–  Las  burbujas  de  aire  pueden  interferir  con  el  análisis

–  La  limpieza  y  el  montaje  de  las  celdas  son  tareas  que  requieren  mucho  tiempo

–  Las  muestras  pegajosas  y  viscosas  son  difíciles  de  medir

–  Se  requieren  cantidades  significativas  de  volumen  de  muestra  y  solvente  de  lavado
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El  exclusivo  módulo  de  muestreo  Agilent  DialPath  para  el   Experimental
espectrómetro  FTIR  Agilent  Cary  630  elimina  la  necesidad  de  celdas  
Preparación  de  soluciones  de  muestra  en  blanco,  estándar  
de  líquido  desmontables  o  de  flujo  tradicionales,  lo  que  simplifica  el  
y  de  control
análisis  de  muestras  líquidas.  Se  coloca  una  pequeña  gota  de  
muestra  líquida  entre  dos  ventanas  colocadas  horizontalmente  del   USP43­NF38  describe  la  cuantificación  de  simeticona  como  una  

módulo  DialPath,  como  se  muestra  en  la  Figura  1  (centro)  y  la  Figura  2. concentración  porcentual  relativa  a  un  estándar  de  simeticona  

La  distancia  entre  las  dos  ventanas  define  la  longitud  del  camino   conocido.  Se  preparó  una  solución  estándar  de  simeticona  que  

óptico. contenía  2  mg/ml  (100  %)  de  simeticona  usando  un  estándar  
de  referencia  de  simeticona  USP.  Se  pesaron  con  precisión  
alrededor  de  25  mg  de  simeticona  USP  (CAS  8050­81­5)  y  se  
transfirieron  a  un  tubo  de  centrífuga  de  vidrio  con  tapón  de  rosca  de  
50  ml.  Se  añadieron  al  tubo  12,5  ml  de  tolueno  de  grado  de  
espectroscopia  seguido  de  25  ml  de  HCl  4,8  M.  El  tubo  se  
agitó  a  mano  durante  5  minutos  seguido  de  5  minutos  de  agitación  
en  un  mezclador  de  vórtice.  A  continuación,  el  tubo  se  centrifugó  a  
Figura  1.  Tres  sencillos  pasos  permiten  el  análisis  de  muestras  líquidas   1500  rpm  durante  30  minutos.  Aproximadamente  5  ml  de  la  capa  
utilizando  un  espectrómetro  FTIR  Agilent  Cary  630  equipado  con  el  módulo  DialPath. orgánica  superior  se  transfirieron  a  un  tubo  de  centrífuga  con  tapón  
de  rosca  de  50  ml  que  contenía  aproximadamente  1  g  de  sulfato  de  
sodio  anhidro  para  eliminar  cualquier  agua  residual  en  la  capa  orgánica.  
El  módulo  DialPath  proporciona  una  selección  instantánea  de   El  tubo  se  agitó  vigorosamente  a  mano  durante  1  minuto  y  se  
tres  longitudes  de  ruta  preestablecidas  que  se  pueden   centrifugó  durante  10  minutos  hasta  obtener  una  capa  
seleccionar  ("marcar")  girando  el  cabezal  del  módulo.  El  módulo  Agilent   transparente.  Se  preparó  un  blanco  siguiendo  el  mismo  procedimiento  
TumbllR,  que  utiliza  la  misma  tecnología  que  el  módulo  DialPath,   pero  sin  agregar  simeticona  USP.  Para  probar  el  método  utilizando  
tiene  una  longitud  de  ruta  disponible  en  lugar  de  tres.  Ambos   muestras  altas,  bajas  y  dentro  del  rango,  también  se  prepararon  tres  
módulos  están  permanentemente  alineados  y  se  conectan  fácilmente   muestras  de  control  que  contenían  81,2,  114,0  y  100,7%  de  
a  la  parte  delantera  del  motor  Cary  630  FTIR.  El  software  Agilent   concentración  porcentual  de  simeticona.
MicroLab  detecta  automáticamente  qué  módulo  está  instalado  en  el  
motor  FTIR  Cary  630  y  aplica  la  configuración  correcta,  lo  que   Preparación  de  cápsulas  que  contienen  simeticona  Se  

permite  incluso  a  los  usuarios  sin  experiencia  intercambiar  módulos  en  cuestión  dadquirió  un  tipo  de  cápsulas  de  simeticona  comercialmente  disponibles  
e  segundos.
en  una  farmacia  local.  La  etiqueta  indicaba  que  cada  cápsula  
En  este  estudio,  se  utilizó  un  motor  FTIR  Cary  630  equipado  con  un  
contenía  100  mg  de  simeticona.  Cada  cápsula  se  disolvió  en  100  mL  
módulo  DialPath  para  la  cuantificación  de  simeticona  en  un  
de  HCl  4,8  M  y  50  mL  de  tolueno  para  obtener  una  solución  con  una  
medicamento  antiácido  disponible  comercialmente.  Con  fines  de  
concentración  nominal  de  2  mg/mL  (100%  de  concentración  porcentual).  
comparación,  los  datos  también  se  adquirieron  utilizando  el  
La  extracción  siguió  el  mismo  procedimiento  descrito  para  la  solución  
enfoque  FTIR  tradicional  con  una  celda  desmontable  en  un  
estándar  de  simeticona.
compartimento  de  muestra  de  transmisión.  La  cuantificación  de  
simeticona  se  describe  en  la  monografía  USP­NF,  USP43­NF38,  
página  4044  (1).  De  acuerdo  con  la  monografía,  la  cantidad  de  
simeticona  en  la  formulación  de  un  fármaco  se  determina  como  
el  porcentaje  de  concentración  de  la  muestra  en  
comparación  con  una  solución  estándar  de  simeticona  de  2  mg/mL  
(2  mg/mL  equivale  a  una  concentración  porcentual  del  100  %).

Figura  2.  La  muestra  líquida  se  coloca  en  la  ventana  de  muestras  del  módulo  
DialPath  instalado  en  el  espectrómetro  FTIR  Agilent  Cary  630.
2
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Instrumentación Resultados  y  discusión
En  este  estudio  se  utilizaron  dos  espectrómetros  FTIR  Agilent  
Cary  630.  El  primer  Cary  630  FTIR  estaba  equipado  con  un   Análisis  cuantitativo:  celda  de  transmisión  
módulo  de  transmisión  diseñado  para  una  celda  de  líquido   desmontable  tradicional  vs  DialPath
desmontable  tradicional  con  ventanas  de  fluoruro  de  calcio  y  un   El  análisis  cuantitativo  de  las  muestras  de  simeticona  se  realizó  
espaciador  de  500  micras  (Omni­cell,  Specac  Ltd.,  Reino  Unido).   utilizando  dos  espectrómetros  FTIR  Cary  630,  uno  con  una  
El  segundo  Cary  630  FTIR  estaba  equipado  con  un  módulo  Agilent   celda  de  líquido  desmontable  tradicional  y  otro  con  un  módulo  
DialPath  con  una  longitud  de  ruta  de  500  micras  (Figura  2). DialPath.  La  máxima  absorbancia  de  la  banda.
Las  muestras  se  dividieron  en  dos  lotes  para  el  análisis  paralelo  por   a  aproximadamente  1260  cm­1  se  utilizó  para  la  cuantificación.
los  dos  espectrómetros  FTIR  utilizando  la  celda  líquida  y  el   De  acuerdo  con  la  monografía  USP43­NF38,  los  valores  de  
módulo  DialPath.  Para  minimizar  cualquier  residuo  o   absorbancia  para  el  estándar  y  las  muestras  se  pueden  usar  
transferencia  entre  muestras,  la  celda  de  líquido  se  lavó  con   para  calcular  la  concentración  porcentual  de  simeticona  según  la  
grandes  cantidades  de  tolueno.  Solo  se  necesitaron  unas  pocas   ecuación  1  ( 1):
gotas  de  isopropanol  en  un  paño  para  limpiar  las  dos  ventanas  de  
muestra  del  DialPath.  Se  utilizó  el  software  MicroLab  para  recopilar  
los  datos  y  crear  un  método  para  el  cálculo  directo  de  la  concentración  
de  la  muestra.  Para  compensar  la  absorbancia  de  los  solventes  de  la  
muestra,  el  fondo  se  midió  contra  el  blanco  en  la  celda  de  líquido  y  
en  DialPath,  respectivamente.
Los  parámetros  de  recolección  de  datos  se  resumen  en  la  Tabla  1.

Tabla  1.  Parámetros  de  recopilación  de  datos  FTIR  utilizados  para  mediciones  
de  cuantificación  utilizando  tanto  la  celda  de  líquido  tradicional  como  el  módulo  DialPath.

Parámetro Configuración

Rango  espectral  (cm­1) 4000  a  650

Escaneos  de  fondo 64
Cálculo  automático  de  la  concentración  porcentual  El  software  
Escaneos  de  muestra 64
MicroLab  guía  a  los  usuarios  a  través  de  todo  el  flujo  de  trabajo  
2
Resolución  espectral  (cm­1) analítico  utilizando  imágenes  instructivas  y  un  diseño  fácil  de  
colección  de  fondo Se  utilizó  en  blanco navegar.  Ambos  métodos  FTIR  para  el  análisis  de  rutina  de  
Longitud  de  camino  (micras) 500* soluciones  de  simeticona  utilizando  DialPath  y  celda  líquida  se  
crearon  en  el  software  MicroLab.  Los  métodos  determinan  
*Especificado  en  USP43­NF38
automáticamente  la  absorbancia  máxima  a  ~1260  cm­1  (usando  la  
altura  del  pico  con  un  solo  componente  de  línea  base)  y  el  
software  aplica  automáticamente  el  cálculo  según  la  ecuación  
1  (consulte  la  Figura  3).

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Figura  4.  Se  utilizó  el  software  MicroLab  para  determinar  el  porcentaje  de  concentración  
para  las  muestras  de  control  y  la  cápsula  comercial.  Los  resultados  procesables  codificados  
por  colores  se  informan  directamente  después  de  la  adquisición  de  datos  de  acuerdo  con  
la  configuración  de  umbral  del  método.

Figura  3.  En  el  software  MicroLab,  los  "componentes"  se  utilizan  para  calcular  los  
resultados  cuantitativos  de  los  espectros  medidos.  El  componente  que  se  muestra  
Los  dos  métodos  Cary  630  FTIR  se  utilizaron  para  determinar  el  porcentaje  
arriba  determina  automáticamente  el  valor  de  absorbancia  (Au )  en  el  máximo  de  la  banda,   de  concentración  de  las  muestras  de  control  1,  2  y  3  utilizando  la  celda  
en  este  ejemplo  alrededor  de  1260.8  cm­1.  La  escala  (valor  x)  luego  aplica  un  factor  de   de  líquido  y  el  módulo  DialPath.  Los  resultados  de  la  Tabla  2  muestran  
multiplicación  al  valor  de  absorbancia  para  dar  un  resultado  final:  Concentración  porcentual  
que  se  obtuvieron  resultados  más  precisos  con  el  accesorio  DialPath  que  
=  valor  de  absorbancia  (Au )  x  factor  de  multiplicación,  como  se  explica  en  la  ecuación  1.  En  
con  la  celda  líquida.
este  estudio,  el  factor  de  multiplicación  para  DialPath  es  242.6276672.

La  concentración  porcentual  de  simeticona  en  una  muestra  se  informa  
directamente  después  de  la  adquisición  de  datos.  Si  algún  resultado  
está  fuera  de  los  criterios  de  aceptación  especificados  por  
la  USP  de  85  a  110  %,  se  marcan  en  rojo,  como  se  muestra  en  la  
Figura  4  para  la  muestra  de  control  1  que  contiene  81,2  %  de  simeticona.

Tabla  2.  Concentración  porcentual  de  simeticona  en  las  tres  muestras  de  control  medidas  con  un  Cary  630  FTIR  con  DialPath  y  un  Cary  630  FTIR  con  celda  de  transmisión.

Cary  630  FTIR  con  DialPath Cary  630  FTIR  con  celda  de  transmisión

Muestra  de  control Porcentaje  teórico Porcentaje  medido Exactitud  (%) Porcentaje  medido Exactitud  (%)

Concentración  de  simeticona  (%) Concentración  (%) Concentración  (%)
1 81.2 81.2 100 80.3 98.8

2 114.0 113.1 99.2 111.1 97.4

3 100.7 102.6 98.1 103.1 97.7

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Las  concentraciones  porcentuales  de  simeticona  en  las  cápsulas   Tabla  4.  Análisis  de  una  muestra  de  simeticona  enriquecida  con  simeticona  en  tres  
comerciales  medidas  por  los  dos  Cary  630  FTIR  equipados  con  DialPath   concentraciones  porcentuales  usando  el  módulo  Cary  630  FTIR  con  DialPath  para  
y  con  la  celda  líquida  estuvieron  dentro  del  rango  de  aceptación  de   determinar  la  precisión  del  método,  n=3.

85,0  a  110,0  %  que  se  especifica  en  la  USP  (Tabla  3)
Muestra Claveteado Calculado Medido Significar
(1).  Los  resultados  sugieren  que  DialPath  es  una  técnica  de  
Porcentaje Porcentaje Porcentaje Porcentaje Recuperación  
muestreo  adecuada  para  la  determinación  de  concentraciones   Concentración   Concentración   Concentración   Concentración   (%)

porcentuales  de  simeticona  en  formulaciones  de  medicamentos   (%) (%) (%) (%)

líquidos  de  acuerdo  con  los  requisitos  de  la  USP. 97.3 5.0 102.3 102.4 100,1  ±  0,2

97.3 10.0 107.3 107.8 100,5  ±  0,4

97.3 15.0 112.3 112.7 100,4  ±  0,1

Tabla  3.  Concentraciones  porcentuales  de  cápsulas  comerciales  de  simeticona  
obtenidas  mediante  FTIR  con  un  módulo  DialPath  y  una  celda  de  transmisión.

DialPath  medido Celda  de  transmisión Precisión  de  la  medición  La  

Porcentaje Porcentaje  medido
precisión  del  Cary  630  FTIR  con  mediciones  de  DialPath  
Concentración  (%) Concentración  (%)

101.3 103.8
se  evaluó  ejecutando  un  estudio  de  repetibilidad.  Se  dividió  una  
Muestra  Comercial  1
solución  de  simeticona  en  seis  porciones  y  cada  porción  se  analizó  por  
Muestra  Comercial  2 101.7 101.8
separado.  La  repetibilidad  de  los  resultados  se  evaluó  calculando  el  
Muestra  Comercial  3 102.4 102.6
promedio  y  la  desviación  estándar  de  la  absorbancia  y  el  porcentaje  
de  concentración  de  simeticona  (Tabla  5).  El  Cary  630  FTIR  con  
módulo  DialPath  mostró  una  excelente  precisión  con  una  desviación  
El  rendimiento  del  Cary  630  FTIR  con  el  módulo  DialPath  también  
estándar  de  solo  0,0013  en  absorbancia  y  0,34  %  de  las  
se  evaluó  en  términos  de  exactitud,  precisión,  linealidad  y  rango  de  
mediciones  de  concentración.
concentración.

Precisión  de  la  medición
Se  llevó  a  cabo  una  prueba  del  método  de  adición  estándar  para  verificar  
la  precisión  de  las  mediciones  de  DialPath.  Tres  alícuotas  de  una   Tabla  5.  Estudio  de  repetibilidad  del  Cary  630  FTIR  con  DialPath  en  
muestra  con  una  concentración  porcentual  nominal  del  97,3  %  de   seis  mediciones  de  la  misma  muestra.

simeticona  se  enriquecieron  con  simeticona  al  5,  10  y  15  %  añadiendo  
Absorbancia Porcentaje  de  muestra
volúmenes  exactos  de  una  solución  estándar  de  simeticona  de  alta  
Concentración  (%)
concentración.  Cada  muestra  enriquecida  se  midió  tres  veces  y  la  
Porción  de  muestra  1 0.4154 100.8
recuperación  media  se  calculó  de  acuerdo  con  la  siguiente  ecuación:
Porción  de  muestra  2 0.4144 100.5

Porción  de  muestra  3 0.4137 100.4

Porción  de  muestra  4 0.4167 101.1

Ecuación  2:  %  Recuperación  =  (C1 /C2 )  x  100
Porción  de  muestra  5 0.4158 100.9
C1  =  concentración  porcentual  medida
Porción  de  muestra  6 0.4178 101.4
C2  =  concentración  porcentual  calculada
Promedio 0.4156 100.9

Desviación  Estándar 0.0013 0.34

Todos  los  resultados  de  recuperación  de  la  Tabla  4  estuvieron  
dentro  del  100,5  %,  lo  que  sugiere  que  se  pueden  lograr  
mediciones  de  alta  precisión  con  el  Cary  630  FTIR  equipado  con  el  
módulo  DialPath.

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Linealidad  de  calibración  y  rango  de  concentración  La   Rendimiento  de  muestras  y  uso  de  recursos  La  
linealidad  entre  la  concentración  del  analito  y  la  lectura  de   cuantificación  de  simeticona  con  el  Cary  630  FTIR  con  el  módulo  
absorbancia  usando  el  módulo  DialPath  se  demostró   DialPath  proporciona  un  rendimiento  de  muestras  significativamente  
creando  una  curva  de  calibración  y  evaluando  la  curva  usando  la   mayor,  minimiza  el  volumen  de  muestras  y  reduce  el  desperdicio  de  
regresión  de  mínimos  cuadrados.  Se  prepararon  estándares   disolvente  en  comparación  con  el  análisis  que  utiliza  la  celda  de  
de  calibración  para  cinco  concentraciones  diferentes  de  simeticona   transmisión  líquida  (consulte  la  Figura  6).
en  el  rango  de  concentración  porcentual  de  0  a  190  %  a  través  de  
En  una  hora  de  tiempo  de  análisis,  DialPath  permitió  el  análisis  de  40  
diluciones  apropiadas.  Se  utilizó  la  altura  del  pico  correspondiente  
extractos  de  muestra,  el  doble  de  muestras  que  la  celda  líquida.  El  
a  la  simeticona  (1260,8  cm−1)  para  evaluar  la  linealidad  de  la  
tiempo  de  adquisición  de  datos  fue  de  aproximadamente  1  min  para  
respuesta  espectral  de  DialPath.  Estas  medidas  se  usaron  para  
ambas  técnicas  de  muestreo.  Además,  DialPath  requirió  solo  20  µL  
obtener  la  curva  de  calibración  así  como  para  calcular  el  
de  solución  de  muestra  de  simeticona,  mientras  que  la  celda  
coeficiente  de  correlación  (R2 )  de  la  curva  de  calibración.  Se  creó  
líquida  requirió  5  mL  de  cada  muestra.
la  curva  de  calibración  y  todos  los  cálculos  estadísticos  se  
realizaron  con  el  software  MicroLab  Quant. Para  evitar  el  arrastre,  la  celda  de  líquido  debe  enjuagarse  varias  
veces  antes  de  inyectar  la  siguiente  muestra.  El  DialPath  se  puede  
El  gráfico  de  la  altura  del  pico  de  simeticona  (a  1260,8  cm­1)  en  
limpiar  con  un  paño  y  unas  gotas  de  solvente,  lo  que  reduce  el  
función  de  la  concentración  indica  que  la  respuesta  espectral  de  
desperdicio  de  solvente  y  ahorra  costos  de  eliminación  de  
DialPath  tiene  una  excelente  linealidad  con  un  coeficiente  de  
solventes  y  desechos.  DialPath  es  una  técnica  de  muestreo  
correlación  de  R2  =  0,9997  (Figura  5).
simple  y  fácil  de  usar  que  supera  la  complejidad  asociada  con  
la  celda  de  transmisión  de  líquido  (por  ejemplo,  limpieza  
entre  cada  introducción  de  muestra,  asegurando  que  no  queden  
atrapadas  burbujas  de  gas  y  el  manejo  adecuado  de  las  placas  de  
apertura).  El  DialPath  ofrece  ahorros  considerables  en  muestras,  tiempo  y  costos

Figura  5.  Evaluación  de  la  linealidad  de  DialPath  utilizando  el  software  MicroLab  Quant.
Las  curvas  de  calibración  y  los  cálculos  del  coeficiente  de  correlación  se  realizan  
automáticamente  en  el  software.  Los  usuarios  pueden  reportar  los  resultados  
obtenidos  con  fines  de  documentación.

Figura  6.  Cuadro  de  indicadores  después  de  60  minutos  de  análisis  de  extractos  de  
simeticona  utilizando  el  Cary  630  FTIR  con  el  módulo  DialPath  y  el  Cary  630  FTIR  con  
una  celda  de  transmisión  líquida  tradicional.

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Conclusión  En  
esta  nota  de  aplicación,  el  FTIR  Cary  630  equipado  con  un  
accesorio  de  muestreo  de  transmisión  altamente  eficiente  (DialPath)  
se  utilizó  para  el  análisis  cuantitativo  rápido  de  muestras  
farmacéuticas  líquidas.

El  rendimiento,  la  velocidad  de  análisis  y  el  muestreo  innovador  del  Agilent  
Cary  630  FTIR  con  el  módulo  DialPath  permitieron  el  rápido  desarrollo  e  
implementación  de  un  método  cuantitativo  para  la  medición  de  simeticona.

La  calidad  de  los  datos  cuantitativos  generados  por  el  Cary  630  FTIR  
con  DialPath  fue  comparable  o  mejor  a  los  resultados  proporcionados  
por  un  Cary  630  FTIR  con  una  celda  tradicional.  Sin  embargo,  la  
facilidad  de  uso  de  DialPath  ofreció  ahorros  considerables  de  tiempo  y  
dinero  en  comparación  con  el  uso  de  celdas  líquidas  tradicionales,  lo  que  
lo  hace  ideal  para  aplicaciones  farmacéuticas.

El  Cary  630  FTIR  con  DialPath  proporcionó  una  calibración  
altamente  lineal,  hasta  un  190  %  de  simeticona,  con  una  excelente  repetibilidad.
La  excelente  exactitud  y  precisión  de  los  datos  analíticos  obtenidos  
para  la  medición  de  simeticona  demostraron  la  eficacia  de  la  
instrumentación,  el  método  y  los  resultados  analíticos.

El  FTIR  Cary  630  cumple  con  los  requisitos  de  rendimiento  de  la  
farmacopea  mundial,  como  la  farmacopea  europea,  estadounidense,  
india  y  japonesa.  El  software  MicroLab  Pharma  opcional  facilita  el  
cumplimiento  según  lo  definido  por  la  FDA  de  los  EE.  UU.  21  CFR  Parte  
11,  el  Anexo  11  de  la  UE  y  regulaciones  nacionales  similares  sobre  
registros  electrónicos.

Referencia  1.  
Emulsión  de  simeticona.  Farmacopea  de  los  Estados  Unidos  y  
Formulario  Nacional  (USP43­NF38­4044).  ID  de  
documento:  GUID  4965A93F­3617­485C­87B4­1DFBDF33EC3F_4_en­US.

www.agilent.com/chem

DE44297.9470717593

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