La universidad sigue los lineamientos para el manejo de animales, tiene un comit interno. Regida por la NOM 062.

Los artculos de investigacin deben de ser mandados con las normas con las que fueron manejados los animales experimentales, deben ser manejados los animales de manera adecuada, debe ser revisado por un comit. Principio de las 3 R Reducir: se debe reducir el nmero de animales en una investigacin (de 180-20). Esto se hace a travs del replanteamiento. Reemplazar: como ejemplo, para probar medicamentos hepticos, en vez de ratas utilizar cultivos de clulas hepticas. Refinar los procedimientos: No hacer procedimientos que puedan ser estresantes o dolorosos para los animales, hacerlos lo ms rpido posibles

Aprender + y manipular Por que se utilizan ratas y ratones?: Las ratas son anatmica y fisiolgicamente parecidas, 1 de perro 7 de humano. Estudios donde se reducen las variables, se reduce el margen de error en una investigacin. Se deben de hacer la crianza en el bioterio, todo para controlar los factores genticos y biiologicos de los anmeles, para la seguridad de los que la manejan. Reducir el ruido lo mximo posible, todo para reducir el estrs de las ratas. Carecen de vescula biliar, y son animales nocturnos. Las ratas no vomitan, ellas carecen del reflejo del vomito, o sea que para su manejo se le puede desorientar marendolas. Su ciclo dura unas 12 hrs. Su frecuencia cardiaca es bastante alta. Llegan a tener un peso de 700gs. Mximo. Longevidad de 2 aos en condiciones de bioterio. Son roedores, o sea roen (piedra, plstico, acero), esto es una necesidad, si no roen su crecimiento dentario y pueden hasta morir por caquexia. Pueden detectar cambios endocrinos del organismo, solo que no sabe cmo interpretarlo, o sea que lo puede tomar como una amenaza, Si la rata comienza a chillar es que esta estresada. El procedimiento con las ratas debe ser lo mas rpido posible, ya que como la mayora de los animales aprenden en base a accin y reaccin, lo que quiere decir que la segunda o tercera vez q lo hagamos lo que pasara es que sabr que ocurrir y corremos el riesgo de que la rta llegue a lastimarnos. Si la rata chilla, no debe ser soltada, porque adems si la soltamos le damos el mensaje de que si chilla nosotros la soltamos, entonces todo el tiempo va a chillar. 1. 2. 3. 4. Si estn jugando con el animal esta se va a estresar. 1 Lavarse las manos Es preferible para el manejo es no usar los guantes No hay que acercarse de frente al animal o por arriba (esto por evolucin- guilas y depredaores-)

Wistar: gana peso Long Evans: Son delgadas y son estables reproductivamente Sprague Dawley

Hay que diferenciar entre macho/hembra. Cuando son demasiado chicos, la distancia entre los genitales y el ano nos ayudan a diferenciar.

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18.

1 Hay que pesar a los animales 2 Examen Fsico: tocar, revisar, que sexo, se le sienten las costillas o no. 3 Cudripedestacin. Luxar a la rata en las patas delanteras Se val hablarles bien. Si la rata chila lo menos que hay que hacer es que no hay que soltarla Solo si no copera. Agarrarla de la base de la cola, y marearla, no de la punta por qu se puede fracturar. Al desorientarla la rata no sabe ni de donde se le est agarrando. Con una franela seca, agarrarla. De preferencia la sujecin se realiza con la mano izquierda. Diferenciar entre firmeza y asfixia/ No corregir posicin, si se hizo mal, solo hay que dejarla, y volver a sujetar. Hasta no estar seguros de que la rata esta bien sujeta, no aplicar el medicamento. Si se estresa demasiado, pues la rata con las catecolaminas liberadas lo nico que har es que no reaccione al sedante. Las vas de Admon son: IM, VO ,IP, IV, SC y Puncin Cardiaca -solo cuando se va a sacrificar al animalUtilizar jeringa de insulina. Fenobarbital: Las sondas orales son para introducir directamente el alimento a la rata La va sub cutnea es lenta, se realiza en la regin dorsal (siempre y cuando sea en el tejido subcutneo)

Desnaturalizacin de una protena

Las protenas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional (conformacin qumica) y as el caracterstico plegamiento de su estructura. Las protenas son filamentos largos de aminocidos unidos en una secuencia especfica. Son creadas por los ribosomas que "leen"codones de los genes y ensamblan la combinacin requerida de aminocidos por la instruccin gentica. Las protenas recin creadas experimentan una modificacin en la que se agregan tomos o molculas adicionales, como el cobre, zinc y hierro. Una vez que finaliza este proceso, la protena comienza a plegarse sin alterar su secuencia (espontneamente, y a veces con asistencia de enzimas) de forma tal que los residuos hidrfobos de la protena quedan encerrados dentro de su estructura y los elementos hidrfilos quedan expuestos al exterior. La forma final de la protena determina cmo interaccionar con el entorno. Si la forma de la protena es alterada por algn factor externo (por ejemplo, aplicndole calor, cidos o lcalis), no es capaz de cumplir su funcin celular. ste es el proceso llamado desnaturalizacin.

Cmo la desnaturalizacin afecta a los distintos niveles.

En la desnaturalizacin de la estructura cuaternaria, las subunidades de protenas se separan o su posicin espacial se corrompen. La desnaturalizacin de la estructura terciaria implica la interrupcin de: Enlaces covalentes entre las cadenas laterales de los aminocidos (como los puentes disulfuros entre las cistenas). Enlaces no covalentes dipolo-dipolo entre cadenas laterales polares de aminocidos.

Enlaces dipolo inducidos por fuerzas de Van Der Waals entre cadenas laterales no polares de aminocidos.

En la desnaturalizacin de la estructura secundaria las protenas pierden todos los patrones de repeticin regulares como las hlices alfa y adoptan formas aleatorias.

La estructura primaria, la secuencia de aminocidos ligados por enlaces peptdicos, no es interrumpida por la desnaturalizacin.

Prdida de funcin
La mayora de las protenas pierden su funcin biolgica cuando estn desnaturalizadas, por ejemplo, las enzimas pierden su actividad cataltica, porque los sustratos no pueden unirse ms al centro activo, y porque los residuos del aminocido implicados en la estabilizacin de los sustratos no estn posicionados para hacerlo.

Reversibilidad e irreversibilidad
En muchas protenas la desnaturalizacion no es reversible; esto depende del grado de modificacin de las estructuras de la protena.Aunque se ha podido revertir procesos de desnaturalizacin quitando el agente desnaturalizante, en un proceso que puede tardar varias horas incluso das; esto se debe a que el proceso de reestructuracin de la protena es tentativo, es decir, no asume su forma original inmediatamente, as muchas veces se obtienen protenas distintas a la inicial, adems con otras caractersticas como insolubilidad (debido a los agregados polares que puedan unrsele). Recientemente se ha descubierto que, para una correcta renaturalizacin, es necesario agregar trazas del agente desnaturalizante. Esto fue importante histricamente, porque condujo a la nocin de que toda la informacin necesaria para que la protena adopte su forma nativa se encuentra en la estructura primaria de la protena, y por lo tanto en el ADN que la codifica.

Algunos ejemplos comunes

Cuando se cocina el alimento, algunas de sus protenas se desnaturalizan. Esta es la razn por la cual los huevos hervidos llegan a ser duros y la carne cocinada llega a ser firme. Un ejemplo clsico de desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente y lquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa slida intercomunicada. Esa misma desnaturalizacin puede producirse a travs de una desnaturalizacin qumica, por ejemplo volcndola en un recipiente con acetona. Otro ejemplo es la nata (nombre que proviene de la desnaturalizacin), que se produce por calentamiento de la lactoalbmina de la leche (y que no tiene nada que ver con la crema) La protena de la leche se llama casena y se desnaturaliza cuando el pH de la leche se modifica. Esto se le conoce en lo cotidiano Se cort la leche. La casena se desnaturaliza cuando le agregas a un vaso de leche suficiente jugo de limn para modificar el pH de la leche.

Desnaturalizacin de cidos nucleicos

La desnaturalizacin de cidos nucleicos como el ADN por altas temperaturas produce una separacin de la doble hlice, que ocurre porque los enlaces o puentes de hidrgeno se rompen. Esto puede ocurrir durante la reaccin en cadena de la polimerasa; las cadenas del cido nucleico vuelven a unirse (renaturalizarse) una vez que las condiciones "normales" se restauran. Si las condiciones son restauradas rpidamente, las cadenas pueden no alinearse correctamente.

Factores desnaturalizantes

Los agentes que provocan la desnaturalizacin de una protena se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes fsicos (calor) y qumicos (detergentes, disolventes orgnicos, pH, fuerza inica). Como en algunos casos el fenmeno de la desnaturalizacin es reversible, es posible precipitar protenas de manera selectiva mediante cambios en: 1. la polaridad del disolvente, 2. la fuerza inica, 3. el pH, 4. la temperatura.

Efecto de la polaridad del disolvente sobre la estructura de las protenas

La polaridad del disolvente disminuye cuando se le aaden sustancias menos polares que el agua como el etanol o la acetona. Con ello disminuye el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la molcula proteica, provocando la agregacin y precipitacin. Los disolventes orgnicos interaccionan con el interior hidrfobo de las protenas y desorganizan la estructura terciaria, provocando su desnaturalizacin y precipitacin. La accin de los detergentes es similar a la de los disolventes orgnicos.

Estructura de las protenas

Un aumento de la fuerza inica del medio (por adicin de sulfato amnico, urea o cloruro de guanidinio, por ejemplo) tambin provoca una disminucin en el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la protena, ya que estos solutos (1) compiten por el agua y (2) rompen los puentes de hidrgeno o las interacciones electrostticas, de forma que las molculas proteicas se agregan y precipitan. En muchos casos, la precipitacin provocada por el aumento de la fuerza inica es reversible. Mediante una simple dilisis se puede eliminar el exceso de soluto y recuperar tanto la estructura como la funcin original. A veces es una disminucin en la fuerza inica la que provoca la precipitacin. As, las protenas que se disuelven en medios salinos pueden desnaturalizarse al dializarlas frente a agua destilada, y se renaturalizan cuando se restaura la fuerza inica original.

Efecto del pH sobre la estructura de las protenas

Los iones H y OH del agua provocan efectos parecidos, pero adems de afectar a la envoltura acuosa de las protenas tambin afectan a la carga elctrica de los gruposcidos y bsicos de las cadenas laterales de los aminocidos. Esta alteracin de la carga superficial de las protenas elimina las interacciones electrostticas que estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitacin. La solubilidad de una protena es mnima en su punto isoelctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsin electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados.
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Efecto de la temperatura sobre la estructura de las protenas

Cuando la temperatura es elevada aumenta la energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las protenas, y se desnaturalizan. Asimismo, un aumento de la temperatura destruye las interacciones dbiles y desorganiza la estructura de la protena, de forma que el interior hidrfobo interacciona con el medio acuoso y se produce la agregacin y precipitacin de la protena desnaturalizada.