Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Determinación de la concentración de
pigmentos carotenoides en harina de
residuos de chontaduro (Bactris gasipaes)*
RESUMEN
fruto (HRC), con el fin de contemplar su uso como
Introducción. Los residuos de chontaduro son colorante natural. Materiales y métodos. La
subproductos que se generan posterior a su consumo identificación y la cuantificación de los carotenoides
y/o transformación agroindustrial. En el Valle del se consiguió utilizando una columna YMC, columna
Cauca, Colombia tradicionalmente se consume el de fase inversa de carotenoides S-5 C30 (4.60
mesocarpio de chontaduro cocido con sal y/o miel. mm × 150 mm: tamaño de partícula, 5 µm), en un
Sin embargo, los residuos que se generan (“piel”) en equipo de HPLC utilizando un detector DAD con
la mayoría de los casos son desechados. Objetivo. longitud de onda fijada en 450 nm. Resultados.
Determinar la composición de los pigmentos Los resultados obtenidos en la HRC evidenciaron
carotenoides responsables del color característico de presencia de violaxantina (1.35 ± 0.10 µg/g), luteína
la harina obtenida a partir de los residuos de este (4.87 ± 0.20 µg/g), zeaxantina (4.37 ± 0.20 µg/g),
* Artículo derivado del proyecto de investigación “Microencapsulación de pigmentos carotenoides presentes en residuos de
chontaduro (Bactris gasipaes) y su evaluación como colorante natural en productos de panificación” financiado por la Dirección
de Investigaciones (DIPAL) de la Universidad Nacional de Colombia-Sede Palmira a través del Proyecto Hermes 19784, realizado
entre Febrero de 2014 y Septiembre de 2015. ** Químico y tecnólogo en Alimentos, magíster en Educación, Tesista de maestría en
Ingeniería Agroindustrial de la Universidad Nacional de Colombia-Sede Palmira, docente de la Universidad del Valle-Sede Palmira,
Colombia. *** Ingeniero Agroindustrial, doctor en Ciencia y Tecnología en Alimentos, líder del Grupo de Investigación en Procesos
Agroindustriales (GIPA), docente de la Universidad Nacional de Colombia-Sede Palmira.
15-cis β caroteno (3.86 ± 1.40 µg/g), 13-cis β como colorante natural y provitamina A para la
caroteno (25.12 ± 0.23 µg/g), All-trans β caroteno industria alimentaria. Por otra parte, este es uno de los
(125.43 ± 3.20 µg/g), 9-cis β caroteno (17.10 ± 0.38 primeros estudios de cuantificación de carotenoides
µg/g) y α-caroteno (12.59 ± 2.80 µg/g). Conclusión. en harina de epicarpio (“piel”) de chontaduro.
La HRC es una importante fuente de carotenoides,
principalmente de All-trans β caroteno, pigmento Palabras clave: β-caroteno, colorante natural,
carotenoide que puede ser una fuente importante epicarpio, extracción, HPLC
INTRODUCCIÓN
hidrofóbicos que dan origen al color amarillo,
Los carotenoides, denominados también como naranja, violeta y rojo en diversos tejidos
tetraterpenoides, son pigmentos lipofílicos, vegetales como también en algunos tejidos de
87
Determinación de la concentración de pigmentos carotenoides en harina de residuos de chontaduro (Bactris gasipaes)
origen animal. Los carotenoides predominan de fibra, grasa, ocho aminoácidos esenciales, y
generalmente en el reino vegetal y están contenidos bajo contenido de sodio y azúcares (Yuyama et
en tallo, hojas, flores y frutos de muchas plantas, al. 2003). El fruto puede consumirse en fresco
con menor intensidad en la raíz (Namitha y Negi, y cocinado, se utiliza en la agroindustria para
2010). Los carotenoides se clasifican en carotenos la fabricación de harina, almidón, conservas,
y xantofilas. Los carotenos están formados por compotas, mermeladas, jaleas y otros productos
carbono e hidrógeno, presentan características de repostería. A su vez, también son comestibles
de hidrocarburos y se disuelven mejor en hexano la flor, el endospermo y el cogollo (Bolanho et
y éter de petróleo. El β-caroteno, α-caroteno al. 2014).
y el licopeno son los más representativos de
este grupo de carotenoides. Las xantofilas están Sin embargo, los residuos de chontaduro (Bactris
formadas por carbono, hidrogeno y oxígeno, gasipaes), entendiendo como residuos al epicarpio
es decir, son la representación oxidada de los con trazas de mesocarpio (“cascaras”), hasta el
carotenoides. Se disuelven fácilmente en metanol momento han sido poco estudiados desde el
y etanol. Entre estas están: la violaxantina, la punto de vista del contenido de carotenoides y
luteína, la fucoxantina, el β-apo-8-carotenal, entre propiedades antioxidantes, ya que en la mayoría
otros. (Saini et al. 2015). Algunos carotenoides de los casos son desechados, o empleados en la
por su actividad antioxidante son fuente de alimentación animal (Perea et al. 2013).
provitamina A, es decir, son precursores de retinol,
la forma activa de la vitamina A. Los carotenoides En el Valle del Cauca, el mesocarpio del fruto
más abundantes de la dieta que se convierten de chontaduro se emplea para la alimentación
en vitamina A son: β-caroteno, α-β-caroteno y humana y animal, se aprovecha principalmente
criptoxantina con β-caroteno que es el precursor como fruto cocido, harinas y bebidas fermentadas;
más importante de vitamina A, principalmente sin embargo, ha sido escaso el uso que se le ha
debido a su prevalencia en algunos vegetales dado al epicarpio del fruto. Dado lo anterior, el
(Haskell, 2013). objetivo de este estudio consistió en evaluar la
concentración de los pigmentos carotenoides
Por otra parte, Colombia por su diversidad de la harina obtenida a partir de los residuos
climática posee diversas matrices naturales de (“cáscaras”) de frutos de chontaduro (Bactris
estos pigmentos, entre los que se destacan los gasipaes).
frutos de chontaduro (Bactris gasipaes) como una
fuente promisoria de pigmentos carotenoides.
El contenido de carotenoides en frutos de MATERIALES Y MÉTODOS
chontaduro es muy variable de acuerdo con
Obtención de la harina de residuos de
la región de origen, las condiciones de cultivo,
chontaduro
el estado de maduración, el tratamiento
térmico aplicado, entre otros. Jatunov et al. En diferentes puntos del mercado municipal
(2010) y Quesada et al. (2011) realizaron de Palmira-Valle del Cauca (Colombia) fueron
estudios del contenido de carotenoides en adquiridos 15 kilogramos de residuos de
frutos de chontaduro de diferentes regiones y chontaduro (Bactris gasipaes) cocido compuestos
encontraron diferencias significativas en todas por epicarpio y restos de mesocarpio. Las
las variedades evaluadas. Los anteriores autores muestras fueron sometidas a un proceso de
reportan que el contenido total de carotenoides clasificación y limpieza con hipoclorito a 150
en mesocarpio de chontaduro puede alcanzar ppm y se deshidrataron por convección forzada
valores promedio de 120 µg/g en fruta fresca, (60 ºC, y velocidad del aire 3 m.s-1) hasta obtener
siendo el β-caroteno el carotenoide mayoritario un valor de humedad entre el 9.50 – 11 %. Luego
con valores medios de 45 %, seguido del se realizó un proceso de molienda y se pasaron
γ-caroteno 32 % y el licopeno 18.50 %. Unido a las muestras por un juego de tamices (malla 60)
los carotenoides, este fruto posee altos niveles para homogeneizar el tamaño de las mismas
88
Producción + Limpia - Enero - Junio de 2016.Vol.11, No.1 - J. M. Girón et al - 85•93
a un valor menor e igual a 0.25 mm. La harina adicionaron 25 mL de éter: hexano (1:1) y 50
obtenida fue almacenada en recipiente de vidrio mL de agua destilada. El KOH fue eliminado por
estéril a 5 °C bajo la aplicación de una atmósfera lavados sucesivos con una solución al 10 % de
de nitrógeno y protección a la luz. NaCl. El extracto se secó bajo una atmósfera de
N2 y se disolvió en la fase móvil para HPLC.
Extracción de pigmentos carotenoides
Identificación y cuantificación de pigmen-
La extracción de pigmentos carotenoides de
tos carotenoides
la harina de residuos de chontaduro se realizó
siguiendo el método sugerido por Rodríguez- La cuantificación de pigmentos carotenoides se
Amaya y Kimura (2004), Chávez et al. (2005) y determinó mediante la técnica de cromatografía
Ceballos et al. (2012). Para lo anterior, se partió líquida de alta resolución (CLAR) siguiendo
de 1 gramo de muestra que se depositó en un el método sugerido por Rodríguez-Amaya y
tubo Falcón con 10 mL de acetona. Después Kimura (2004) y Ceballos et al. (2012). Para lo
de 10 min, se añadieron 10 mL de éter de anterior 15 mL del extracto se transfirieron
petróleo (0.1 % de antioxidante BHT) y se en tubos de vidrio estériles recubiertos con
mezclaron utilizando un Ultraturrax (T18 IKA papel aluminio y se concentraron mediante un
Janke y Kunkel) durante 1 min. A la mezcla se evaporador de nitrógeno (N-Berlín, MA, EE.UU.).
le adicionaron 5 mL de agua destilada y luego Inmediatamente antes de la inyección, en el mismo
fueron centrifugadas, utilizando una centrífuga tubo, el extracto seco se disolvió totalmente en
(Eppendorf 5804R, Hamburgo, Alemania), a 1.5 mL (1:1) de metanol y metil terc-butil éter
3000 rpm, durante 10 min, a 10 °C. Se recogió (MeOH: MTBE) grado-HPLC; después la muestra
la fase orgánica y la extracción se repitió en se sometió a ultrasonido por 10 s y se agitó en
el residuo, centrifugando la muestra con 5 mL un vórtex VWR de múltiples tubos (2400 rpm;
de acetona y 5 mL de éter de petróleo (0.1 % 60 s) y se filtró a través de un filtro de 0.22-0.24
de antioxidante BHT). En total, se realizaron µm de politetrafluoroetileno. La identificación y
cuatro extracciones hasta que los residuos se la cuantificación de los carotenoides se consiguió
tornaron completamente incoloros, indicando la utilizando una columna YMC, columna de fase
culminación de la extracción de los pigmentos inversa de carotenoides S-5 C30 (4.60 mm × 150
responsables del color en la harina de residuos mm: tamaño de partícula, 5 µm), en un equipo
de chontaduro. La fase orgánica, luego, fue de HPLC (Agilent Technologies1200, Waldbronn,
mezclada con 10 mL de solución de NaCl 0.1 N Alemania), utilizando un detector DAD con
y se centrifugó a 3000 rpm, durante 7 min, a 10 longitud de onda fijada en 450 nm. Los picos se
°C. Este proceso de lavado se repitió dos veces
identificaron mediante la comparación del tiempo
adicionales. La fase acuosa fue retirada con una
de retención y características espectrales contra
micropipeta Pasteur y la fase lipídica se llevó a un
un estándar puro a partir de CaroteNature
volumen de 40 mL, con éter de petróleo (0.1 %
GmbH, Lupsingen, Suiza: Violaxantina grado-
de antioxidante BHT).
HPLC 95 %; Zeaxantina grado-HPLC 97%;
Licopeno grado-HPLC 95 %, β-Criptoxantina
Saponificación
grado-HPLC 97 %; Luteína grado-HPLC 97%;
Para la saponificación de la muestra, el extracto se α-carotenos grado-HPLC 97 %; β-carotenos
disolvió en 40 mL de solución alcohólica de KOH grado-HPLC 96 %; (E/Z) –Fitoeno grado-HPLC
al 10 % diluido en metanol. La solución se colocó 98 % y Xantofilas grado-HPLC 90 %; todos
en plancha agitadora, en erlenmeyer recubierto marca Sigma-Aldrich Chemical Corporation. El
con aluminio, se saturó con gas nitrógeno (N2) perfil de pigmentos carotenoides se determinó
y el recipiente se dejó completamente sellado mediante la integración del área del pico contra
durante 16 horas en refrigeración (4°C), para la curva estándar respectiva. Los carotenoides
permitir la hidrólisis. A continuación, la mezcla contenidos en las muestras se estimaron con
se transfirió a un embudo de separación, y se base en peso seco.
89
Determinación de la concentración de pigmentos carotenoides en harina de residuos de chontaduro (Bactris gasipaes)
µg/g b.s
# Pico Carotenoide identificado tR Área
(base seca)
1 Violaxantina 7.38 17018 1.35 ± 0.10
En la figura 1, se puede observar el cromatograma un cromóforo que permite que estos sean
de identificación de pigmentos carotenoides cuantificados por métodos espectrofotométricos
presentes en harina de piel de chontaduro (HRC). como el UV/VIS o mediante el empleo de técnicas
Molecularmente la resonancia de conjugación de instrumentales como lo es la cromatografía líquida
los dobles enlaces que presentan las estructuras de alta resolución (CLAR) (Rodríguez-Amaya,
de los pigmentos carotenoides conforman 2001; Scott, 2001).
90
Producción + Limpia - Enero - Junio de 2016.Vol.11, No.1 - J. M. Girón et al - 85•93
Una revisión de la literatura indica que las contenido de carotenoides es altamente variable
investigaciones adelantadas se han centrado entre el mesocarpio de chontaduro y la harina
en estudiar la concentración de pigmentos de piel de chontaduro. Lo anterior obedece a
carotenoides presentes en la pulpa (mesocarpio) la reorientación molecular que presentan los
de chontaduro en fresco, cocido y en harina, sin pigmentos debido a las condiciones térmicas y
reportar la concentración de los pigmentos mecánicas durante el secado y la molienda que
carotenoides presentes en la piel (epicarpio). En originan una estabilización de bandas isoméricas
este sentido, en relación con la concentración de (Rodríguez-Amaya et al. 2008). Otros estudios
carotenoides obtenida en otros estudios, Jatunov existentes han evidenciado que no solo el
et al. (2010) adelantaron determinaciones en tratamiento térmico incide en la concentración
pulpa de chontaduro cocido de diferentes países o disminución de carotenoides en frutos de
encontrando para la variedad Costa Rica 52 chontaduro, sino que también difiere dependiendo
± 0.01µg/g y para la variedad Brasil 68 ± 0.23 del origen del material vegetal, la variedad, el
µg/g. Por otra parte, estudios reportados por estado fisiológico, la variabilidad climática durante
Rosso y Mercadante (2007) en frutos nativos el cultivo, las condiciones de almacenamiento y
de la Amazonia Brasileña registraron valores de el procedimiento de extracción (Rodríguez-
197.66 µg/g de carotenoides totales en pulpa Amaya, 1996; Rosso y Mercadante, 2007). Dado
de chontaduro en fresco; Rojas-Garbanzo et al. lo anterior, los resultados obtenidos muestran
(2011) realizaron estudios en pulpa de frutos que la concentración de carotenoides en harina
cocidos y en harina de pulpa de chontaduro de residuos de frutos chontaduro promisorios
procedentes de Costa Rica, registrando valores del Valle del Cauca, Colombia, puede variar
de carotenoides totales de 286.90 ± 0.70 µg/g significativamente de acuerdo con el tratamiento
en frutos cocidos y 237.70 ± 0.60 µg/g en térmico aplicado (cocción y secado en horno),
harina de pulpa de chontaduro. Al comparar los el acondicionamiento mecánico (molienda y
resultados obtenidos con los anteriormente tamizado) y la parte evaluada del fruto (epicarpio
mencionados, se puede evidenciar que el y/o mesocarpio).
91
Determinación de la concentración de pigmentos carotenoides en harina de residuos de chontaduro (Bactris gasipaes)
Todos los carotenoides identificados (tabla 1) En este orden de ideas, se observa una significativa
fueron reportados en términos de concentración correlación metabólica de los pigmentos
en base seca, de acuerdo con lo sugerido por encontrados en la harina de epicarpio, con
Rodríguez-Amaya (1996) y Rosso et al. (2007); respecto a los de mesocarpio. En este estudio
al igual, todas las muestras analizadas fueron el 13 Cis β-caroteno y el 15 Cis β-caroteno
saponificadas debido al alto contenido de fueron encontrados en las muestras de harina
extracto etéreo que presentan los frutos de de residuos procedentes de frutos de palma de
chontaduro (Bactris gasipaes). chontaduro, lo que explica la no cuantificación
de β-criptoxantina, debido a que de acuerdo con
Un análisis detallado de los pigmentos la ruta molecular de biosíntesis retrosintética
carotenoides que se presentan en la tabla 1 que siguen los carotenoides se favorecería la
muestra que la violaxantina es el carotenoide formación de fitoeno (Cazzonelli et al. 2010).
del grupo de las xantofilas que presentó la
concentración más baja en la harina de residuos de Por otra parte, el efecto del tratamiento térmico
chontaduro. En este sentido Rojas-Garbanzo et al. sobre los pigmentos carotenoides ha sido un
(2011) no encontraron presencia de violaxantina tema de gran interés para los procesadores de
en harina de mesocarpio de chontaduro pero alimentos. Normalmente el tratamiento térmico
sí identificaron el 9-cis licopeno demostrando de cocción o secado reduce o aumenta el
una tendencia de variabilidad de los frutos. Sin contenido de carotenoides y puede cambiar las
embargo, en contraste con otras variedades de propiedades bioactivas de diversos compuestos
frutos de palma de chontaduro, es importante (Gama y Sylos, 2005). Sin embargo, de acuerdo con
resaltar que en este estudio se identificaron tres los resultados obtenidos en este estudio, a pesar
pigmentos del grupo de las xantofilas (Pico 1, 2 y
del tratamiento de secado aplicado a los residuos
3) con una representación del 16.90 %.
cocidos, se logró cuantificar carotenoides que
están presentes en el mesocarpio de chontaduro
El perfil encontrado en este estudio para la harina
cocinado. En este sentido Rodríguez-Amaya
de residuos de chontaduro permite observar
et al. (2008) reportaron que el tratamiento
la identificación de los picos característicos
térmico controlado permite un reordenamiento
de las xantofilas (violaxantina, zeaxantina y la
asociativo de carotenoides con ácidos grasos
luteína), las cuales ya han sido identificadas en el
o proteínas de la fruta (lipoproteínas), a su vez,
mesocarpio de frutos de chontaduro de acuerdo
con los resultados obtenidos por Jatunov et al. por la ciclación de algunos de los isómeros
(2010).Valores similares se han cuantificado para α-caroteno y el desprendimiento de grupos
β-caroteno, γ-caroteno y α-caroteno como lo hidroxilo (OH-) con conjugación de moléculas
han informado, para pulpa de chontaduro, Rosso de agua en uno de los anillos cíclicos insaturados
y Mercadante (2007) y Jatunov et al. (2010). Es desactivados por las transferencias de calor
de anotar que los porcentajes de equivalencia desde el agua a la fruta por conducción (Martínez
de carotenoides obtenidos en este estudio y Ordoñez, 2015).
presentan similitud a los reportados por Rojas-
Garbanzo et al. (2011), quienes encontraron Es importante anotar que el All-trans β caroteno
una fracción entre el 70-90 % de equivalencia y el 13-cis β caroteno fueron los pigmentos que
de β-caroteno, y a su vez confirmaron la presentaron la mayor concentración en la harina
identificación del 13 Cis β-caroteno y el 15 de residuos de chontaduro. A su vez, son dos de
Cis β-caroteno en frutos de chontaduro. Por los principales pigmentos carotenoides que se
otra parte, Quesada et al. (2011) reportaron constituyen como fuente de provitamina A. Según
que la mayor fracción del perfil de pigmentos lo reportado por Saini et al. (2015), el All-trans
carotenoides para el mesocarpio de chontaduro β caroteno presenta una conversión del 100 %
variedad Ecuador y Yurimaguas correspondió a provitamina A y el 13-cis β caroteno presenta
para el pigmento E-β-caroteno. una conversión del 53 %. Los carotenoides tienen
92
Producción + Limpia - Enero - Junio de 2016.Vol.11, No.1 - J. M. Girón et al - 85•93